TEXT

tratamentul pentru Staphylococcus aureus rezistent la meticilină (MRSA) a fost complicat prin creșterea ratelor de rezistență la antibiotice. Tulpinile MRSA exprimă proteina de legare a penicilinei 2a (PBP2a), codificată de mecA, care asigură rezistență la lactame-lactame prin protejarea serinei reactive într-o fisură îngustă, inaccesibilă, permițând sinteza peretelui celular să continue în prezența antibioticului (1, 2). Ceftobiprolul și ceftarolina sunt cefalosporine anti-MRSA care inhibă PBP2a la concentrații terapeutice utile. Grupul R2 de ceftobiprol se extinde în fanta îngustă a PBP2a pentru a accesa situsul activ, în timp ce legarea ceftarolinei determină o schimbare alosterică a PBP2a, dezvăluind situsul activ pentru legarea de o a doua moleculă (3, 4). Ceftobiprolul a fost evaluat în studiile clinice, iar CEFTAROLINA este aprobată de FDA pentru tratamentul infecțiilor cutanate și ale structurii pielii, inclusiv a celor cauzate de MRSA (5-10).

studiile anterioare din grupul nostru au arătat că trecerea tulpinii COL în ceftobiprol Selectează mutanții rezistenți cu mutații în PBP2a (11). Acest studiu examinează dacă pasajul ceftarolinei selectează și mutații similare. Experimentele de trecere au fost efectuate cu două medii MRSA diferite: COL, un izolat arhaic rezistent omogen din 1961 și SF8300, o tulpină MRSA contemporană neomogenă rezistentă USA300. COLnex și SF8300ex, tulpini derivate mecA-negative ale COLn și SF8300, au fost obținute prin (12) excizarea cromozomului casetofon stafilococ cromozom mec (SCCmec) (13). MecA de tip sălbatic a fost reintrodus pe plasmidă pYK20 (derivat din plasmidă pAW8 și conținând mecA de tip sălbatic clonat din COL ) în COLnex și SF8300ex pentru studii de trecere. Dacă mecA a mediat rezistența, atunci fie vindecarea unui mutant rezistent al plasmidei, fie introducerea acestuia într-un fond susceptibil ar trebui să ducă la pierderea sau câștigul fenotipului, respectiv, permițând determinarea contribuției mecA la rezistență. Tulpinile și plasmidele utilizate în acest studiu sunt enumerate în tabelele 1 și 2. COLnex(pYK20) și SF8300ex (pYK20) au fost pasate în serie în bulion de soia triptic care conține concentrații crescânde de ceftarolină (laboratoare forestiere) așa cum s-a descris anterior (11).

după 28 de zile, COLnex(pYK20) și SF8300ex(pYK20) pasate în ceftarolină au produs doi mutanți, COLnexpT(pYK20COLT*) și sf8300expt(pyk208300t*) (un asterisc indică o plasmidă generată în timpul selecției ceftobiprolului sau ceftarolinei într-un fundal col sau sf8300) (tabelul 1). CIM-urile la ceftarolină, ceftobiprol și alte lactame (Sigma-Aldrich) au fost determinate prin metoda de diluare a bulionului conform standardelor CLSI (Tabelul 3) (15). COLnexpT (pYK20COLT*) a exprimat rezistență la nivel înalt atât la ceftarolină, cât și la ceftobiprol, cu mic-uri de 64 hectog/ml și, respectiv, 32 centig/ml. SF8300expT (pYK208300T*) a exprimat rezistență la nivel scăzut în ziua de trecere 4, cu un MIC de 4 hectog/ml, care a rămas neschimbat în ciuda a încă 24 de pasaje (Tabelul 3 și Fig. 1). Mutantul colnex(pYK20) (11), COLnexpB(pYK20COLB*), descris anterior, a prezentat rezistență la nivel înalt atât la ceftobiprol, cât și la ceftarolină, cu un MIC de 64 hectog/ml la fiecare.

plasmida mecA a fost secvențiată pentru mutații la tulpinile pasate. Deoarece PBP-urile sunt ținta lactamelor de la sută, pbp1, -2, -3 și -4 au fost, de asemenea, secvențiate. În cele din urmă, gdpP și acrB au fost secvențiate, deoarece mutațiile acestor gene au fost identificate într-un mutant mecA-negativ rezistent la ceftobiprol al COL (16). Plasmida pYK208300T* (pYK20 din SF8300ex pasată în ceftarolină), a avut o mutație cu un singur punct (G la A la poziția secvenței de codificare 1339) în mecA, rezultând o schimbare de aminoacizi nonsinonimă, E447K. nu au fost prezente mutații în alte gene PBP, acrB sau gdpP (Tabelul 4).