Discussion
Dans la présente étude, nous avons cherché à évaluer si la CD de souris pouvait entraîner un taux d’échec qui se traduisait par un problème de bien-être animal. Nous avons utilisé le temps d’arrêt respiratoire comme marqueur de substitution pour le critère AVMA du « temps nécessaire pour induire une perte de conscience. »1Nous avons reconnu qu’une rupture nette de la colonne vertébrale cervicale élevée au-dessus de C2 pouvait induire un arrêt respiratoire sans perte de conscience, mais le traumatisme grave des différentes méthodes de CD semblait peu susceptible d’aboutir à ce résultat.
Nous fixons le temps d’arrêt respiratoire égal à 0 s comme seuil pour définir une euthanasie réussie. Nous pensons que toute méthode d’euthanasie après laquelle des souris pourraient continuer à respirer (peu importe pendant combien de temps) appelle à la prudence. Si elle est pratiquée sur des souris non anesthésiées, une euthanasie incomplète laisse une souris potentiellement consciente subissant une blessure traumatique grave jusqu’à ce qu’un opérateur puisse répéter la procédure ou passer à une autre méthode d’euthanasie. La rupture complète du SNC midthoracique peut laisser l’analgésique du corps caudal, mais les tissus lésés entourant et crâniens de la lésion peuvent toujours être douloureux.17,25 Les animaux qui ont une innervation motrice suffisante pour continuer à respirer auraient probablement une innervation afférente suffisante pour que la douleur se produise.
Dans notre travail pilote, certaines souris ont continué à respirer jusqu’à 15 min avant de les euthanasier avec du pentobarbital de sodium; ces souris auraient probablement pu continuer à respirer encore plus longtemps. S’ils avaient été retirés de l’anesthésie et avaient repris conscience, avec de multiples blessures à la colonne vertébrale, leurs souffrances auraient pu être graves. Même en complément des agents d’euthanasie inhalés ou injectables, si une souris se remettait (peut-être à l’intérieur d’un congélateur de carcasse) d’une technique de luxation mal exécutée, le risque de douleur ou de détresse serait aggravé. Il est essentiel que toute méthode de CD réponde à l’exigence selon laquelle pratiquement 100% des animaux cessent de respirer de façon permanente immédiatement.
Notre pourcentage d’échec de 21% pour les méthodes de CD, basé sur le temps avant l’arrêt respiratoire, était similaire au pourcentage d’échec dans les rapports de souris ayant subi une CD mais ne présentant pas de lésions spinales cervicales évidentes sur le plan radiographique.7,14 Les auteurs de ces études précédentes7,14 ne détaillent pas leurs méthodes radiographiques. Comme aucun événement d’euthanasie infructueuse n’a été rapporté7,14 les auteurs ont peut-être mal interprété les souris présentant des lésions cervicales et thoraciques, mais une distraction insuffisante pendant la radiographie, comme présentant uniquement des lésions thoraciques.
À la lumière des résultats antérieurs, 7,14 nous avons postulé qu’une tension suffisamment forte appliquée n’importe où le long de la moelle épinière pouvait induire une perte de conscience et un arrêt respiratoire, même lorsque le traumatisme squelettique était caudal à la région cervicale élevée recommandée. Notre taux d’échec de 100% pour le groupe de luxation thoracique ne soutient pas cette hypothèse. Nous avons utilisé la luxation thoracique chez des souris anesthésiées pour modéliser la technique incorrecte qu’un opérateur mal formé pourrait effectuer, et nous avons vérifié que la technique correcte est nécessaire pour réussir l’euthanasie des souris.
Les lignes directrices de l’AVMA ont traité la CD de manière générale, sans description spécifique de la procédure, reflétant une pénurie d’évaluations comparatives des différentes techniques de CD. Diverses publications décrivent des techniques variées pour effectuer une luxation cervicale.8,13,14,16,22 D’autres, y compris les rapports du groupe d’experts AVMA, ne font pas de distinction entre les différentes techniques de CD.3,10,12,24 En plus des 3 méthodes que nous avons choisies, les auteurs ont précisé que la MCD devait être réalisée en tirant vers le haut à un angle de 30 °, dans l’espoir que le processus odontoïde de la vertèbre C2 endommagerait la moelle épinière et augmenterait ainsi l’efficacité de la technique.7 Il est peu probable que la fracture de ce petit processus osseux chez une souris soit visible radiographiquement. De plus, certains opérateurs décrivent la traction jusqu’à ce que le crâne soit senti complètement détaché de la colonne vertébrale, et c’est la méthode que nous enseignons dans notre établissement. Cette pratique est raisonnable lorsque la CD est utilisée après d’autres techniques d’euthanasie (par exemple, un surdosage anesthésique), mais cette procédure plus longue et plus lente peut causer une douleur supplémentaire chez un animal qui n’est pas encore inconscient.
La radiographie post-mortem pourrait jouer un rôle dans l’évaluation du succès de l’euthanasie après l’événement, mais cette technique demande beaucoup de travail et doit être interprétée avec prudence. Nous craignions que, sans distraction suffisante, des ligaments intacts puissent maintenir le crâne suffisamment près de la colonne vertébrale pour masquer une luxation réussie dans certains cas. Nous avons trouvé les radiographies post-mortem plus faciles à interpréter lorsque la tension était appliquée pour étirer la carcasse, mais cela créait alors un écart suspect entre les corps vertébraux C2 et C3 qui nécessitait une évaluation minutieuse. Les témoins négatifs à CO2 uniquement (figure 2) ont été utiles pour distinguer les lésions de la normale. Lorsque nous avons défini l’heure de l’arrêt respiratoire comme notre « étalon-or », la radiographie cervicale n’avait une valeur prédictive positive que de 71%. Par conséquent, lorsque la radiographie est utilisée comme outil de contrôle de la qualité ou d’évaluation des compétences, certains cas d’euthanasie infructueuse seront manqués.
Alors que toutes les euthanasies infructueuses présentaient des lésions thoraciques ou lombaires (ou les deux), il en allait de même pour 50 des 64 euthanasies réussies. Nous concluons que la présence de lésions thoraciques ou lombaires n’est pas un diagnostic de mauvaise technique. De plus, aucun des 11 animaux atteints de la CD qui ont atteint le point final 180-s ne présentait de lésions cervicales observables. En revanche, 63 des 64 cas réussis de CD l’ont fait, et la souris qui n’avait pas de lésion cervicale observable (figure 3) pourrait refléter un diagnostic erroné d’une lésion subtile ou servir de preuve qu’un traumatisme de la moelle épinière distale suffisamment grave peut provoquer un arrêt respiratoire; en effet, 2 souris du groupe des luxations thoraciques ont finalement obtenu un arrêt respiratoire avant qu’une autre technique ne puisse être appliquée. De plus, 6 souris CD ont subi une euthanasie infructueuse mais sont décédées avant le point final 180, même si la radiographie a révélé des lésions cervicales chez 5 de ces souris. Un mauvais diagnostic radiographique est possible, tout comme la possibilité que des blessures intermédiaires, bien qu’évidentes sur le plan radiographique, puissent finalement être fatales mais soient trop prolongées pour qualifier le résultat de « bonne mort ».’
Nous reconnaissons certaines limites à notre étude. Nous n’avons pas effectué toutes les variations décrites ou possibles de CD chez la souris. Nous n’avons pas tenté d’utiliser les ondes cérébrales ou d’autres mesures pour analyser le fonctionnement intact du cerveau après une luxation. Nous n’avons pas retiré les animaux qui respirent du masque d’anesthésie pour évaluer le potentiel de retour à la conscience. La présence d’un temps d’arrêt respiratoire supérieur à 0 s suggère une fonction cérébrale intacte au moins minimale, un état qui semble incompatible avec une « bonne mort »; nous ne présentons aucune donnée sur la qualité du décès lorsque le temps d’arrêt respiratoire est de 0 s.
L’effet opérateur que nous avons noté nécessite une exploration plus approfondie. Avec seulement 2 opérateurs, l’effet n’a pas pu être attribué aux différences d’âge, d’entraînement, de force ou de tout autre facteur de l’opérateur. Il est fort possible que d’autres opérateurs diffèrent dans leurs taux de réussite. Une étude de suivi visant à examiner plus en détail les effets des opérateurs doit tenir compte des connaissances des différents opérateurs selon lesquelles ils étaient notés et de l’effet que ces connaissances pourraient avoir sur leur performance. Le fait que l’opérateur le plus performant ait toujours échoué dans 8,1% des cas soulève des inquiétudes.
De plus, le diagnostic radiographique pourrait être soumis à un effet interprète. Sans un « étalon-or » pour un diagnostic radiographique correct (par exemple, l’absence de lésion visible dans une euthanasie réussie pourrait signifier soit qu’une fracture de la colonne vertébrale ou une luxation à ce site n’est pas nécessaire pour une mort rapide, soit que le radiographe a raté la lésion), nous ne pourrions pas explorer la possibilité d’un effet interprète. Le travail pilote avec des radiographies en film ordinaire a révélé un modeste désaccord dans le diagnostic parmi plusieurs vétérinaires qui lisent les radiographies.
Enfin, toutes les souris ont été disloquées sous anesthésie à l’isoflurane pour des raisons humaines, car nous savions que nous garderions les cas infructueux en vie et respirerions pendant plusieurs minutes plutôt que de répéter immédiatement la procédure. Étant donné que l’anesthésique a aboli le tonus musculaire, cette méthode peut mieux modéliser la CD post-mortem que la seule méthode d’euthanasie. Comme il s’agit d’un dépresseur respiratoire, l’isoflurane peut avoir accéléré l’arrêt respiratoire dans certains cas intermédiaires. En tant qu’agent neuroprotecteur, l’isoflurane peut avoir retardé la mort. Quoi qu’il en soit, l’utilisation de l’isoflurane nous a empêchés d’évaluer la conscience potentielle dans les cas infructueux qui respirent encore, car nous ne les avons jamais sevrés de l’anesthésique pour faire cette évaluation.
Nous concluons que 3 méthodes de CD peuvent entraîner une euthanasie infructueuse dans laquelle les souris continuent à respirer après la tentative de luxation. Nous ne pouvons pas dire si la conscience ou la perception de la douleur accompagnent ce résultat. La pratique sur des souris anesthésiées pourrait être une méthode d’entraînement utile, le temps d’arrêt respiratoire étant défini comme la mesure du succès du stagiaire. La radiographie est un outil d’évaluation des compétences à forte intensité de main-d’œuvre qui ne semble pas plus informatif que l’observation de la pratique sur des souris anesthésiées. Si d’autres études reproduisent nos résultats, les pratiques recommandées devront changer, qu’il s’agisse d’interdire la CD chez les souris non anesthésiées, d’identifier une méthode de CD avec un taux de réussite plus élevé ou de souligner que les souris doivent être surveillées de près après la CD, et si elles respirent encore (ce qui peut être difficile à vérifier étant donné la décharge motrice qui suit souvent la CD), immédiatement traitées par la même méthode d’euthanasie ou une autre méthode d’euthanasie.
