diskussion
i den aktuella studien försökte vi bedöma om CD av möss kan ha en felfrekvens som översattes till ett djurskyddsproblem. Vi använde tid till andningsstopp som vår surrogatmarkör för AVMA-kriteriet ”tid som krävs för att framkalla medvetslöshet.”1 Vi insåg att ren avskiljning av den höga cervikala ryggraden ovanför C2 kan inducera andningsstopp utan medvetslöshet, men det grova traumat av de olika CD-metoderna verkade osannolikt att resultera i detta resultat.
vi ställer in tid för andningsstopp lika med 0 s som vår cutoff för att definiera framgångsrik eutanasi. Vi tror att någon eutanasi metod efter vilken möss kan fortsätta andas (oavsett hur länge) kräver försiktighet. Om det utförs på oanestetiserade möss lämnar ofullständig eutanasi en potentiellt medveten mus som upplever en allvarlig traumatisk skada tills en operatör kan upprepa proceduren eller byta till en annan eutanasi-metod. Komplett midthoracic CNS-avskiljning kan lämna den kaudala kroppen smärtstillande, men skadad vävnad som omger och kranial till lesionen kan fortfarande vara smärtsam.17,25 djur som har tillräcklig motorisk innervation för att fortsätta andningen skulle sannolikt ha tillräcklig afferent innervation för att smärta skulle uppstå.
i vårt pilotarbete fortsatte vissa möss att andas så länge som 15 minuter innan vi euthaniserade dem med natriumpentobarbital; dessa möss kunde sannolikt ha fortsatt andas ännu längre. Hade de tagits bort från anestesi och återfått medvetandet, med flera ryggmärgsskador, kunde deras lidande ha varit allvarligt. Även som ett tillägg till inhalationsmedel eller injicerbara eutanasi-medel, var en mus att återhämta sig (eventuellt inuti en slaktkroppsfrysare) från en dåligt utförd dislokationsteknik, skulle potentialen för smärta eller nöd förvärras. Det är viktigt att alla CD-metoder uppfyller kravet att i huvudsak 100% av djuren permanent slutar andas omedelbart.
våra 21% misslyckade procent för CD-metoder, baserat på tid till andningsstopp, liknade den misslyckade procenten i rapporter om möss som genomgick CD men saknade radiografiskt uppenbara livmoderhalsskador.7,14 författarna till de tidigare studierna7, 14 beskriver inte deras radiografiska metoder. Eftersom inga händelser av misslyckad eutanasi rapporterades, 7, 14 författarna kan ha felaktigt läst möss som hade livmoderhals-och bröstskador men otillräcklig distraktion under radiografi som endast bröstskador.
mot bakgrund av tidigare fynd,7,14 vi postulerade att tillräckligt kraftfull spänning applicerad var som helst längs ryggmärgen kan inducera medvetslöshet och andningsstopp, även när skeletttraumet var kaudalt till den rekommenderade hög-cervical regionen. Vår 100% misslyckade kurs för bröstdislokationsgruppen stöder inte denna hypotes. Vi använde thoraxdislokation hos bedövade möss för att modellera den felaktiga tekniken som en dåligt utbildad operatör kan utföra, och vi har verifierat att korrekt teknik är nödvändig för framgångsrik eutanasi hos möss.
AVMA-riktlinjer har behandlat CD i allmänhet, utan specifik beskrivning av proceduren, vilket återspeglar brist på jämförande bedömningar av olika CD-tekniker. Olika publikationer beskriver olika tekniker för att utföra cervikal dislokation.8,13,14,16,22 andra, inklusive AVMA-panelrapporterna, skiljer inte mellan olika CD-tekniker.3,10,12,24 förutom de 3 metoder som vi valde har författarna specificerat att MCD ska utföras genom att dra upp i en 30 kg vinkel, i hopp om att odontoidprocessen i C2-ryggkotan kommer att skada ryggmärgen och därigenom öka effektiviteten av tekniken.7 fraktur av denna lilla beniga process i en mus är osannolikt att vara synlig radiografiskt. Dessutom beskriver vissa operatörer att dra tills skallen känns vara helt kopplad till ryggraden, och det är den metod vi undervisar på vår institution. Denna praxis är rimlig när CD används efter andra eutanasitekniker (till exempel anestetisk överdosering) men detta längre, långsammare förfarande kan orsaka ytterligare smärta hos ett ännu inte medvetslöst djur.
radiografi efter döden kan spela en roll för att bedöma framgången med eutanasi efter händelsen, men denna teknik är arbetsintensiv och måste tolkas försiktigt. Vi var oroliga för att intakta ledband utan tillräcklig distraktion kunde hålla skallen tillräckligt nära ryggraden för att maskera framgångsrik luxation i vissa fall. Vi hittade röntgenbilderna efter döden lättast att tolka när spänning applicerades för att sträcka slaktkroppen, men då skapade vi ett misstänkt gap mellan C2 och C3 ryggkroppar som krävde noggrann bedömning. Negativa CO2-endast kontroller (Figur 2) var till hjälp för att skilja lesioner från normala. När vi satte tid till andningsstopp som vår ’guldstandard’, hade cervikal radiografi ett positivt prediktivt värde på endast 71%. Därför, när radiografi används som ett verktyg för kvalitetskontroll eller kompetensbedömning, kommer vissa fall av misslyckad eutanasi att missas.
medan alla misslyckade eutanasier hade bröstkorgs-eller ländskador (eller båda), så gjorde 50 av de 64 framgångsrika eutanasierna. Vi drar slutsatsen att förekomsten av bröst-eller ländskador inte är diagnostisk för dålig teknik. Dessutom hade ingen av de 11 CD-djuren som gick till 180-s-slutpunkten observerbara livmoderhalsskador. Däremot gjorde 63 av 64 framgångsrika CD-fall det, och musen som saknade en observerbar cervikal lesion (Figur 3) kan återspegla feldiagnos av en subtil lesion eller tjäna som bevis för att tillräckligt allvarligt distalt ryggmärgsskada kan orsaka andningsstopp; faktum är att 2 möss i bröstdislokationsgruppen slutligen uppnådde andningsstopp innan en annan teknik kunde tillämpas. Dessutom genomgick 6 CD-möss misslyckad eutanasi men dog före 180-s-slutpunkten, även om radiografi avslöjade livmoderhalsskador hos 5 av dessa möss. Radiografisk feldiagnos är möjlig, liksom möjligheten att mellanliggande skador, även om de är radiografiskt uppenbara, i slutändan kan vara dödliga men är för långvariga för att kvalificera resultatet som en god död.’
vi känner igen några begränsningar för vår studie. Vi utförde inte alla beskrivna eller möjliga variationer av CD i möss. Vi gjorde inget försök att använda hjärnvågor eller andra mätningar för att analysera intakt hjärnfunktion efter dislokation. Vi tog inte bort andningsdjur från anestesimasken för att bedöma potentialen för återgång till medvetandet. Förekomsten av en tid till andningsstillestånd som överstiger 0 s antyder åtminstone minimal intakt hjärnfunktion, ett tillstånd som verkar oförenligt med en ’god död;’ Vi presenterar inga uppgifter om kvaliteten på döden när tiden till andningsstillestånd är 0 s.
operatörseffekten som vi noterade kräver ytterligare undersökning. Med endast 2 operatörer kunde effekten inte tillskrivas skillnader i operatörens ålder, träning, styrka eller någon annan faktor. Sannolikt skulle andra operatörer skilja sig åt i sina framgångsgrader. Uppföljningsstudie för att mer fullständigt undersöka operatörens effekt måste ta hänsyn till olika operatörers kunskap om att de fick poäng och vilken effekt denna kunskap kan ha på deras prestanda. Att den mer framgångsrika operatören fortfarande misslyckades i 8, 1% av fallen väcker oro.
dessutom kan radiografisk diagnos vara föremål för tolkningseffekt. Utan en ’guldstandard’ för korrekt radiografisk diagnos (till exempel frånvaro av en synlig lesion i en framgångsrik eutanasi kan innebära antingen att ryggradsfraktur eller luxation på den platsen inte är nödvändig för snabb död, eller att röntgenfotografen missade lesionen) kunde vi inte undersöka möjligheten till tolkningseffekt. Pilotarbete med vanliga filmröntgenbilder avslöjade blygsam oenighet i diagnosen bland flera veterinärer som läste röntgenbilderna.slutligen var alla möss förskjutna under isofluranbedövning av humana skäl, eftersom vi visste att vi skulle hålla misslyckade fall vid liv och andas i flera minuter snarare än att upprepa proceduren omedelbart. Eftersom bedövningsmedlet avskaffade muskeltonen kan denna metod modellera postmortem CD bättre än den modellerar CD som den enda metoden för eutanasi. Eftersom det är andningsdepressivt kan isofluran ha påskyndat andningsstopp i vissa mellanliggande fall. Som ett neuroprotektivt medel kan isofluran ha försenat döden. Hur som helst hindrade användningen av isofluran oss från att bedöma potentiellt medvetande i de misslyckade fallen som fortfarande andas, eftersom vi aldrig avvände dem från bedövningsmedlet för att göra den bedömningen.
vi drar slutsatsen att 3 metoder för CD kan resultera i misslyckad eutanasi där möss fortsätter att andas efter försöket dislokation. Vi kan inte ange om medvetande eller smärtuppfattning åtföljer detta resultat. Övning på bedövade möss kan vara en användbar träningsmetod, med tid till andningsstopp som mått på trainees framgång. Radiografi är ett arbetsintensivt kompetensbedömningsverktyg som inte verkar vara mer informativt än observation av praxis på bedövade möss. Om ytterligare studier replikerar våra resultat, kommer rekommenderade metoder att behöva förändras, huruvida CD av oanestetiserade möss ska tillåtas, identifiera en CD-metod med högre framgångsgrad eller betona att möss måste ses noga efter CD och om de fortfarande andas (vilket kan vara svårt att fastställa med tanke på motorutloppet som ofta följer CD), behandlas omedelbart genom samma eller en alternativ metod för eutanasi.
