Wirkungen von CCCP-induzierter mitochondrialer Entkopplung und Cyclosporin A auf Zellvolumen, Zellverletzung und Vorkonditionierungsschutz isolierter Kaninchen-Kardiomyozyten

Eine Zellschwellung kann zu einer akuten Zellverletzung nach Ischämie / Reperfusion beitragen. Die potenzielle Rolle der mitochondrialen Entkopplung und die daraus resultierende mitochondriale Schwellung aufgrund der Öffnung der mitochondrialen Permeabilitätsübergangspore (MPTP) wurden in einem in vitro ischämisch pelletierten isolierten Kaninchen-Kardiomyozytenmodell unter Verwendung des Protonophors Carbonylcyanid m-Chlorphenylhydrazone (CCCP) untersucht, um Mitochondrien zu entkoppeln. Cyclosporin A (CsA) wurde eingesetzt, um die MPTP-Öffnung zu hemmen. Das Zellvolumen wurde durch einen Zellflotations-Dichtegradienten-Assay unter Verwendung von Bromododecan bestimmt. Die Zelllebensfähigkeit nach einem osmotischen Stress wurde durch Trypanblau-Permeabilität bestimmt. Die ischämische Vorkonditionierung (IPC) erleichterte die Volumenregulierung nach einem osmotischen Stress. Die ischämische Zellschwellung wurde durch IPC reduziert. IPC schützte ischämisch pelletierte Zellen, aber CsA hatte keine signifikanten Auswirkungen auf Verletzungen oder IPC-Schutz. CCCP-Ischämie beschleunigte die Rate ischämischer Kontrakturen und Verletzungen und schaffte den IPC-Schutz ab. Der IPC-Schutz wurde von CsA wiederhergestellt. In CCCP-ischämisch-entkoppelten Zellen, die einem reduzierten (170 mOsm) osmotischen Stress ausgesetzt waren, boten CsA und IPC einen unabhängigen und additiven Schutz. Chelerythrin und 5-Hydroxydecanoat (5-HD) blockierten IPC, verringerten jedoch nicht den CsA-Schutz. Die Elektronenmikroskopie bestätigte, dass die CCCP-Ischämie eine Schwellung der Mitochondrienmatrix induzierte, die durch CsA reduziert wurde. Die Kardioprotektion durch IPC und CsA ging mit einer proportionalen Verringerung der Zellschwellung einher. Die morphometrische Analyse der Elektronenmikroskopaufnahmen zeigte, dass die mitochondrialen Volumenanteile im CsA/CCCP signifikant reduziert waren.29.8 +/- 2.3 %, P < 0.004) und IPC/CsA/CCCP (31.5 +/- 1.7 %, P < 0.0008) Gruppen im Vergleich zur CCCP-ischämischen Gruppe (40.5 +/- 1.7 %) Die IPC/CCCP-Gruppe (39.5 +/- 4.2 %) unterschied sich nicht signifikant von der CCCP-ischämischen Gruppe. NIM 811, ein CSA-analoger MPTP-Blocker ohne Calcineurin-inhibitorische Aktivität, bot einen ähnlichen Schutz wie CsA. Die Ergebnisse legen nahe, dass der CsA-Schutz teilweise durch eine Verringerung der mitochondrialen Schwellung vermittelt werden kann.

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