Résumé

Le développement d’un procédé de centrifugation continue en deux étapes pour l’élimination des cellules d’hybridome et des débris cellulaires du bouillon de culture est rapporté. L’objectif était de générer du surnageant, utilisable directement pour l’ultrafiltration ou la chromatographie sans aucune étape de filtration.

La première étape de centrifugation pour l’élimination des cellules d’hybridomes de la fermentation discontinue répétée à l’échelle de 100 L a été réalisée par un séparateur de pile de disques amélioré. La centrifugeuse était équipée d’un système d’alimentation hydrohermétique, qui permettait une séparation sans dommage des cellules par une force centrifuge modérée.

La clarification pour les cellules de mammifères dans cette étape était de l’ordre de 99 à 99,9%. La quantité de particules subcellulaires dans la phase liquide clarifiée a été réduite jusqu’à 50% de la teneur en particules dans le flux d’alimentation.

Dans une deuxième étape de centrifugation, on a procédé à l’élimination de la quantité restante de débris cellulaires et d’autres petites particules. Elle a été réalisée avec des forces centrifuges allant jusqu’à 18000 • g dans une centrifugeuse à grande vitesse équipée d’un système à flux continu.

Les anticorps monoclonaux dans le surnageant résultant ont été directement concentrés par des méthodes d’ultrafiltration et de chromatographie. Dans ce procédé, aucun encrassement des membranes UF ou des membranes chromatographiques n’a été observé.

Les coûts de remplacement de la membrane peuvent être considérablement réduits en utilisant le procédé de centrifugation en deux étapes.