Électrophorèse sur gel capillaire

Résumé

La biochimie analytique s’intéresse beaucoup à la séparation et à l’identification de polymères biologiquement importants, tels que les protéines d’ADN et les molécules complexes de glucides (1,2). Pour les unités d’ADN monocaténaire relativement courtes (c’est-à-dire les oligonucléotides) et les molécules de glucides, il est nécessaire de séparer par une seule différence de base (pour le séquençage de l’ADN) (3) ou même pour une longueur de chaîne identique avec une séquence différente (identification des amorces, des sondes et des molécules d’ADN antisens) (3,4). Pour les molécules d’ADN double brin, il est intéressant d’analyser et d’identifier des molécules d’ADN sous forme de fragments de restriction ou de produits de PCR. L’utilisation de différents types de supports de tamisage nous permet de réaliser ce type de séparations. En électrophorèse sur gel capillaire, on peut utiliser des matrices de tamisage réticulées ou non réticulées (5, 6, 7). Les gels réticulés, c’est-à-dire les gels chimiques, ont une taille de pores bien définie. Les gels non réticulés, ou dits physiques, ont une structure poreuse dynamique. Cette différence majeure offre aux réseaux de polymères linéaires non réticulés une flexibilité beaucoup plus élevée par rapport aux gels réticulés. On peut opérer à des températures élevées (jusqu’à 50-70 °C) tout en appliquant des intensités de champ extrêmement élevées (plage allant jusqu’à 103 V/cm) sans endommager les formulations du réseau polymère linéaire (8. Il est important de noter que les gels réticulés ne sont pas utilisables dans de telles conditions extrêmes (9). L’autre avantage principal du système à réseau polymère linéaire est qu’il peut être facilement remplacé dans la colonne capillaire en rinçant simplement la matrice de gel à travers le capillaire par pression ou sous vide. Par conséquent, si la colonne est contaminée, le gel est facilement remplacé prolongeant la durée de vie du système. En utilisant le concept remplaçable, il existe une possibilité d’utilisation de l’injection sous pression par rapport aux gels réticulés où le mode d’injection électrocinétique est la seule possibilité (10). Il est important de noter qu’en plus de la commodité, l’injection sous pression permet une analyse quantitative.

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