Elektroforeza w żelu kapilarnym

Streszczenie

istnieje duże zainteresowanie biochemią analityczną w zakresie separacji i identyfikacji biologicznie ważnych polimerów, takich jak białko DNA i złożone cząsteczki węglowodanów (1,2). W przypadku stosunkowo krótkich jednoniciowych jednostek DNA (tj. oligonukleotydów) i cząsteczek węglowodanów istnieje potrzeba oddzielenia przez pojedynczą różnicę zasad (dla sekwencjonowania DNA) (3) lub nawet dla identycznej długości łańcucha z inną sekwencją (identyfikacja starterów, sond i antysensownych cząsteczek DNA) (3,4). W przypadku dwuniciowych cząsteczek DNA istnieje zainteresowanie analizą i identyfikacją cząsteczek DNA w postaci fragmentów restrykcyjnych lub produktów PCR. Zastosowanie różnego rodzaju mediów przesiewających pozwala nam na tego typu separacje. W elektroforezie w żelu kapilarnym można zastosować sieciowane lub niesieciowane matryce przesiewające (5, 6, 7). Żele usieciowane, czyli żele chemiczne, mają dobrze zdefiniowaną wielkość porów. Niezwiązane, czyli tzw. żele fizyczne, mają dynamiczną strukturę porów. Ta zasadnicza różnica zapewnia nieusieciowane liniowe Sieci polimerowe o znacznie większej elastyczności w porównaniu do usieciowanych żeli. Można pracować w wysokich temperaturach (do 50-70°C) przy zastosowaniu ekstremalnie wysokich natężeń pola (do 103 V / cm) bez uszkodzenia liniowych preparatów sieci polimerowej (8. Należy zauważyć, że żele usieciowane nie nadają się do użytku w takich ekstremalnych warunkach (9). Inną główną zaletą liniowego systemu sieci polimerowej jest to, że można go łatwo zastąpić w kolumnie kapilarnej, po prostu przepłukując matrycę żelową przez kapilarę za pomocą ciśnienia lub próżni. Dlatego, jeśli kolumna zostanie zanieczyszczona, żel można łatwo wymienić, przedłużając żywotność systemu. Stosując koncepcję wymienną, istnieje możliwość zastosowania wtrysku ciśnieniowego w porównaniu z żelami usieciowanymi, w których jedyną możliwością jest Wtrysk elektrokinetyczny (10). Ważne jest, aby pamiętać, że oprócz wygody, Wtrysk ciśnieniowy umożliwia analizę ilościową.

Dodaj komentarz

Twój adres e-mail nie zostanie opublikowany.