signaturer af lungemetastaser identificerer gener, der er reguleret i metastaser. en skematisk repræsentation af MPF-tumorer og lungemetastaser isoleret til Rnasek. B Hovedkomponentanalyser (PCA ‘ er) ud fra data genereret fra MFP-tumorer og lungemetastaser anvendt i denne undersøgelse. Hvert datapunkt repræsenterer en prøve fra en individuel mus. C GSEA-vejanalyse af signaturen beriget lungemetastase (P2); de øverste 5 ned (blå)- og op (rød)regulerede processer vises. NES, normaliseret berigelsesscore. Bokse angiver FDR <0.1 for statistisk signifikans. Berigelsesplotter for epithelial mesenkymal overgang (EMT) og TGF-Krust signalering for P0 og P2 er vist i højre panel. p < 0.001 til EMT-og TGF-kur-signalering ved P0 og P2. PCR-analyse af vimentinekspression i BC3_A2 MFP tumorer og metastatiske subpopulationer isoleret fra lunge. Parrede t-tests, p = 0,02 for P0 lunge, p < 0,001 for P2 lunge. Hvert datapunkt repræsenterer en mus. Fejlstænger repræsenterer sem af biologiske replikater. Se også supplerende Fig. 2. e IHC-farvning blev udført på de angivne vævssektioner under anvendelse af et antistof, der genkender den humanspecifikke form af vimentin. Skalestænger angiver 100 liter. f Vandfaldsplot, der viser ekspression af EMT-gener i P0-og P2-lungemetastaser sammenlignet med tilsvarende MFP-tumorer. p-værdier er angivet i supplerende tabel 1. Der blev udført prøver fra mindst tre uafhængige mus for at overvåge ekspression af vimentin, en mesenchymal markør, i MFP-tumorer og lungemetastaser gennem hele seriel Passage. Vimentin-ekspression udviste et dynamisk mønster med højere ekspression i MFP-tumorer i forhold til tilsvarende lungemetastaser ved hver passage (Fig. 1D) og til levermetastaser ved P0 (supplerende Fig. 2a). Vimentinproteinniveauer rekapitulerede dette dynamiske mønster (Fig. 1e). Yderligere EMT-gener blev også nedreguleret i lungemetastaser i forhold til tilsvarende MFP-tumorer (Fig. 1f). Ekspression af den mesenkymale markør CDH2 (genet, der koder for N-cadherin) fulgte det samme mønster som vimentin (supplerende Fig. 2b), hvorimod ekspression af epitelmarkøren CDH1 (genet, der koder for E-cadherin) udviste en invers tendens (supplerende Fig. 2c). Co-indpodet humane stromale fibroblaster blev ryddet på tidspunktet for tumorhøst (supplerende Fig. 3a-f), udelukker muligheden for, at de bidrog til ekspressionen af mesenkymale markører i MFP-tumorer. Samlet set viser disse resultater, at tumorer nedregulerer ekspression af mesenkymale gener, når de først er etableret på metastatiske steder.

bestemmelse af bibliotekskompleksitet for høj gennemstrømningsforstærkning af funktionsskærm

en skærm med høj gennemstrømningsforstærkning (GOF) blev designet til at identificere funktionelle drivere til metastase fra vores P2 lungemetastaser signatur. 1, en kendt driver af metastase, 29 tjente som en positiv kontrol til skærmoptimering, og GFP blev brugt som en negativ kontrol. BC3_A2-celler blev transduceret med lentivirus, der koder for enten HOKSA1 eller GFP, og inficerede tumorceller blev blandet i forskellige forhold (supplerende Fig. 4a). Blandede populationer af tumorceller blev derefter indpodet i MFP ‘ erne hos modtagermus, og BLI blev brugt til at score lungemetastaser på tidspunktet for nekropsi (supplerende Fig. 4b). I et andet sæt eksperimenter blev den metastatiske driver ID19 anvendt i kombination med GFP, men i dette tilfælde blev blandede populationer af tumorceller injiceret i halevenen hos modtagermus for at modellere de sidste stadier af metastase (supplerende Fig. 4c). En signifikant stigning i fotonstrømmen blev observeret fra tumorer med et HEKSA1: GFP eller ID1: GFP-forhold på 1:10. Disse kompleksitetstest viste, at en bona fide metastasedriver kunne detekteres på vores skærm, hvis den blev samlet med 9 ikke-driver open reading frames (ORFs), men en pulje af en driver med 19 ikke-drivere maskerede vores evne til at opdage driveren. Baseret på disse resultater begrænsede vi vores poolstørrelse til 12 ORFs.

high throughput gain-of-function screening in vivo identificerer kandidatfunktionelle drivere til TNBC-metastase

for at bestemme, hvilke af de opregulerede gener fra P2-lungemetastasesignaturen, der var i stand til at drive lungemetastase, designede vi brugerdefinerede stregkodede lentivirale biblioteker, der koder for ORF ‘ erne for de 230 gener, der var mest opreguleret i lungemetastaser. Orf ‘er blev individuelt udtrykt i BC3_A2-celler, så hver cellelinie udtrykte en enkelt ORF, celler blev derefter samlet i grupper på 12, og puljer blev implanteret i MFP’ erne af modtagermus (n = 10 mus pr. 2a). Et kontrolplasmid, der udtrykker GFP, blev inkluderet i hver pulje for at måle iboende metastase i denne TNBC-model. Hver ORF var forbundet med en unik DNA-stregkode. En referencepille af poolede celler blev snapfrosset for at bekræfte lige repræsentation af hver ORF på tidspunktet for tumorimplantation. Tretten uger blev valgt som undersøgelsens endepunkt, fordi HOKSA1, men ikke GFP-udtrykkende tumorer, metastaseret til lunge på dette tidspunkt (supplerende Fig. 5a). Tretten uger efter engraftment blev lungerne udsat for BLI vivo (supplerende Fig. 5a), metastatiske læsioner blev isoleret, og genomisk DNA (gDNA) blev ekstraheret og brugt som en skabelon til kpcr til at forstærke unikke stregkodeområder associeret med hver ORF (supplerende Fig. 5b). MFP-tumorer blev også isoleret og underkastet disse analyser (Fig. 2a). Repræsentationen af hver stregkodet ORF i MFP ‘ en i forhold til referenceprøven blev bestemt for hver pulje (Fig. 2b; supplerende Fig. 5c, d). Repræsentation i lungen blev derefter normaliseret til berigelse i MFP ‘ er vs. referencen (Fig. 2b, c). Metastasedrivere adskilt i tre grupper, herunder dem beriget i både lunger og MFP ‘ er (Fig. 2b, øverste højre kvadrant og supplerende Fig. 5c), dem, der udelukkende beriges i MFP ‘ er (Fig. 2B, nederste højre kvadrant) og dem, der udelukkende er beriget i lunger (Fig. 2b, øverste venstre kvadrant og Fig. 2c). Celler, der udtrykte GFP, blev beriget med lungemetastaser i nogle af puljerne, og den gennemsnitlige berigelsesscore for GFP i lungen var cirka 5 (supplerende Fig. 5e). Derfor brugte vi dette som en berigelsesscore cutoff til at definere et sandt hit på vores skærm og identificerede 44 gener, der selektivt blev beriget i lungemetastaser i forhold til primære tumorer. Disse hits blev rangeret efter berigelsesscore (Fig. 2c og supplerende tabel 2). Blandt de fem bedste hits var CEACAM5 den eneste, hvis udtryk i primære tumorer viste sig at forudsige dårlig overlevelse hos brystkræftpatienter (supplerende Fig. 6a). Derfor undersøgte vi yderligere den funktionelle rolle CEACAM5 i metastase af brystkræft.

high throughput gain-of-function screening in vivo identificerer funktionelle drivere til metastase. en skematisk skildrer format bruges til gain-of-funktion (GOF) skærm. Se også supplerende Fig. 5. ORF, åben læseramme. Ti mus blev implanteret i hver kohorte. B Scatter plot viser relativ repræsentation af hver ORF i MFP tumorer efter normalisering til referencen og i lunger i forhold til MFP tumorer (Y akse). Metoden blev anvendt til kvantificering af kpcr-data. CEACAM5 er vist i rødt. c-gener beriget med lungemetastaser, men ikke MFP-tumorer, blev rangeret i faldende rækkefølge af berigelse i lunge. Stiplede linje angiver berigelse score cutoff. Se også supplerende Fig. 5 og supplerende tabel 2

bekræftelse af forbedret ceacam5-ekspression i yderligere metastatiske PDK-modeller

Vi fandt, at ceacam5-ekspression var dynamisk reguleret, da metastatiske underpopulationer blev serielt passeret mellem lunger og MFP ‘ er in vivo (Fig. 3a), der bekræfter resultater fra Rnasek (supplerende tabel 1 og supplerende Fig. 6b). Tilsvarende var ceacam5-ekspression højere i leveren (supplerende Fig. 7a) og hjerne (supplerende Fig. 7b) metastaser i forhold til tilsvarende MFP-tumorer. Ceacam5-proteinniveauer var også højere i lungemetastaser i forhold til MFP-tumorer (Fig. 3b). Stigningen i ceacam5-ekspression i metastatiske læsioner var ikke afhængig af p53-dæmpning i denne PDK-linje, da lungemetastaser fra den isogene PDK-linje,der udtrykker vildtype p5326, 30 viste også højere ekspressionsniveauer af CEACAM5 (supplerende Fig. 7c).

CEACAM5 er opreguleret i metastaser, og dens ekspression er omvendt korreleret med den for vimentin i modeller af TNBC. en ekspression af CEACAM5 i MFP-tumorer og metastatiske læsioner af mus indpodet med BC3_A2-tumorer blev bestemt ved krt-PCR. Parrede t-tests, p < 0,001 for P0 lunge, P2 MFP tumor og P2 lunge. Hver prik repræsenterer en individuel mus. Fejlstænger repræsenterer sem af biologiske replikater. Se også supplerende Fig. 7. B MFP-tumorer og tilsvarende metastaser fra mus indpodet med BC3_A2-tumorer blev analyseret af IHC under anvendelse af et CEACAM5-antistof. Skalestænger angiver 100 liter. C-ekspression af CEACAM5 i MFP-tumorer og metastatiske læsioner af mus indpodet med pim001-p-tumorer blev bestemt ved krt-PCR. Data præsenteres på en logskala. Parret t-test, p < 0.001. Hver prik repræsenterer en individuel mus. Fejlstænger repræsenterer sem af biologiske replikater. d MFP-tumorer og tilsvarende lungemetastaser fra mus indpodet med pim001-p-tumorer blev analyseret af IHC under anvendelse af et CEACAM5-antistof. Skalestænger angiver 100 liter. e, F IHC af serielle tumorvævssektioner fra mus indpodet med BC3_A2 (e) eller PIM001-P (f) farvet med antistoffer, der er specifikke for CEACAM5 (toppanel) eller vimentin. Skalestænger angiver 100 liter. g-ekspression af CEACAM5 (toppanel) eller vimentin (Bundpanel) blev bestemt i et panel af brystkræftcellelinjer. Fejllinjer repræsenterer sem af tekniske triplicater. h IHC blev udført for at overvåge phosphoryleret p38 i MFP-tumorer og lungemetastaser af BC3_A2-mus. Skalestænger indikerer 100 liter

et andet sæt PDK-modeller af TNBC (PIM001) blev evalueret for at bestemme, om stigningen i CEACAM5 i metastatiske læsioner var en generel egenskab ved metastase. PIM001-P blev etableret ud fra den primære tumor i behandling-na-larve hos en patient med metastatisk TNBC, hvorimod PIM001-m blev etableret ud fra den dermale metastase fra den samme patient. Pim001-p tumorceller blev konstrueret til at udtrykke både CBR-Luc og mCherry og derefter indpodet i MFP ‘ erne af modtagermus. På tidspunktet for nekropsi blev MFP-tumorer og lungemetastaser isoleret. Ceacam5-ekspression blev øget ved begge mRNA-niveauer (Fig. 3C) og protein-niveauer (Fig. 3D) i pim001-p lungemetastaser sammenlignet med tilsvarende MFP-tumorer. Interessant nok var ceacam5-proteinniveauerne højere i PDK MFP-tumorer etableret ud fra patientens dermale metastase (PIM001-M) sammenlignet med PDK MFP-tumorer etableret ud fra hendes primære brysttumor (PIM001-P) (supplerende Fig. 7d). Samlet viser disse resultater, at forhøjelse af CEACAM5 er en fælles egenskab ved metastaser i TNBC-modeller.

ceacam5-ekspression er omvendt korreleret med vimentin-ekspression og phosphorylering af p38

fordi ekspression af CEACAM5 i PDK-modeller var omvendt korreleret med ekspression af vimentin (Fig. 1D, 3a; supplerende Fig. 2A og 7a, b), immunhistokemi (IHC) blev anvendt til at overvåge lungemetastaser og MFP-tumorer for relative niveauer af vimentin og CEACAM5. Proteinniveauer korreleret med mRNA-niveauer i begge modeller (Fig. 3e, f). Vimentin-ekspression var også omvendt korreleret med ceacam5-ekspression i et panel af brystkræftcellelinjer (Fig. 3g). Den serin / threonin-specifikke proteinkinase p38alpha (også kendt som MAPK14, i det efterfølgende benævnt p38) phosphoryleres under EMT.31 interessant nok korrelerede phosphoryleret (aktiv) p38 med høje ekspressionsniveauer af vimentin i MFP-tumorer, og P38-phosphorylering faldt i lungemetastase, hvor vimentinniveauerne var lave (Fig. 3h). Samlet viser disse data, at ceacam5-ekspression er omvendt korreleret med ekspression af EMT-markører i lungemetastaser.

ektopisk overproduktion af CEACAM5 hæmmer TGF-Lars-signalering og ekspression af EMT-markører

i betragtning af at ceacam5-ekspression omvendt korreleret med mesenkymal status, vurderede vi, om CEACAM5 havde en direkte rolle i reguleringen af ekspression af mesenkymale markører. BC3_A2-celler konstrueret til overproduktion af human ceacam5 eller GFP som en negativ kontrol (supplerende Fig. 8a, b) blev undersøgt for ekspression af vimentin og CDH2/N-cadherin (mesenkymale markører) og CDH1/E-cadherin (epitelmarkør). Overekspression af CEACAM5 førte til øget ekspression af CDH1 (supplerende Fig. 8c) og nedsat ekspression af CDH2 (supplerende Fig. 8d) og vimentin (supplerende Fig. 8e). Derudover reducerede overproduktion af CEACAM5 og forsinket TGF-lenra-medieret phosphorylering af SMAD ‘ er i BC3_A2-celler (Fig. 4a, c, supplerende Fig. 9a) og P38 phosphorylering i begge BC3_A2 celler (Fig. 4a, b, supplerende Fig. 9a) og MDA-MB-231 celler (supplerende Fig. 8f, supplerende Fig. 9b). Endelig forsinkede overproduktion af CEACAM5 TGF-Krish-induceret EMT som vurderet ved E-cadherin og vimentin-ekspression (Fig. 4D, supplerende Fig. 9c). Disse resultater tyder på, at CEACAM5 negativt regulerer EMT og identificerer en funktion for CEACAM5 i brystkræftmetastase.

ceacam5 overproduktion nedregulerer ekspression af mesenchymale markører og forringer TGF-Kurt signalering og forringer TGF-kurr signalering. en BC3_A2-celler konstrueret til overproduktion af CEACAM5 eller GFP blev dyrket i nærvær eller fravær af 1 ng/ml TGF-liter i de angivne tidsperioder. Cellulære lysater blev udsat for vestlig blotting for de angivne proteiner. B, C Histogram viser foldeændringen (logskala) i phosphoryleringsstatus for p38 (b) eller Smad2/3 (c) sammenlignet med det på tidspunkt 0 for celler, der udtrykker GFP. Fejlstænger repræsenterer SEM af mindst tre uafhængige eksperimenter. D BC3_A2-celler, der udtrykker GFP eller CEACAM5, blev dyrket i nærvær eller fravær af 1 ng/ml TGF-oprensning i de angivne tidsperioder. Cellulære lysater blev udsat for vestlig blotting for de angivne proteiner. Alle resultater er repræsentative for mindst tre uafhængige eksperimenter. Se også supplerende Fig. 8 og 9

overproduktion af CEACAM5 fremmer metastatisk udvækst og reducerer EMT in vivo

EMT er forbundet med reduceret cellulær proliferation.19 ceacam5 ‘ s evne til at hæmme EMT antydede således, at det kan fungere til at fremme tumorudvækst på metastatiske steder. For at teste denne hypotese blev BC3_A2-celler konstrueret til overproduktion af CEACAM5 eller GFP (kontrol) injiceret i modtagermusens haleårer for at overvåge virkningerne af ceacam5-overproduktion på tumorvækst i lungen. Overekspression af CEACAM5 førte til øget tumorvækst i lungerne (Fig. 5a og supplerende Fig. 10A), nedsat ekspression af vimentin på proteinniveauet (supplerende Fig. 10b) og nedsat phosphorylering af p38 (Fig. 5d, e). Reduktion af ceacam5-niveauer i BC3_A2 med to forskellige shrna ‘ er (Fig. 5b) havde den modsatte virkning ved, at transducerede celler voksede langsommere i lungerne end kontrolceller efter haleveinjektion (Fig. 5c og supplerende Fig. 10c). Derudover resulterede ceacam5-nedslag i øget læsionstal, men nedsat læsionsstørrelse (supplerende Fig. 10d, e). Disse resultater antyder, at ceacam5-lyddæmpning fremmer EMT-og tumorcelleekstravasation, samtidig med at den hæmmer metastatisk udvækst.

ekspression af CEACAM5 fremmer vækst af lungemetastaser. en BC3_A2 celler overproducerende ceacam5 eller GFP blev injiceret i musens haleårer. BLI blev brugt til at kvantificere fotonstrøm i musens lunger på de angivne tidspunkter. Parret t-test, p = 0,03. Fejlstænger repræsenterer sem af biologiske replikater (n = 5 mus pr. B BC3_A2-celler, der udtrykker kontrol shRNA (shLuc) eller to forskellige shrna ‘ er (#3 og #5), der er specifikke for CEACAM5, blev underkastet krt-PCR for at overvåge ceacam5-ekspression. Fejllinjer repræsenterer sem af tekniske triplicater. Se også supplerende Fig. 10. C BC3_A2-celler, der udtrykker shLuc eller to forskellige ceacam5 shrna ‘ er, blev injiceret i musens haleårer. BLI blev brugt til at kvantificere fotonstrøm i musens lunger på de angivne tidspunkter. Parrede t-tests, p = 0,01 for sh#3 og p < 0,001 for sh#5. Data blev normaliseret til det oprindelige tidspunkt og præsenteres på en logskala. Fejlstænger repræsenterer sem af biologiske replikater (n = 5 mus pr. d BC3_A2-celler, der overproducerede CEACAM5, blev injiceret i musens haleårer, og lungerne blev isoleret og udsat for IHC med de indikerede antistoffer. Skalestænger angiver 100 liter. e-celler, der farver positivt for CEACAM5, vimentin eller p-p38 i vævssektionerne repræsenteret i panel d, blev kvantificeret ved hjælp af det automatiserede billeddannelsessystem Vectra 3.0. Parrede t-test, p = 0,0008 for CEACAM5, p = 0,03 for vimentin og p = 0,03 for p-p38. Fejlstænger repræsenterer SEM af mindst tre uafhængige biologiske replikater. f RNA isoleret fra BC3_A2 celler overproducerende CEACAM5 eller GFP og dyrket enten in vitro eller isoleret fra lungen efter haleveinjektion (in vivo, a, d) blev underkastet GSEA-vejanalyse (venstre to kolonner). De øverste 5 nedregulerede (blå) og top 5 opregulerede (røde) processer vises. Bokse angiver FDR <0.1 for statistisk signifikans. NES (normaliseret berigelsesscore). Betydningen af disse veje i P0 og P2 MFP tumorer vs. tilsvarende lungemetastaser er vist til sammenligning (højre to kolonner). Data er repræsenteret af biologiske triplicater. Se også supplerende Fig. 11

for at overvåge, hvordan overproduktion af CEACAM5 påvirkede genekspression, blev BC3_A2-celler konstrueret til overproduktion af CEACAM5 eller GFP dyrket in vitro eller isoleret fra lungen efter haleveinjektion (in vivo). RNA blev isoleret og udsat for Rnasek. Differentiel genekspressionsanalyse blev udført, og GSEA identificerede EMT som den eneste kræftmærkevej, der blev signifikant nedreguleret både in vitro og in vivo ved ceacam5-overproduktion (Fig. 5F, supplerende Fig. 11). Dette resultat svarer til det, der observeres i P0-og P2-lungemetastaser (Fig. 1c, 5f). Samlet viste disse data, at opregulering af ceacam5-ekspression i metastatiske læsioner inducerer MET og forbedrer udvæksten af metastatiske tumorceller på sekundære steder.

ceacam5-ekspression opreguleres i metastatiske læsioner fra brystkræftpatienter

dernæst blev ceacam5-ekspression vurderet i metastatiske læsioner og brysttumorvæv opnået fra patienter med brystkræft. IHC-farvning på et matchet vævssæt bestående af en primær tumor og en lungemetastase fra en patient med brystkræft (supplerende tabel 3) afslørede højere ceacam5-niveauer i lungemetastasen i forhold til den primære brysttumor (Fig. 6a og supplerende Fig. 12a). For at udvide disse analyser er en vævsmikroarray (TMA) bestående af lungemetastaser fra 25 brystkræftpatienter (supplerende Fig. 12b, c og supplerende tabel 3) blev farvet for CEACAM5 (supplerende Fig. 12b), og farvningsintensiteten blev tildelt en score (Fig. 6b). Denne scoringsmetode blev også anvendt på en TMA fra det humane Proteinatlas bestående af humane brysttumorer farvet for CEACAM5.32 størstedelen af lungemetastaser udtrykte høje niveauer af CEACAM5 (Fig. 6c) sammenlignet med brysttumorer (Fig. 6d), hvilket viser, at CEACAM5 var højere i metastatiske læsioner sammenlignet med primære brysttumorer.

ceacam5 proteinniveauer er forhøjede i metastatiske læsioner hos brystkræftpatienter og er omvendt korreleret med ekspression af vimentin. A den primære tumor og tilsvarende lungemetastase fra en patient med brystkræft blev udsat for IHC for at overvåge ceacam5-niveauer. Skalestænger angiver 100 liter. b en tumorvævsmikroarray (TMA) bestående af lungemetastaser fra 25 brystkræftpatienter blev udsat for IHC med et CEACAM5-specifikt antistof, og farvningsintensitet blev scoret. Repræsentative billeder vises. Skalestænger angiver 100 liter. C scoringssystemet i b blev anvendt på TMA bestående af lungemetastaser fra 25 brystkræftpatienter for at vurdere relative ceacam5-niveauer. d scoringssystemet i b blev anvendt på en TMA fra det humane Proteinatlas bestående af 25 primære brysttumorer for at vurdere relative ceacam5-niveauer. e den primære tumor og tilsvarende lungemetastase fra en patient med brystkræft (fra a) blev co-farvet for CEACAM5 og vimentin og analyseret ved immunofluorescensmikroskopi. Skalestænger angiver 100 liter. f-celler, der farver positivt for CEACAM5, vimentin eller begge dele i vævssektionerne repræsenteret i e, blev kvantificeret ved hjælp af det automatiserede billeddannelsessystem Vectra 3.0. g TMA bestående af lungemetastaser fra 25 brystkræftpatienter blev co-farvet for CEACAM5 og vimentin og analyseret ved immunofluorescensmikroskopi. Repræsentative billeder vises. Skalestænger angiver 100 liter. h-celler, der farvedes positivt for CEACAM5, vimentin eller begge dele i vævssektionerne vist i g, blev kvantificeret ved hjælp af det automatiserede billeddannelsessystem Vectra 3.0. Se også supplerende Fig. 12

vi vurderede derefter det matchede vævssæt til co-ekspression af CEACAM5 og vimentin. Co-farvning for CEACAM5 og vimentin afslørede højere niveauer af ceacam5 i lungemetastasen i forhold til Matchet brysttumor, og det omvendte farvningsmønster blev observeret for vimentin (Fig. 6e, f). Derudover udviste en mindre population af tumorceller co-farvning for både CEACAM5 og vimentin (Fig. 6f). Disse celler, der farves positive for begge proteiner, kan repræsentere celler i en hybrid EMT/MET-tilstand.33 TMA bestående af lungemetastaser fra 25 brystkræftpatienter viste også en invers korrelation mellem ceacam5 og vimentinfarvning (Fig. 6g, h; supplerende Fig. 12a-e). Disse resultater bekræftede konklusioner med vores TNBC-modeller og viste, at ceacam5-ekspression er omvendt korreleret med vimentin-ekspression i primære brysttumorer og metastatiske læsioner. Samlet set antyder disse resultater, at CEACAM5 fremmer MET for at lette tumorudvækst på metastatiske steder (supplerende figur 12a, b).