Unit 731 ble spesielt opprettet av Den Japanske militære I Harbin, Kina (da en del Av Japansk-okkuperte Manchukuo) for å forske på biologisk og kjemisk krigføring ved å utføre menneskelig eksperimentering på mennesker i alle aldre. Under Den Andre Sino-Japanske Krig og senere Andre Verdenskrig hadde Japanerne innkapslet byllepest, kolera, kopper, botulisme, miltbrann og andre sykdommer i bomber, som de rutinemessig ble sluppet over Kinesiske stridende og ikke-stridende. Ifølge 2002 International Symposium on The Crimes Of Bacteriological Warfare, antall mennesker drept av Den Keiserlige Japanske Hæren bakterie krigføring og menneskelige eksperimenter var rundt 580.000.I løpet Av de første månedene av krigen mot Usa etter Angrepet På Pearl Harbor, planla Japan å bruke biologiske våpen mot Amerikanere. Under Felttoget På Filippinene i Mars 1942 vurderte Japanerne å slippe ut 90 kg (200 lbs) pestbærende lopper (ca.150 millioner insekter) i hvert av ti separate angrep, Men Amerikanerne overgav Seg I Bataan før planen ble implementert. Rundt November 1944 lanserte Japan totalt 9.300 brann-og antipersonellbomber båret av ballonger som var designet for å stige til 10.000 m (30.000 ft), og deretter bli feid østover av jetstrømmen til Det Kontinentale Usa. De drepte seks amerikanske sivile nær Bly, Oregon; krasjet inn i en gård I Medford, Oregon; og forårsaket en kortslutning i kraftledninger som leverer strøm til kjernereaktorens kjølepumper i Manhattanprosjektets produksjonsanlegg På Hanford-Anlegget I Washington. Et backup system gjenopprettet strøm. Under Slaget Ved Iwo Jima ble et annet biologisk angrep vurdert mot de invaderende Amerikanerne. Pilot Shoichi Matsumoto fortalte senere hvordan to glidefly med patogener skulle slepes over kampen og slippes ut, men glideflyene som skulle ta av Fra Fastlandet Japan til Matsumotos flyplass I Pingfang-Distriktet som forberedelse til angrepet, nådde aldri målet.