La capacidad de madurar y fertilizar ovocitos de especies en peligro de extinción puede permitirnos mantener la biodiversidad genética y global. Los espermatozoides del epidídimo pueden ser la última oportunidad para garantizar la preservación de los materiales genéticos después de la lesión o muerte de un animal valioso. Se han realizado estudios para determinar si tanto los espermatozoides del epidídimo como los ovocitos pueden utilizarse para producir embriones y crías viables. El propósito de este estudio fue determinar cuánto tiempo los espermatozoides de los gatos contenidos en el epidídimo permanecían móviles y tenían membranas intactas cuando se conservaban a 4 ° C, y determinar si esos espermatozoides conservados eran capaces de fertilizar los ovocitos. El epidídimo se conservó inmediatamente en solución salina tampón de fosfato a 4 ° C durante 1, 3 y 6 días. La observación de la calidad y viabilidad de los espermatozoides después de la preservación se realizó mediante tinción vital de acrosom y Hoechst-Propidio Yodado. Las funciones biológicas de los espermatozoides se evaluaron mediante técnica de cultivo in vitro para fertilización, micro fertilización y tasa de desarrollo embrionario en medio CR1aa. Los resultados mostraron que la motilidad promedio de los espermatozoides recolectados de conductos deferentes, cauda y cuerpo epidídimo disminuyó de manera no significativa (P > 0.05) a partir de 0, 1, 3 y 6 días de tiempos de conservación (desde 83.0%, 80.2%, 79.0%; 80.9%, 75.0%, 75.5%; 52.0%, 63.2%, 55.0% a 34,6%, 34,6% y 33,3%, respectivamente). Los resultados generales mostraron que los espermatozoides del epidídimo preservados durante 1, 3 y 6 días se pueden usar para la FIV. La tasa de escisión embrionaria producida por la técnica de FIV utilizando espermatozoides recolectados de epidídimo preservado durante 1, 3 y 6 días fue de 33,3, 26,7 y 20,0%, respectivamente, y significativamente diferente (p < 0,05) de la de controll (50,0%). En conclusión, los espermatozoides contenidos en la epidídima conservados a 4 ° C en PBS (Solución Salina Tampón de fosfatos) durante 1-6 días se pueden utilizar para la FIV y la producción in vitro de embriones de gato.