TEXT

ett antal humana cancerformer är känsliga för mitotisk stress, vilket innebär kontrollpunktsfel. Många proteiner som innehåller forkhead-associerade (FHA) domäner är cellcykelkontrollpunkter. För att isolera nya mitotiska kontrollpunktgener sökte Scolnick och Halazonetis (2000) en est-databas för cDNA som innehåller FHA-domäner. De identifierade ett cDNA som de kallade CHFR för ’checkpoint med gaffelhuvud och ringfingerdomäner’ som kodar för ett 664-aminosyraprotein med FHA-och ringfingerdomäner inom dess N-terminal. Inom sin C-terminal innehåller CHFR en cysteinrik region som inte visade signifikant likhet med något protein i GenBank-databasen, men är mycket bevarat mellan människor och möss. Genom Northern blot-analys är CHFR-uttryck allestädes närvarande i normala mänskliga vävnader; emellertid innehöll 3 av 8 undersökta humana cancercellinjer inte CHFR-mRNA. Samma cellinjer uttryckte inte CHFR-protein, bestämt genom immunoblot-analys. Scolnick och Halazonetis (2000) visade att chfr-genen inaktiverades på grund av brist på uttryck eller genom mutation i 4 av 8 undersökta humana cancercellinjer. Normala primära celler och tumörcellinjer som uttryckte vildtyp CHFR uppvisade fördröjd inträde i metafas när centrosomseparation hämmades av mitotisk stress. Däremot gick tumörcellinjerna som hade förlorat CHFR-Funktionen in i metafas utan dröjsmål. Ektopiskt uttryck av vildtyp CHFR återställde cellcykelfördröjningen och ökade cellernas förmåga att överleva mitotisk stress. Således drog Scolnick och Halazonetis (2000) slutsatsen att CHFR definierar en kontrollpunkt som försenar inträde i metafas som svar på mitotisk stress.

Toyota et al. (2003) analyserade mönstret av CHFR-uttryck i ett antal humana cancercellinjer och primära tumörer. De fann CPG-metyleringsberoende tystnad av CHFR-uttryck i 45% av cancercellinjer, 40% av primära kolorektala cancerformer, 53% av kolorektala adenom och 30% av primära huvud-och nackcancer. Uttrycket av CHFR korrelerades exakt med både CpG-metylering och deacetylering av histoner H3 och H4 i den CPG-rika regleringsregionen. Celler med CHFR-metylering hade ett inneboende högt mitotiskt index när de behandlades med mikrotubuli-hämmare. Detta innebär att celler i vilka CHFR var epigenetiskt inaktiverad utgjorde förlust av funktion alleler för mitotisk kontrollpunktskontroll. Sammantaget belyser dessa fynd den väg genom vilken den mitotiska kontrollpunkten kringgås i cancerceller och föreslår att inaktivering av kontrollpunktgener är mycket mer utbredd än tidigare misstänkt.

Ahel et al. (2008) identifierade ett nytt Poly (ADP-ribos)-bindande zinkfinger (PBZ) motiv i ett antal eukaryota proteiner som är involverade i DNA-skadans respons och kontrollpunktreglering. PBZ-motivet krävs också för posttranslationell poly(ADP-ribosyl)ation. Ahel et al. (2008) demonstrerade interaktion mellan poly (ADP-ribos) med detta motiv i 2 representativa humana proteiner, APLF(611035) och CHFR, och visade att verkningarna av CHFR i antefas-kontrollpunkten upphävs genom mutationer i PBZ eller genom hämning av Poly (ADP-ribos) syntes.

uttryck av det mitotiska kontrollpunktsproteinet CHFR förloras i 20 till 50% av primära tumörer och tumörcellinjer. För att undersöka om nedreglering av CHFR bidrar direkt till tumörgenes, Yu et al. (2005) genererade chfr knockout möss. Chfr-bristfälliga möss befanns vara cancerbenägna, utveckla spontana tumörer och ha ökad hudtumörincidens efter behandling med dimetylbenz(alfa)antracen. Chfr-brist ledde till kromosomal instabilitet i embryonala fibroblaster och reglerade det mitotiska kinaset aurora A (603072), som ofta uppregleras i en mängd olika tumörer. Chfr interagerade fysiskt med aurora A och ubiquitinerad aurora A både in vitro och in vivo. Yu et al. (2005) drog slutsatsen att CHFR är en tumörsuppressor och att den säkerställer kromosomstabilitet genom att kontrollera uttrycksnivåerna för viktiga mitotiska proteiner såsom aurora A.