Ceci est le premier d’une série en trois parties sur la transformation d’E.coli. À la fin de cela, vous devriez être un expert de la transformation d’E.coli et des souches à choisir pour différentes applications. Si vous êtes déjà un expert, j’espère que ce sera un rafraîchissement agréable pour vous. Dans les deux cas, veuillez commenter ci-dessous si vous avez quelque chose à ajouter.

En utilisant l’électricité pour la transformation

De l’ADN étranger peut être introduit dans E.coli compétent par électroporation ou transformation chimique. Lorsque vous utilisez l’électroporation, vous appliquez un courant électrique à travers la cellule. On pense que le courant crée des « pores » momentanés dans les membranes cellulaires, ce qui force l’ADN chargé négativement dans les cellules par un effet de type électrophorèse. Pour rendre E.coli électro-compétent, lavez soigneusement les cellules pour éliminer tous les sels moyens. Cela garantit que la charge n’est pas conduite à travers le support. Effectuez également l’électroporation à 0 ° C pour minimiser les dommages causés par la chaleur aux cellules.

Produits chimiques: Ils Agissent Également

Pour rendre les cellules chimiquement compétentes, remettre en suspension E.coli dans une solution de CaCl2 à 0 °C. Dans ces conditions, on pense que l’ion Ca2+ crée des pores dans la membrane, facilite la liaison de l’ADN à la membrane cellulaire et masque la charge négative sur l’ADN. Ensemble, ils facilitent le passage de l’ADN à travers la membrane cellulaire hydrophobe. Forcer l’ADN dans les cellules en appliquant un court choc thermique de 42 ° C, ce qui entraîne un courant thermique qui balaie l’ADN dans les cellules.

Les Avantages et les inconvénients de chaque électroporation

sont moins lourds que la transformation chimique et donnent généralement des rendements de transformation plus élevés (mesurés en colonies formées par microgramme d’ADN). Cependant, c’est plus cher. Il nécessite un appareil spécialisé pour délivrer la charge et des cuvettes pour transférer la charge à la suspension de la cellule. L’électroporation est sensible au sel – vous pouvez perdre des échantillons précieux si l’excès de sel est transporté dans la cuvette.

Personnellement, je préfère la transformation chimique. Bien que cela prenne environ une demi-heure de plus, je trouve que les résultats sont plus prévisibles et j’aime le fait qu’un plus grand volume d’ADN puisse être ajouté si la concentration est trop faible. Vous ne pouvez pas augmenter le volume d’ADN avec l’électroporation en raison du risque d’ajouter trop de sel à la solution. Bien que l’inconvénient souvent cité de la transformation chimique soit sa plus faible efficacité, vous pouvez maintenant acheter des cellules ultra-compétentes, telles que le XL10-gold de Stratagene, ce n’est donc plus un problème.

Articles de cette série:

• Électroporation d’E.coli vs Transformation Chimique (cet article)
• E.coli Compétent: Acheter ou Ne pas Acheter?
• Choisir Une Souche d’E.coli Compétente

Initialement publié le 18 septembre 2007. Révisé et mis à jour le 11 juillet 2016.