Zusammenfassung

Es wird über die Entwicklung eines kontinuierlichen zweistufigen Zentrifugationsverfahrens zur Entfernung von Hybridomzellen und Zelltrümmern aus Kulturbrühe berichtet. Ziel war es, einen Überstand zu erzeugen, der ohne Filtrationsschritte direkt für die Ultrafiltration oder Chromatographie verwendet werden kann.

Der erste Zentrifugationsschritt zur Entfernung von Hybridomzellen aus der wiederholten Batch-Fermentation im 100 L-Maßstab wurde durch einen verbesserten Scheibenstapelseparator durchgeführt. Die Zentrifuge war mit einem hydrohermetischen Zuführsystem ausgestattet, das eine schadenfreie Trennung der Zellen durch moderate Zentrifugalkraft ermöglichte.

Die Klärung für Säugerzellen lag in diesem Schritt im Bereich von 99 bis 99,9 %. Die Menge an subzellulären Partikeln in der geklärten flüssigen Phase wurde bis zu 50 % des Partikelgehalts im Zulaufstrom reduziert.

In einem zweiten Zentrifugationsschritt wurde die restliche Menge an Zelltrümmern und anderen kleinen Partikeln entfernt. Es wurde mit Zentrifugalkräften bis zu 18000 • g in einer Hochgeschwindigkeitszentrifuge durchgeführt, die mit einem kontinuierlichen Durchflusssystem ausgestattet war.

Die monoklonalen Antikörper im resultierenden Überstand wurden direkt durch Ultrafiltration und chromatographische Methoden konzentriert. Dabei wurde kein Fouling der UF-Membranen oder chromatographischen Membranen beobachtet.

Die Kosten für den Membranaustausch können durch den Einsatz des zweistufigen Zentrifugationsverfahrens drastisch reduziert werden.