Zusammenfassung

Hintergrund. Die Expression von humanem CD133 (humanes Prominin-1) in Krebszellen wurde als Marker für Stammzellen postuliert und gilt als mutmaßlicher Marker für Krebsstammzellen (CSCs). Wir haben eine Studie entwickelt, um das Expressionsmuster von CD133 in normaler Haut und in epithelialen kutanen Neoplasmen zu beschreiben. Methoden. Die immunhistochemische CD133-Expression von dreiundvierzig ekkrinen und apokrinen Tumoren wurde mit der bei anderen epithelialen Tumoren der Haut beobachteten verglichen. Darüber hinaus wurde die Durchflusszytometrie verwendet, um die CD133-Expression von vier epithelialen Hautneoplasmen, einschließlich eines Porokarzinoms, nachzuweisen. Suchergebnisse. CD133-Immunreaktivität an der apikalen oder apikolateralen Oberfläche von Zellen, die Drüsenstrukturen bilden, wurde beobachtet. Zellen aus festen Bereichen von gutartigen oder bösartigen Tumoren wurden nicht angefärbt. Die vom Porokarzinom abgeleiteten Kulturzellen zeigten 22% CD133-positive Zellen unter Verwendung der Durchflusszytometrie, während Plattenepithelkarzinomkulturen weniger als 0,1% enthielten. Rückschlüsse. Diese Beobachtungen deuten darauf hin, dass CD133 ein spezifischer Marker für die Drüsendifferenzierung ist, der in das diagnostische Panel von Hauttumoren mit möglicher ekkriner oder apokriner Differenzierung aufgenommen werden könnte. Die Verwendung der CD133-Expression als Marker für CSCs sollte jedoch bei Hautversuchen mit Vorsicht interpretiert werden.

1. Einleitung

In den letzten Jahren wurde eine wachsende Zahl von Beweisen berichtet, die die Vorstellung stützen, dass die Fähigkeit, Tumorbildung und -wachstum aufrechtzuerhalten, ausschließlich in einer kleinen Population von Zellen liegt, die als Krebsstammzellen (CSCs) bezeichnet werden. Die Suche nach Markern, die den stammzellähnlichen Phänotyp dieser tumorinitiierenden Zellen demonstrieren, ist ein aktives Untersuchungsgebiet, und mehrere Stammzellmarker wurden kürzlich in Hauttumoren beschrieben .CD133 ist das humane Homolog von Maus-Prominin-1, einem Zelloberflächenglykoprotein mit fünf transmembranen Domänen, das aufgrund seiner Expression, die auf verschiedene somatische Stammzellsubpopulationen beschränkt ist, bemerkenswerte Aufmerksamkeit erhalten hat . Dieses Oberflächenantigen wurde als Ziel eines monoklonalen Antikörpers entdeckt, der als Mab AC133 definiert ist, ein Marker, der durch eine Subpopulation von CD34-positiven hämatopoetischen Stammzellen aus menschlicher fetaler Leber und Knochenmark exprimiert wird . Anschließend wurde CD133 in verschiedenen menschlichen Normalgeweben, einschließlich Niere, Prostata, Gehirn und Bauchspeicheldrüse, nachgewiesen und als spezifisch mit Mikrovilli und anderen Plasmamembranprotrusionen assoziiert befunden . Darüber hinaus wurde dieses Antigen auch bei hämatologischen Malignomen und bei mehreren soliden menschlichen Neoplasmen identifiziert, einschließlich Gliatumoren, Prostatakarzinomen, Nierenkarzinomen, Hepatokarzinomen, Kolorektalkarzinomen und malignen Melanomen . Das Ziel vieler dieser Studien war es, die Existenz von CSCs zu bestimmen, definiert als eine kleine Gruppe von Krebszellen, die die Fähigkeit zur Selbsterneuerung, Tumorinitiierung und Aufrechterhaltung des Tumorwachstums haben. Antikörper, die routinemäßig zur Reinigung von AC133-positiven Zellen verwendet werden, zielen auf schlecht charakterisierte glykosylierte Epitope unsicherer Spezifität ab. Obwohl die funktionelle Aktivität von CD133 immer noch umstritten ist und seine physiologische Funktion noch nicht bestimmt ist , wird deutlich, dass dieses Zelloberflächenprotein ein einzigartiger Marker sowohl für Plasmamembranprotrusionen als auch für Membranmikrodomänen ist . Es wurde vorgeschlagen, dass CD133 an diesem zellulären Ort als Regulator der Membranlipidzusammensetzung wirken kann oder an den Mechanismen der Zellpolarität und -migration beteiligt sein kann .In früheren Studien, die über die immunhistochemische CD133-Färbung von menschlichen Drüsenepithelien wie Speicheldrüsen, Tränendrüsen, Pankreasgängen, endozervikalen Drüsen und Schweißdrüsen berichteten, wurde ein eigenartiges Muster der CD133-Expression beschrieben . In diesen Epithelien wurde gezeigt, dass CD133 an Plasmamembranvorsprüngen an den apikalen Bereichen polarisierter Zellen lokalisiert ist. Ein ähnliches CD133-apikales zytoplasmatisches Färbemuster von Zellen, die ein Lumen umgeben, wurde auch bei Karzinomen aus Eierstock, Dickdarm oder Bauchspeicheldrüse beobachtet .

Der Befund des CD133-Antikörpers, der Schweißdrüsenzellen färbt, veranlasste uns, eine Studie zu entwerfen, über die wir jetzt berichten, um die Expression von CD133 in ekkrinen und apokrinen Hauttumoren zu bewerten.

2. Materialien und Methoden

2.1. Fälle

Eine retrospektive Suche ergab 43 zuvor diagnostizierte Haut-ekkrine und apokrine Adnextumoren aus den Akten der Abteilung für Pathologie des Universitätsklinikums Albacete. Objektträger, Paraffinblöcke und histopathologische Berichte aus allen Fällen wurden erhalten. Slides were reviewed and adnexal skin tumors were diagnosed according to the criteria of the World Health Organization (WHO) classification , including eccrine spiradenoma (), nodular hidradenoma (), eccrine hidrocystoma (), poroma (), porocarcinoma (), syringocystadenoma papilliferum (), chondroid syringoma (), syringoma (), cylindroma (), hidradenoma papilliferum (), apocrine hidrocystoma (), microcystic adnexal carcinoma (), and apocrine carcinoma (). Fälle von Basalzellkarzinom () und Plattenepithelkarzinom () wurden ebenfalls in diese Studie einbezogen, um die bei diesen Neoplasmen erzielten Ergebnisse mit denen bei Schweißdrüsentumoren zu vergleichen. Um die CD133-Expression in normaler Haut zu bewerten, analysierten wir Haut aus verschiedenen Bereichen, die von den Rändern von sechs chirurgisch resezierten Tumoren der Haut und von drei Autopsien erhalten wurden.

Für die Kultur von Hautkrebszellen wurden sieben Proben von menschlichen Hauttumoren erhalten, die einem ekkrinen Porokarzinom und sechs Plattenepithelkarzinomen entsprachen. Frisches Gewebe aus diesen Fällen wurde unmittelbar nach der chirurgischen Resektion in Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM) aufgenommen, das mit Penicillin / Streptomycin und Fungizon ergänzt wurde.

2.2. Immunhistochemie

Formalinfixierte, in Paraffin eingebettete Gewebeschnitte von 4 µm Breite wurden geschnitten, in Xylol deparaffiniert und in einer abgestuften Reihe von Ethanol rehydriert. Die endogene Peroxidaseaktivität wurde mit 3% H2O2 für 5 Minuten blockiert. Objektträger wurden mit hitzeinduziertem Epitop-Retrieval behandelt und mit drei verschiedenen monoklonalen Anti-CD133-Antikörpern immunisiert: Monoklonaler Antikörper AC133, monoklonaler Antikörper 293C3 und monoklonaler Antikörper AC141 (alle von Miltenyi Biotec, Deutschland). Antikörper wurden bei verschiedenen Verdünnungen und Inkubationszeiten getestet. Die CD133-Detektion wurde unter Verwendung des EnVision-Systems-HRP (Dako, Glostrup, Dänemark) in einer DakoCytomation Autostainer-Plattform gemäß den Anweisungen des Herstellers durchgeführt. Als Chromogen wurde Diaminobenzidin (DAB-Substratsystem, Dako, Glostrup, Dänemark) verwendet. Von den drei verschiedenen getesteten Anti-CD133-Antikörpern arbeitete nur einer, der monoklonale Antikörper AC133, in Paraffin. Die beiden anderen getesteten Antikörper scheiterten, weil mit diesen Antikörpern inkubierte Abschnitte keine Färbung zeigten oder weil die bei hohen Konzentrationen der Antikörper beobachtete Immunfärbung als unspezifisch angesehen wurde (ähnliche Färbung wurde bei Negativkontrollen beobachtet). Der monoklonale Antikörper AC133 lieferte zuverlässige Ergebnisse auf den getesteten Paraffin-eingebetteten Abschnitten. Wir stellen für diesen Antikörper eine 1:10 Verdünnung und 40 Minuten Inkubation bei Raumtemperatur als bevorzugte Arbeitsbedingungen ein. Anschließend wurden alle Versuche unter diesen Bedingungen durchgeführt.

Hautpartien mit normalen Schweißdrüsen wurden als Positivkontrollen verwendet. Zusätzlich wurden, wenn sie in den Abschnitten vorhanden waren, normale Schweißdrüsen von der Haut neben den Neoplasmen als interne Positivkontrollen verwendet. Negativkontrollen wurden durchgeführt, indem der Anti-CD133-Antikörper während der primären Antikörperinkubation weggelassen wurde.

Die immunhistochemische Färbung von festen Bereichen und von azinaren oder duktalen Strukturen aus den Tumoren wurde separat ausgewertet. Die CD133-Färbung wurde unter Verwendung einer semiquantitativen Skala bewertet. Azinare oder duktale Strukturen wurden wie folgt bewertet: (−) keine Färbung; (+) Färbung des sekretorischen Materials im Lumen isolierter Duktu-len oder Acini und / oder schwache Färbung der apikalen oder luminalen Grenze einiger Duktu-len oder Acini; (++) klare Färbung der apikalen oder luminalen Grenze der meisten im Tumor vorhandenen Duktu-len oder Acini; (+++) Färbung der apikalen oder luminalen Grenze aller im Tumor vorhandenen Duktu-len oder Acini. Die CD133-Expression wurde von zwei leitenden Pathologen (EP und SYNC) verblindet ohne Kenntnis klinischer und pathologischer Informationen bewertet. Bei nicht übereinstimmenden Bewertungen wurden die Objektträger von beiden Pathologen unter einem Mehrkopfmikroskop neu bewertet, und es wurde eine Einigung erzielt.

2.3. Kultur von Krebszellen aus Hauttumoren

Tumorfragmente wurden mechanisch und enzymatisch durch Verdauung mit Kollagenase Typ IA (2 mg/ml) (Gibco, Invitrogen) in Hank’s Balanced salt solution (HBSS) bei 37°C für 2 Stunden disaggregiert. Die Zellen wurden durch ein 40 µm Nylonnetz filtriert und durch seriellen Durchgang durch serologische Pipetten weiter dissoziiert. Aufgeschlossenes Gewebe wurde 10 min bei 1000×g zentrifugiert und das Pellet mehrmals gewaschen, um eine Einzelzellsuspension zu erhalten. Isolierte Zellen wurden in Kulturkolben plattiert und bei 37 ° C in DMEM / F12-Medien, die 10% fetales Rinderserum enthielten, gezüchtet und mit Penicillin / Streptomycin und Fungizon ergänzt.

2.4. Durchflusszytometrische Analyse

Alle Experimente wurden an Zellsuspensionen durchgeführt, die bei der ersten Passage der Primärkultur aus Tumoren hergestellt wurden. Die Zellen wurden unter Verwendung von 0,02% EDTA in phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) für 15 min bei 37 ° C abgelöst und vor der Färbung mit PBS gewaschen. Zellsuspensionen wurden auf Zellen/ml eingestellt und mit der empfohlenen Antikörperverdünnung (1/10) für 20 min im Dunkeln (4°C) inkubiert. Proben ohne primären Antikörper wurden als Negativkontrollen verwendet. Als Antikörper wurde anti-CD133/1 (AC133)-APC (Miltenyi Biotec) verwendet. Ungebundene Antikörper wurden durch Waschen mit PBS entfernt und Zellen in einem geeigneten Puffervolumen resuspendiert. Die Analyse wurde an einem LSRII-Durchflusszytometer (BD Biosciences) durchgeführt. Die Daten wurden mit Summit V5.0.1 analysiert. 5170 software (Dako).

3. Ergebnisse

3.1. Klinische Befunde

Die Patientenkohorte bestand aus 29 Männern und 23 Frauen im Alter von 24 bis 90 Jahren (Median 49 Jahre). Der Ort der Präsentation war variabel, die meisten von ihnen lokalisiert auf der Kopf-Hals-Region. Die klinischen Daten sind in Tabelle 1 zusammengefasst. Alle Patienten wurden einer Exzisionshautbiopsie unterzogen.

3.2. Immunhistochemische Befunde

Von den drei verschiedenen monoklonalen Antikörpern, die an formalinfixierten, in Paraffin eingebetteten Gewebeschnitten getestet wurden, und in Übereinstimmung mit früheren Berichten ergab nur der AC133 empfindliche und zuverlässige Ergebnisse. Das gesamte immunhistochemische Färbemuster, das mit diesem Antikörper beobachtet wurde, war eng mit der Gewebearchitektur verbunden. Die Färbung war hauptsächlich auf der apikalen Oberfläche von Zellen lokalisiert, die duktale oder Drüsenstrukturen bildeten. Immunhistochemische Befunde, die in diesen Strukturen unter Verwendung des Anti-CD133-Antikörpers beobachtet wurden, sind in Tabelle 1 zusammengefasst und werden im Folgenden beschrieben. Feste Bereiche aus einem der untersuchten Adnextumoren oder aus den getesteten Basalzell- und Plattenepithelkarzinomen zeigten keine CD133-Positivität.

3.2.1. Normales Gewebe

Die CD133-Expression wurde an der endoluminalen oder apikalen Oberfläche der Zellen der Acini und der terminalen Duktula normaler ekkriner Drüsen beobachtet (Abbildung 1(a)). Interzelluläre Canaliculi, die an der lateralen Membran von ekkrinen Zellen im sekretorischen Teil normaler Schweißdrüsen gebildet wurden, waren deutlich gefärbt (Abbildung 1 (b)), ebenso wie die Sekretion im Lumen der ekkrinen Gänge. Die Färbung normaler apokriner Drüsen an den terminalen Duktu wurde an der apikalen Grenze der Zellen beobachtet, wenn auch mit einer fleckigen Verteilung. In azinaren Bereichen dieser Drüsen, wo die apokrine Enthauptungssekretion offensichtlich war, zeigte CD133 nur eine schwache oder negative Färbung.

(ein)

(ein)

(ein)
(b)

3.2.2. Tumoren

CD133 wurde in keinem der getesteten Plattenepithel- oder Basalzellkarzinome exprimiert. Unter Verwendung des AC133-Antikörpers zeigten die in dieser Arbeit analysierten Adnextumoren das folgende Färbemuster (zusammengefasst in Tabelle 1).

Gutartige Tumoren mit ekkriner oder apokriner Differenzierung. Alle ekkrinen Spiradenomfälle zeigten eine CD133-Immunreaktivität an der apikalen Membran der kanalartigen Strukturen innerhalb der Tumorknoten. Die luminale Oberfläche der Epithelzellen, die die unilokularen Zysten aller analysierten ekkrinen Hidrozystomfälle bilden, war ebenfalls positiv. Kanäle und kleine Zysten, die in drei der sechs ekkrinen Poromfälle vorhanden waren, zeigten eine intensive Färbung der inneren Zellschicht aus den proliferierten Tubuli, und diese Färbung befand sich am endoluminalen Rand der Zellen. Die anderen drei analysierten Poromfälle zeigten in den meisten Tubuli das gleiche Färbemuster, jedoch mit einem (++) oder (+) Färbemuster der CD133-Positivität. Kanalartige Strukturen, die in den vier Cylindroma-Fällen vorhanden waren, zeigten auch Immunreaktivität an der apikalen Membran der Epithelzellen. Die Färbung der vier chondroiden Syringome war prominent, und alle vorhandenen Ductules, die gelegentliche Verzweigungsstrukturen bildeten, zeigten eine intensive Positivität an der apikalen Membran (Abbildung 2). Die erweiterten und gewundenen Gänge, die bei allen Syringocystoadenoma papilliferum-Fällen in zystische Räume führen, zeigten eine Immunreaktivität am apikalen Teil der Epithelzellen oder an der luminalen Oberfläche der Zysten mit einer Intensität im Bereich von (++) bis (+++) (Abbildung 3). Die fünf als knotiges Hidradenom diagnostizierten Fälle zeigten isolierte kanalartige Strukturen, die positiv für CD133 waren, mit einer apikalen Färbung der Zellen, die die Tubuli bildeten (Abbildung 4), deren Intensität von (++) bis (+++) reichte. Die beiden Hidradenoma papilliferum-Fälle zeigten auch eine Expression von CD133 am apikalen Teil der Drüsenstrukturen. Nur zwei der sechs getesteten Syringomfälle zeigten eine konsistente Färbung an der luminalen Oberfläche der kleinen Kanäle, die die Tumore bildeten, die normalerweise von zwei Schichten kubischer Epithelzellen ausgekleidet waren. Die apokrinen Hidrozystomfälle zeigten keine positive Immunreaktivität.

Abbildung 2

CD133-Positivität an der inneren Oberfläche von verzweigten Tubuli des chondroiden Syringoms. Es wird keine Färbung der Stromazellen oder der äußeren Epithelzellen festgestellt.

Abbildung 3

Papilläre Projektionen von Syringocystadenoma papilliferum, die von pseudostratifiziertem Säulenepithel ausgekleidet sind, sind CD133-positiv. Die Positivität ist an der endoluminalen Oberfläche sehr intensiv.

Abbildung 4

Lineare CD133-Färbung von Säulenzellen, die Tubuli eines Hidradenomfalls auskleiden. Nur Zellen, die sich an der inneren Oberfläche der Tubuli befinden, werden gefärbt.

Bösartige Tumoren mit ekkriner oder apokriner Differenzierung. Bei dem als apokrines Karzinom diagnostizierten Fall konnte an der luminalen Oberfläche der Zysten keine Immunreaktivität nachgewiesen werden. Die beiden in dieser Studie analysierten mikrozystischen Adnexkarzinome zeigten eine starke CD133-Positivität an der apikalen Oberfläche von Zellen, die die kleine und große Lumina der röhrenförmigen Strukturen bildeten. Die CD133-Immunfärbung konnte an den sehr atypischen Zellen nachgewiesen werden, die die tubulären Strukturen des Porokarzinomfalls umgaben (Abbildung 5).

(a)

(b)

(a)
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Figure 5

Ductal structures of porocarcinoma seen in H&E sections (a) are CD133 positive (b).

3.3. Charakterisierung von Primärkulturen aus humanen Hauttumoren und durchflusszytometrische Analyse

Sieben Proben aus humanen Hauttumoren wurden mit dem Ziel verarbeitet, Einzelzellsuspensionen zu erhalten. Aufgrund einer unzureichenden Anzahl von Zellen, die aus den Tumoren gewonnen wurden, oder aufgrund von Pilz- oder Bakterienkontamination wurden nur vier Proben erfolgreich kultiviert und auf Zelloberflächen-CD133 / 1-Epitopexpression analysiert. Diese erfolgreich kultivierten Biopsien umfassen ein ekkrines Porokarzinom und drei Plattenepithelkarzinome. Die mikroskopische Untersuchung der kultivierten Zellen ergab unterschiedliche Morphologien, die je nach histologischem Tumortyp variierten. Zellen aus Plattenepithelkarzinomen zeigten epitheloide oder Spindelzellen, während von ekkrinen Porokarzinomen abgeleitete Zellen eine rundere Form hatten und zu Inseln kleiner und atypischer Zellen gruppiert waren. Das Vorhandensein von Epithelzellen in diesen Kulturen wurde durch positive Expression von E-Cadherin und EpCAM als Epithelmarker bestätigt.

Um festzustellen, ob Hauttumorzellkulturen eine Population von CD133-positiven Zellen enthielten, untersuchten wir mit Hilfe der Durchflusszytometrie die Expression des CD133/1-Oberflächenmarkers mit dem AC133-Antikörper. Alle Proben von Plattenepithelkarzinomen enthielten weniger als 0,1% der positiven Zellen, während fast 22% der positiven Zellen in ekkrinem Porokarzinom nachgewiesen wurden. Abbildung 6 zeigt repräsentative Histogramme der beiden untersuchten Hauttumortypen.

(a)

(b)

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Figure 6

CD133 expression profiles in human skin primary tumour cells. Analysis of CD133/1 expression in samples from eccrine porocarcinoma (b) and from squamous cell carcinoma (a). Flow cytometry of porocarcinoma derived cell cultures show a 22% of CD133/1 epitope positive cells and CD133 immunostaining. Plattenepithelkarzinom zeigt negative Färbung für CD133 und 0% positive CD133-Zellen auf Durchflusszytometrie.

4. Diskussion

Fortschritte in der kutanen Stammzellbiologie und im Verständnis der Karzinogenese hängen stark von der Verfügbarkeit von Markern ab, die für bestimmte Stammzellpopulationen spezifisch sind . Bekannte Marker von Hautstammzellen oder von Stammzellen, die in anderen Organen oder Tumoren identifiziert wurden, können zum Nachweis von kutanen CSCs verwendet werden. Einer dieser Marker, der in der Haut getestet werden kann, ist das CD133-Protein (Prominin-1). Die ersten Daten zur CD133-Expression unter Verwendung des monoklonalen Antikörpers AC133, der gegen ein neuartiges Stammzell-Glykoprotein-Antigen hergestellt wurde, zeigten, dass CD133 selektiv auf hämatopoetischen CD34-Stamm- und Vorläuferzellen exprimiert wurde, die aus menschlicher fetaler Leber und Knochenmark sowie aus Blut stammen . Seitdem haben mehrere Berichte gezeigt, dass Prominin-1 verwendet werden kann, um menschliche Stammzellen aus verschiedenen Quellen zu identifizieren und zu isolieren, einschließlich des hämatopoetischen Systems , der Prostata , der Bauchspeicheldrüse oder der Niere . Darüber hinaus wurden monoklonale Antikörper gegen CD133 zur Identifizierung und Isolierung einer mutmaßlichen Population von tumorinitiierenden Zellen oder CSCs in einer Reihe von humanen Karzinomen und bei malignen Melanomen verwendet . Bei Gliomen wurde die erhöhte Anzahl von CD133-positiven Krebszellen sowie das Vorhandensein von Clustern dieser Zellen als signifikanter prognostischer Faktor vorgeschlagen, unabhängig von anderen Faktoren wie dem Tumorgrad . Andere Studien mit verschiedenen und neuartigen Anti-CD133-Klonen haben jedoch gezeigt, dass die Expression von CD133 nicht auf Stamm- und Vorläuferzellen beschränkt ist und in adulten Epithelzellen von Maus- und Humangeweben exprimiert zu werden scheint . Zum Beispiel unter Verwendung eines CD133-Klons, genannt 13A4, abgeleitet von Maus Prominin-1, Weigmann et al. nachgewiesene Expression von Prominin-1 an der apikalen Oberfläche von Neuroepithelzellen und adulten nierenproximalen Tubuli, und Karbanová et al. , unter Verwendung eines monoklonalen Antikörpers (80B258), der gegen ein menschliches Prominin-1-Polypeptid erzeugt wurde, beobachtete Immunreaktivität in adulten menschlichen Geweben, insbesondere in Drüsenepithelien. Diese Ergebnisse weisen auf die Notwendigkeit weiterer Studien hin, um zu klären, ob das AC133-Antigen, das zuvor in der Durchflusszytometrie auf die CD34-positiven Vorläuferzellen beschränkt war, in adulten Epithelzellen exprimiert wird . Es wurde vermutet, dass die beobachtete variable CD133-Expression mit der unterschiedlichen Affinität der verschiedenen Antikörper zu verschiedenen glykosylierten Formen von CD133 zusammenhängt . Der monoklonale Antikörper AC133 erkennt ein glykosyliertes Epitop von Prominin-1 , und interessanterweise kann sich die Glykosylierung dieses Proteins in Abhängigkeit vom Zustand der Zelldifferenzierung ändern oder während des Prozesses der malignen Transformation verändert werden . In unserer Studie an menschlichen Hauttumoren haben wir beobachtet, dass die CD133-Expression stark von der Bildung von Schweißdrüsengängen und Schweißdrüsensekretion abhängt. CD133-Immunreaktivität wurde hauptsächlich an der apikalen / endoluminalen Oberfläche von kanalartigen Strukturen oder Zysten der meisten gutartigen und bösartigen ekkrinen Tumoren beobachtet. Keiner der untersuchten Tumoren, weder gutartig noch bösartig, zeigte isolierte oder kleine Cluster von CD133-positiven neoplastischen Zellen in festen Bereichen. Ein ähnliches CD133-Färbemuster der apikalen Zellmembran sekretorischer Zellen wurde zuvor in normalen tubulären Strukturen wie nierenproximalen Tubuli oder in Tumordrüsen von Kolorektalkarzinomen berichtet . CD133-Färbung wurde auch an der apikalen / endoluminalen Oberfläche von Zellen gefunden, die ein Lumen in Ovarialkarzinomen bilden . In diesen Fällen wurde die apikale Position von CD133 mit einer möglichen sekretorischen Funktion dieses Moleküls in Verbindung gebracht. Die morphologische Verteilung der CD133-Färbung zeigt eine Korrelation mit gut erkannten sekretorischen Strukturen normaler Gewebe und Drüsen, was auf eine funktionelle Beziehung von CD133 zur Sekretion hindeutet. Tatsächlich zeigten in unserer Studie Tumoren, bei denen der Verdacht bestand, dass sie wie Syringome aus den duktalen Bereichen der Schweißdrüsen stammen, ein weniger intensives Färbemuster als solche, die aus den Azinusabschnitten stammen.

Die CD133-Expression auf der Zelloberfläche differenzierter Tumorzellen ist ein Argument gegen CD133 als spezifischen Krebsstammzellmarker in der Haut. Die Existenz einer kleinen CD133 + CSC-Population kann jedoch nicht vollständig ausgeschlossen werden, wie in anderen Organen nachgewiesen wurde, in denen CD133 sowohl auf der Zelloberfläche von CSCs als auch von differenzierten Tumorzellen exprimiert wird . Zusammengenommen zeigen unsere Ergebnisse eine spezifische immunhistochemische Expression des AC133-Antikörpers an der sekretorischen Oberfläche differenzierter normaler und neoplastischer Zellen der ekkrinen Drüsen. Experimente, die diesen Antikörper als Marker für CSCs in der Haut verwenden, sollten mit Vorsicht interpretiert werden. Der AC133-Antikörper ist ein empfindlicher und spezifischer Marker der kutanen Drüsendifferenzierung, der für die Diagnose von Tumoren mit möglicher ekkriner oder apokriner Differenzierung nützlich ist.

Danksagung

Die Autoren danken Pedro Javier Benito Castellanos und Laura Abendaño für die technische Unterstützung.