La capacité de mûrir et de féconder des ovocytes d’espèces menacées peut nous permettre de maintenir la biodiversité génétique et mondiale. Les spermatozoïdes de l’épididyme peuvent être la dernière chance d’assurer la préservation du matériel génétique après une blessure ou la mort d’un animal précieux. Des études ont été menées pour déterminer si les spermatozoïdes et les ovocytes de l’épididyme peuvent être utilisés pour produire des embryons et une progéniture viables. Le but de cette étude était de déterminer combien de temps les spermatozoïdes de chats contenus dans l’épididyme restaient mobiles et avaient des membranes intactes lorsqu’ils étaient conservés à 4 ° C, et de déterminer si ces spermatozoïdes conservés étaient capables de féconder les ovocytes. L’épididyme a été conservé immédiatement dans une solution saline tampon phosphate à 4 ° C pendant 1, 3 et 6 jours. L’observation de la qualité et de la viabilité des spermatozoïdes après conservation a été réalisée par coloration vitale acrosom et Hoechst-Propidium Iode. Les fonctions biologiques des spermatozoïdes ont été évaluées par une technique de culture in vitro pour la fécondation, la micro-fécondation et le taux de développement embryonnaire en milieu CR1aa. Les résultats ont montré que la motilité moyenne des spermatozoïdes prélevés sur le canal déférent, la queue et l’épididyme du corps ne diminuait pas de manière significative (P > 0,05) à partir de 0, 1, 3 et 6 jours de temps de conservation (à partir de 83.0%, 80.2%, 79.0%; 80.9%, 75.0%, 75.5%; 52.0%, 63.2%, 55.0% à 34,6%, 34,6%, 33,3%, respectivement). Les résultats généraux ont montré que les spermatozoïdes de l’épididyme conservés pendant 1, 3 et 6 jours peuvent être utilisés pour la FIV. Le taux de clivage embryonnaire produit par la technique de FIV utilisant des spermatozoïdes prélevés sur des épididymes conservés pendant 1, 3 et 6 jours était respectivement de 33,3, 26,7 et 20,0% et significativement différent (p< 0,05) de celui du contrôle (50,0%). En conclusion, les spermatozoïdes contenus dans les épididyimis conservés à 4 ° C dans du PBS (Solution saline Tampon Phospate) pendant 1 à 6 jours peuvent être utilisés pour la FIV et la production in vitro d’embryons de chat.