Los efectos del desacoplamiento mitocondrial inducido por CCCP y de la ciclosporina A sobre el volumen celular, la lesión celular y la protección previa al acondicionamiento de cardiomiocitos aislados de conejo

La hinchazón celular puede contribuir a la lesión celular aguda posterior a la isquemia/reperfusión. El papel potencial del desacoplamiento mitocondrial y la hinchazón mitocondrial resultante, debido a la apertura del poro de transición de permeabilidad mitocondrial (MPTP), se examinaron en un modelo de cardiomiocitos aislados de conejo ischémicamente peletizados in vitro utilizando el protonóforo, cianuro de carbonilo m-clorofenilhidrazona (CCCP) para desacoplar las mitocondrias. Se empleó ciclosporina A (CsA) para inhibir la apertura de MPTP. El volumen celular se determinó mediante un ensayo de gradiente de densidad y flotación celular, utilizando bromododecano. La viabilidad celular, posterior a un estrés osmótico, fue determinada por la permeabilidad del azul tripano. El preacondicionamiento isquémico (CIP) facilitó la regulación del volumen tras un estrés osmótico. La inflamación de las células isquémicas se redujo con la CIP. La CPI protegía las células granuladas isquémicamente, pero la CsA no tuvo efectos significativos en la lesión o la protección de la CPI. La isquemia del CPCC aceleró las tasas de contractura y lesión isquémicas, y abolió la protección del CPI. La protección IPC fue restaurada por CsA. En las células desenganchadas de CCCP, isquémicas, sometidas a un estrés osmótico reducido (170 mOsm), la CsA y la CPI proporcionaron protección independiente y aditiva. La queleritrina y el 5-hidroxidecanoato (5-HD) bloquearon la CPI, pero no redujeron la protección de la CsA. La microscopía electrónica confirmó que la isquemia de CCCP indujo inflamación de la matriz mitocondrial que fue reducida por la AsC. La cardioprotección por CIP y CsA se acompañó de reducciones proporcionales en la inflamación celular. El análisis morfométrico de las fotomicrografías electrónicas demostró que las fracciones de volumen mitocondrial se redujeron significativamente en el CsA / CCCP (29.8 +/- 2.3%, P < 0,004) e IPC / CsA / CCCP (31.5 +/- 1.7%, P < 0.0008) en comparación con el grupo CCCP-isquémico (40.5 +/- 1.7%) Grupo CIP / CCCP (39.5 +/- 4.2%) no fue significativamente diferente del grupo CCCP-isquémico. NIM 811, un bloqueador MPTP análogo a la CsA sin actividad inhibidora de calcineurina, proporcionó una protección similar a la CsA. Los resultados sugieren que la protección de la CsA puede, en parte, estar mediada por la reducción de la hinchazón mitocondrial.

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