Unidade 731 foi criada especificamente pelos militares japoneses em Harbin, China (então parte do Manchukuo ocupado pelo Japão) para a pesquisa de guerra biológica e química através da realização de experiências humanas em pessoas de todas as idades. Durante a Segunda Guerra Sino-Japonesa e, mais tarde, a segunda Guerra Mundial, os Japoneses tinham envolto peste bubônica, cólera, varíola, botulismo, carbúnculo, e outras doenças em bombas, que eles eram rotineiramente ignoradas em Chinês combatentes e não-combatentes. De acordo com o Simpósio Internacional de 2002 sobre os Crimes de guerra bacteriológica, o número de pessoas mortas pelo Exército Imperial Japonês na guerra germânica e experimentos humanos foi de cerca de 580.000.durante os primeiros meses da guerra contra os Estados Unidos após o ataque a Pearl Harbor, o Japão planejou usar armas biológicas contra os americanos. Durante a campanha nas Filipinas, em Março de 1942, os japoneses consideraram libertar 90 kg de pulgas portadoras de Praga (cerca de 150 milhões de insetos) em cada um dos dez ataques separados, mas os americanos renderam-se em Bataan antes do Plano ser implementado. Por volta de novembro de 1944, o Japão lançou um total de 9.300 bombas incendiárias e antipessoais carregadas por balões que foram projetadas para subir para 10.000 m (30.000 pés), e, em seguida, ser arrastadas para leste pela corrente de jato para os Estados Unidos continentais. Mataram seis civis americanos perto de Bly, Oregon; despenharam-se numa quinta em Medford, Oregon.; e causou um curto-circuito nas linhas de energia que forneciam electricidade para as bombas de arrefecimento do reactor nuclear nas instalações de produção do Projecto Manhattan, no local de Hanford, em Washington. Um sistema de reserva restaurou a energia. Durante a batalha de Iwo Jima, outro ataque biológico foi considerado contra os invasores americanos. O piloto Shoichi Matsumoto mais tarde contou como dois planadores Carregando patógenos deveriam ser rebocados sobre a batalha e liberados, mas os planadores que deveriam decolar do Japão Continental para o Aeródromo de Matsumoto no distrito de Pingfang em preparação para o ataque nunca chegaram ao seu destino.