introduktion

hepatocellulärt karcinom (HCC) som representerar den största histologiska subtypen av primär levercancer, är den femte vanligaste cancer i världen och den tredje ledande orsaken tillcancerdödlighet (1,2). De högsta levercancerfrekvenserna finns i utvecklingsländer, särskilt i östra / sydöstra Asien och mellan – / Västafrika, medan andelen är låg i södra och centrala,västra Asien, norra och östra Europa (3). Genetisk förändring och epigenetiskahögriskfaktorer såsom kronisk infektion med HBV eller HCV,levercirros, alkoholisk leversjukdom och aflatoxiner står för den höga sjukligheten hos HCC (4-6).Emellertid är den molekylära mekanismen åtföljd avhepatokarcinogenes och progression fortfarande i stort sett oklart.Således är det viktigt för oss att klargöra etiologin och undersöka den vitala molekylära förändringen som ligger bakom hepatocellulärcarcinominitiering och progression, och slutligen förbättra våra nuvarande koncept för diagnos, screening och behandling av dettasjukdom.

under processen med hepatokarcinogenes, denabrogation av cellcykelkontrollpunkter är ett viktigt kännetecken somkan främja cancerbildning (2). som en av regulatorerna för cellcykelkontrollpunkten verkar celldivisionscykel 20 (CDC20)fungera som ett reglerande proteininteragerande med det anafasfrämjande komplexet/cyklosomen (APC/C) i cellcykeln, vilket krävs för anafasinitiering Ochsen mitosutgång (7,8). Två regulatoriska faktorer, CDC20 och Cdh1 binder direkt till APC och aktiverar dess cyklin ubiquitinationaktivitet under mitos och G1-fas (9,10).Det har rapporterats att det receptorassocierade proteinet 80 (RAP80), som rekryterar BRCA1 till DNA-skador i ubiquitinsignaleringsvägen inducerad av DNA-skada, kan brytas ned avanafasfrämjande komplex (APC/C-Cdc20) eller (APC/C-Cdh1) genompolyubiquitination under mitos till G1-fasen (11). Utarmningen av RAP80 visade adefektiv kontroll av G2-M-faskontrollpunkt och främjade mitoticcell-cykelprogression.

CDC20-uttryck kan anmärkningsvärt undertryckas av p53-protein som hämmar malign transformation genom reglering av cellcykeln, cellulär senescens och apoptosrelaterade gener(12). Högt uttryck av Cdc20har rapporterats i olika maligna tumörer inklusive pankreatiskduktal adenokarcinom (13), oralskvocellkarcinom, magcancer (14), livmoderhalscancer (15) och olika cancerceller (14,16).Emellertid har uttrycksmönstret för CDC20 och dess kliniskabetydelse i humant hepatocellulärt karcinom inte förklarats.

i denna studie, genom att analysera microarray dataset (anslutning nr. Gse14520)från genuttryck Omnibus (GEO) databas (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/) fann vi att Cdc20 var den viktigaste noden i HCC-molekylära interaktionsnätverk. Vigranskade expressionsnivån för CDC20 i primär HCC och adjacentnon-tumörvävnader och utvärderade dess kliniska patologiska betydelse i 132 arkiverade HCC-prover. Effekten av knockdown av Cdc20 av siRNA på tillväxt och cellcykel av levercancerceller undersöktes också. Våra resultat tyder på att CDC20 kan spela en betydande roll i utvecklingen av HCC.

material och metoder

bioinformatik analys

Microarray dataset GSE14520 (17) hämtades från GEO. Totalt 183 HCC och 179 motsvarande para-karcinomvävnader som analyserades med Affymetrix U133A GeneChips från kohort 2 Kinesepatienter användes i denna studie. Genuttrycksprofileringsdata sammanfattades med RMA-metoden(18) och entrez gencentrerade CDF-filer (19) (istället för originalAffymetrix CDF-filer), som filtrerade icke-specifika sonder på theGeneChips och slog samman flera sonduppsättningar som representerar sameEntrez-genen i en sonduppsättning. Signifikansanalys av mikroarray (SAM) (20) utfördes tillidentifiera olika uttryckta gener mellan HCC och motsvarandepara-karcinomvävnader. Delta sattes till 2,25 och tröskeln ofFDR sattes till 0,001. Gener överuttryckta i HCC som uttrycktes i mer än 50 HCC-vävnader men mindre än 10 motsvarande para-karcinomvävnader studerades. Generna analyserades vidare med GenCLiP-programvara (21) (http://ci.smu.edu.cn) för att kommentera genfunktioner ochkonstruera molekylära interaktionsnätverk.

Etikdeklaration

de kliniska proverna användes endast för forskningsändamål. Godkännande erhölls från ethics committee of Chinesespla General Hospital (LREC 2012/40). Alla prover samlades in under förutsättning av ett tidigare skriftligt informerat samtycke från patienterna.

patienter och vävnadsprover

sexton par färska HCC och angränsande icke-tumörvävnader som används för realtids-PCR och western blot-analyser samlades in under operation från det kinesiska Pla General Hospital(Peking, Kina) från November 2012 till februari 2013. Vävnaderfrystes i flytande kväve tills de användes. Paraffininbäddad, Arkiverad HCC och intilliggande icke-tumörvävnader som används förimmunohistokemi (IHC) erhölls från 132 HCC-patienter somundergick partiell leverresektion på samma sjukhus mellanjanuari, 2006 och December, 2007. Medianåldern för patienternavar 52 år (intervall 24-80 år).

cellkultur

en normal levercellinje (LO2) och tre HCC-celliner (HepG2, SMMC7721, Huh7) köptes från American Typculture Collection (ATCC, Manassas, VA) eller Chinese Academy ofScience Cell Bank och upprätthölls i Institute ofBiotechnology, Academy of Military Medical Sciences. Alla celler varupprätthållna i dulbeccos modifierade Örnmedium (DMEM, Invitrogen,CA) kompletterat med 10% fetalt bovint serum (FBS, Gibco, Carlsbad,CA) och 2 mM L-glutamin, 100 U/ml penicillin, 100 oc/mlstreptomycin vid 37 oc C med 5% CO2.

RNA-extraktion, cDNA-syntes ochreal-time PCR-analys

totalt RNA extraherades från cellinjer och vävnadsprover med användning av Trizolreagens (Invitrogen) enligt tillverkarens instruktioner. Totalt 2 baccarg RNA reverseradestranskriven med TransScript och cDNA Synthesis Kit fråntransgen Biotech (Peking, Kina). Real-time PCR was performed toexamine CDC20 mRNA level in cell lines and tissue samples by usinga Bio-Rad iQ5 Multicolor Real-Time PCR Detection System (Bio-Rad,Hercules, CA). β-actin was used as an internal control fornormalization. PCR primers were designed using the Primer Premier 5software and the sequences were: CDC20 forward,5′-TCGCATCTGGAATGTGTGCT-3′; and reverse,5′-CCCGGGATGTGTGACCTTTG-3′; β-actin forward,5′-TGACGTGGACATCCGCAAAG-3′; and reverse, 5′-CTGGAAGGTGGACAGCGAGG-3′. Expressionsdata normaliserades till det geometriska medelvärdet av hushållningsgenen för actin och beräknades med 22 och resultaten uttrycktes med 2−Acc.

Western blot-analys

Western blot-analys utfördes under standardprotokollet. SDS-polyakrylamidgelelektrofores (10%) användes för att separera proteinet som sedan elektrotransfererades från gelen till ett POLYVINYLIDENFLUORID (PVDF) membran. Efterblockering med 5% torkad skummjölk för 1 h, membranet varinkuberat med kanin anti-human CDC20 polyklonal antikropp (1: 1000, Bioworld Technology, St. Louis Park, MN) för 1 h vid rumstemperaturen. Musen anti-human monoklonal antikropp för monoklonal tubulin (1: 5000; Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) användes som enintern kontroll. Efter tvättning med Tris-buffrad saltlösning medtween – 20 (TBST) tre gånger inkuberades membranet medsekundär pepparrotperoxidas-konjugerad antikropp mot kaninmus (utspädning 1:5000). Kemiluminescerande detektion varutförd med Immobilon Western Chemiluminescent HRP Substratekit (Millipore Corporation, Billerica, MA).

immunohistokemi (IHC) ochscoring

immunohistokemi för CDC20-uttryck i HCC ochinticent icke-tumörprover utfördes med användning av standardmetoder.I korthet inkuberades vävnadssektioner med kanin anti-Cdc20utspädd 1: 200 (Bioworld-teknik) över natten vid 4 msk C. bovint serumalbumin (1%; BSA) utan primär antikropp användes som negativkontroll. Den sekundära poly-pepparrotperoxidas (HRP)anti-kanin IgG-antikropp (ZSGB-Bio, Peking, Kina) inkuberadesi rumstemperatur i 20 min.

alla de immunhållna sektionerna granskades ochskärdes oberoende av två patologer i en blindad mannerutan kunskap om den kliniska patologiska informationen, baserad på h-poängmetoden, som beaktar färgningsintensiteten tillsammansmed andelen celler som färgar positivt (23,24).För H-score-metoden valdes 10 fält slumpmässigt vid 400-magnifiering i Brasilien. Färgningsintensiteten i cellerna fick poäng som 0,1, 2 och 3 motsvarande den negativa, svaga, mellanliggande respektive starka färgningen. I varje fält räknades det totala antaletceller och celler färgade vid varje intensitet. H-poängen beräknades enligt formeln: (%av celler som färgades vidintensitetskategori 1, 1, 1, + (%av celler som färgades vid intensitetskategori2, 2, 2) + (%av celler som färgades vid intensitetskategori 3, 3, 3). H-poängvarierade från 0 till 300 där 300 representerade 100% av cellerna starkt färgade (3+) (24). Hög CDC20expression definierades som färgning H-poäng av celler 200.

undertryckande av CDC20 genom små interferingRNA (siRNA)

dubbelsträngad, liten interfererande RNA (siRNA) varsyntetiserad och renad av GenePharma (Shanghai, Kina). Desubsekvenser som motsvarar den kodande regionen för mänsklig Cdc20var: sense, 5 ’-GGAGCUCAUCUCCAGGCCA UUU-3′; antisense,5′-AUGGCCUGAGUGAGCUCCUU-3’. En krypterad icke-inriktning siRNA varanvänds för den negativa kontrollen. Dessa siRNAs löstes indietylpyrocarbonate (DEPC) vatten för att nå en koncentration av 20 occurm. Levercancer HepG2-celler behandlades med CDC20 siRNA ellernegativ kontroll siRNA i 20 nM genom att använda Interferinet invitro siRNA transfektionsreagens (Polyplus Transfection, NewYork, NY).

kvantitativ realtids-PCR och western blot-analyseranvändes för att detektera interferenseffekten av siCDC20. Cellersom obehandlades eller behandlades med negativa kontroll sirnaoligonukleotider var kontrollgrupperna.

cellulär proliferationsanalys

två 25-cm2 plastkolvar var och eninokulerades med 2 105 105 levercancerceller (HepG2), som sedan transfekterades med 20 nM negativ kontroll siRNA respektive CDC20siRNA för 48-h inkubation. Därefter smältes cellerna och såddes i 6-brunnsplattor innehållande 2 ml medium per brunn.Därefter smältes cellerna från en brunn och räknades avautomatiserad cellräknare (Invitrogen) var 24: e timme fram till dag fem.

Fluorescensaktiverad cellsortering(FACS) test av cellcykeln

siRNA för CDC20 och negativ kontroll sirnaoligonukleotider transfekterades i HepG2-celler medinterferin in vitro siRNA transfektionsreagens för 48 h.efter behandling med 2 accug/ml tymidin (Sigma-Aldrich, St. Louis,MO) för 24 h skördades celler vid tidpunkten för behandling av 0, 3, 6, 9, 12-h efterta bort tymidin från mediet och fixeras med 70% alkohol.Före analyserna tvättades cellerna med PBS, behandlades med 1 mg/mlrnas A vid 37 kcal C i 30 minuter och färgades sedan med propidiumjodid(PI). Analyser utfördes av BD FACSCalibur (Becton-Dickinson,Franklin Lakes, NJ) och resultaten analyserades av WinMDI Version 2.9 programvara.

statistiska analyser

alla statistiska analyser gjordes med hjälp av det statistiska mjukvarupaketet IBMSPSS 20.0. Envägsanalys avvarians (ANOVA) användes för att jämföra uttrycket av CDC20 mRNAnormalized till Tubi-aktin i cellinjer. Samma metod var ocksåutförs vid jämförelse av den histologiska differentieringen i tumörvävnader normaliserade till normala leverprover. Datajämförelser i tvågrupper utfördes av studentens t-test. Testet 22användes för att analysera förhållandet mellan CDC20-uttryck ochklinikopatologiska egenskaper. Bivariata korrelationer mellanvariabler beräknades med Spearmans korrelationskoefficienter.Nivån på statistisk signifikans sattes till P<0.05 för allatests.

resultat

CDC20 är huvudnoden i HCC-molekylära interaktionsnätverk

Sam-analys identifierade 4 358 gener överuttryckta inHCC, där 137 gener uttrycktes i mer än 50 HCC-vävnader,men i mindre än 10 para-karcinomvävnader. GenCLiP-analys visadeatt bland de 137 generna var 72 gener relaterade till cellcykeln(P=1.238 e-15, genom testet i 25×2), 19 gener var relaterade tillspindelmontering (P=2.172 e-55, genom testet i 22×2) och 26 gener var relaterade till kromosomsegregering (p=5.472 E-55, X2-test). Bland de molekylära nätverk som konstruerats med de 137 generna var CDC20 den viktigaste noden som inte tidigare rapporterats vara relaterad till HCC. Nio gener (NEK2, E2F1,BUB1, BUB1B, AURKB, CCNB1, CCNB2, UBE2C och CDKN2A) är kända för attinteragera med CDC20, där 7 gener var relaterade till spindleassembly checkpoint (SAC) (Fig.1). Målet för SAC är CDC20 (25). Således drog vi slutsatsen att i HCC leder överuttryck av CDC20 till frånvaro av SAC och celler snabbt blir aneuploida.

CDC20 är överuttryckt i HCC

kvantitativ realtids-PCR användes för att undersökatranscriptnivå av CDC20 i tre HCC-cellinjer (HepG2, SMMC-7721 och Huh7) och en normal levercellinje (LO2). CDC20 mRNA-nivåvar högre i alla de tre HCC-cellinjerna än i normalcelllinjen (Fig. 2).

För att avgöra om uppregleringen avcdc20 i HCC-cellinjer är liknande hos HCC-patienter, utförde vikvantitativ realtids-PCR på 16 par matchade HCC och adjacentnormala levervävnader. Såsom visas i Fig.3A, CDC20 befanns vara differentiellt överuttryckt i 14 avalla undersökta humana primära HCC-prover jämfört med icke-cancerousprover från samma patienter. Dessutom var förhållandet tumör/icke-tumör(T/NT) för CDC20 mRNA-uttryck åtminstone >2-faldigt i alla dessa 14 uppreglerade prover, och det högsta förhållandet var till och med upp till cirka 40-faldigt. Proteinnivån av CDC20 bekräftades i allaDe 16 Parade vävnadsproverna genom western blot-analys. Bild J1.47v programvara användes för att kvantisera den grå nivån för varje band ochberäkna CDC20 T/NT-förhållandet för varje patient som normaliserar med A-tubulin. Resultaten avslöjade att alla undersökta HCC-prover visade enhögre expressionsnivå av CDC20-protein utom prov 1 och sample4, vilket överensstämde med mRNA-nivån (Fig. 3B). Dessa fynd indikerade attcdc20 vanligtvis uppreglerades i antingen HCC-vävnader eller celllinjer.

immunohistokemifärgning av CDC20protein

immunohistokemi (IHC) utfördes för att analyseraproteinuttrycket och lokaliseringen av CDC20 i 132paraffininbäddade arkiverade HCC-vävnadsprover, inklusive 14 fallav väl differentierade, 78 fall av måttligt differentierade och 40 fall av dåliga differentierade tumörer. CDC20-protein uppreglerades (h-poäng 200) i 90 (68,18%) av 132 HCC-vävnader. Som visas inFig. 4A, höga nivåer av CDC20 varnärvarande i primära HCC-lesioner och den positiva färgningen huvudsakligenlokaliserad i cytoplasma och kärnor. Däremot var CDC20NEGATIVT eller svagt färgat i motsvarande icke-tumörvävnader. Genom att kvantitativt jämföra poängen för CDC20-färgning mellan 132arkiverad HCC och intilliggande icke-tumörvävnader (huvudsakligen inkluderandehepatocirros och hepatit) ökade poängen för CDC20-färgning avsevärt i HCC-prover jämfört med peritumörprover (Fig. 4B). Dessutom ökade poängen för CDC20-färgning signifikant tillsammans medprogressionen av tumörhistologisk differentiering från vältopoorly differentierade vävnader (Fig.5).

korrelation mellan ökad CDC20expression och clinicopathological parametrar för HCC

förhållandet mellan CDC20 protein expressionoch de clinicopatholigical särdrag hos 132 HCC-patienter varvidare analyseras. Som sammanfattas i tabell i var CDC20-uttryckbetydligt associerad med kön (P=0,013), tumördifferentiering (P=0,000), TNM-steg (P=0,012), P53 och Ki-67uttryck (P=0,023 respektive P=0,007). Nostatistiskt signifikant samband hittades emellertid mellan hög CDC20expression och andra klinikopatologiska egenskaper inklusiveålder, tumörstorlek, HBV-infektion, serum AFP-nivå, levercirros,vaskulär invasion och intra/extra levermetastas. Spearmancorrelation analys avslöjade att högt uttryck av CDC20 varnära relaterad med kön (R=0,215, P=0,013), fattigare tumördifferentiering (R=0,421, P<0,001), avancerad TNM staging(R=0,218, P=0,012), högre uttrycksnivå för p53 (R=0,212,p=0,014) och Ki-67 (r=0,235, p=0,007) (tabell II). Sammantaget indikerade dessa resultat att CDC20 var starkt uttryckt i HCC-vävnader och dessuttryck nära korrelerat med differentieringen och progressionen av HCC.

undertryckande av CDC20-uttryck bysiRNA

den kvantitativa realtids-PCR avslöjade 90% transkriptionsnivå undertryckning av CDC20 vid 48 h eftertransfektion med siCDC20, jämförelse med obehandlade celler eller celltransfekteras med negativ kontroll sirna (fig. 6A) (P< 0,0001). Den västra blotanalysen visade också en uppenbar undertryckning av CDC20-proteinnivånat 48 h efter transfektion med siCDC20 (Fig. 6B). Det förändrade uttrycket av cyklinberoende kinashämmare 1A (p21) protein undersöktes också av western blot-analys, och resultaten visade att P21-proteinnivån var anmärkningsvärt uppreglerad på grund av undertryckandet av CDC20 (Fig. 6B).

effekt av cdc20-undertryckning på cellproliferation och cellcykeln

cellproliferationsanalys avslöjade att celltillväxten av CDC20 siRNA-transfekterade celler var anmärkningsvärt inhiberadjämfört med cellerna transfekterade med negativ kontroll siRNA(Fig. 6C). Hämningen av cellproliferation av siCDC20 förväntades åtföljas avarrest vid metafas i cellcykeln. Genom flödescytometritest observerades ett ökat antal celler i G2 / M-fasen i sicdc20transfekterade celler jämfört med celler transfekterade med negativecontrol siRNA (Fig. 6D). Dessa data indikerade att undertryckande av CDC20 hämmade celltillväxt genom att minska G2 / M-fasstopp.

diskussion

genom bioinformatikanalys av en mikroarraydataset från GEO-databasen identifierade vi CDC20 som var majornode i HCC-molekylära interaktionsnätverk, det var relaterat till Spindle assembly checkpoint (SAC) i cellcykel. Undertumorigenes, defekter eller störningar i spindelmonteringcheckpoint ansågs vara ansvariga för den ökade graden avaneuploidisering (26). Mondalet al har rapporterat att CDC20 är överuttryckt i primärhuvud-och nacktumörer och flera orala plavocellkarcinom(OSCC) cellinjer. Hög expressionsnivå av CDC20 i OSCC-celler ärassocierad med för tidig anafaspromotion, vilket leder till mitotiska abnormaliteter (27). Studier harockså avslöjat att högt CDC20-uttryck detekteras i oraltquamouscellkarcinom och kolorektala cancervävnader och dessöveruttryck kan förutsäga en dålig prognos för patienter (28,29).

CDC20 krävs också för sena anafasceller toexit från mitos (30). TargetingCDC20 resulterar i blockering av mitosutgång, vilket kan vara en bättrecancerterapeutisk strategi för att döda cancerceller mereffektivt än spindelstörande läkemedel (31). Wang et al rapporterade attcdc20, som kan fungera som ett onkoprotein för att främja framsteg och utveckling av mänskliga cancerformer, representerar ett lovande terapeutiskt mål (32). Även om CDC20: s roll i tumörgenes och prognos för flera humancancers har undersökts djupt och bekräftats, begränsade studierhar undersökt CDC20: s potentiella funktion vid initieringenoch progression av hepatocellulärt karcinom.

i denna studie bedömde vi expressionsnivån förcdc20 i 16 Parade färskfrysta HCC-vävnader och motsvarandeicke-tumörprover. Resultaten indikerade att medelvärdet mRNA ochproteinnivå av CDC20 i HCC-vävnader var mycket högre än imatchade icke-tumörvävnader. Immunohistokemi användes förundersökning av den subcellulära platsen för CDC20 och dessförhållande till kliniska patologiska parametrar för HCC patients.By genom att använda sig av testet för att ta reda på att högre CDC20-proteinexpressionsnivå var associerad med kön, tumördifferentiering, TNM-Stadium, p53 och Ki-67-uttryck. För att undersöka den potentialbiologiska funktionen och molekylär mekanism av CDC20 i HCC, wedesigned en dubbelsträngad, liten interfererande RNA (siRNA) targetingCDC20 att störa dess uttrycksnivå i HepG2 cellinjen. Genom cellulär proliferationsanalys och FACS-test fann vi detceller transfekterade med sicdc20 oligonukleotider visade minskadtillväxthastighet och ökad andel celler i G2/M-scenen.

den specifika knockdownen av CDC20 av siRNA visade en undertryckt effekt mot levercancercellsproliferation invitro, vilket indikerade att ÖVERUTTRYCKET av CDC20 mightbe förväntas påskynda cellproliferation och främja tumörinitiering och progression av HCC. Levercancercellerna medundertryckt CDC20-uttryck inducerades att ackumulera inG2 / M-fas, vilket kan vara ansvarigt för inhiberingen av celltillväxt. Cyklinberoende kinashämmare 1A (p21) som är kändatt delta i G2/M-kontrollpunkten (33), visade sig vara uppreglerad när CDC20-uttrycket undertrycktes specifikt i levercancerceller. P21 kan hämma aktiviteten hos CDK som leder tillackumulering av ofosforylerat RB-tumörsuppressorprotein, vilket inhiberar transkriptionell aktivering av E2F och därefterförhindrar inträde av cellerna i S-fasen av cellcykeln(34).

Sammanfattningsvis är detta den första studien som syftar till att undersöka CDC20-uttryck i HCC-vävnader och cellinjer, vilket ger ett nytt fokus på att CDC20 kan vara en kliniskt relevant Indikator och ett lovande terapeutiskt mål för HCC. Icke desto mindre krävs ytterligare studier som är inriktade på CDC20: s molekylära mekanismer vid initiering och framsteg av HCC och forskning om den prognostiska betydelsen avcdc20.

bekräftelser

författarna tackar sina kollegor fråninstitute of Biotechnology of Academy of Military MedicineSciences för deras tekniska stöd.

	Parkin DM: Global cancer statistics in theyear 2000. Lancet Oncol. 2:533–543. 2001.PubMed/NCBI
	El-Serag HB and Rudolph KL: Hepatocellularcarcinoma: epidemiology and molecular carcinogenesis.Gastroenterology. 132:2557–2576. 2007. View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Jemal A, Bray F, Center MM, Ferlay J, WardE och Forman D: Global cancerstatistik. CA Cancer J Clin.61:69–90. 2011. Visa artikel: Google Scholar
	Severi T, van Malenstein H, Verslype C ochvan Pelt JF: Tumörinitiering och progression i hepatocellularcarcinom: riskfaktorer, klassificering och terapeutiska mål.Acta Pharmacol Sin. 31:1409–1420. 2010. Visa Artikel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Michielsen P och Ho E: viralt hepatitband hepatocellulärt karcinom. Acta Gastroenterol Belg. 74:4–8.2011.
	McGivern DR och citron SM: Virusspecifikmekanismer för karcinogenes i hepatit C-virus associerad levercancer. Onkogen. 30:1969–1983. 2011. Visa artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Fung TK och Poon RY: En berg-och dalbana ridamed de mitotiska cyklinerna. Semin Cell Dev Biol. 16:335–342. 2005.Visa artikel : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Weinstein J, Jacobsen FW, Hsu-Chen J, Wu Tand Baum LG: ett nytt däggdjursprotein, p55CDC, närvarande i delningceller är associerade med proteinkinasaktivitet och har homologitill de Saccharomyces cerevisiae celldelning cykel proteiner cdc20och cdc4. Mol Cell Biol. 14:3350–3363. 1994.
	Peters JM: Cellbiologi: checkpointbromsen lättad. Natur. 446:868–869. 2007. Visa artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Fang g, Yu H och Kirschner MW: Direktbindning av cdc20-proteinfamiljmedlemmar aktiverar det anafasfrämjande komplexet i mitos och G1. Mol Cell. 2:163–171.1998. Visa artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Cho HJ, Lee EH, Han SH, et al: Nedbrytning av human RAP80 är cellcykel reglerad av Cdc20 och Cdh1 ubiquitinligaser. Mol Cancer Res. 10: 615-625. 2012. Visa artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Kidokoro t, Tanikawa C, Furukawa Y,Katagiri T, Nakamura Y och Matsuda K: CDC20, ett potentiellt cancerterapeutiskt mål, regleras negativt av p53. Onkogen.27:1562–1571. 2008. Visa artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Chang DZ, Ma Y, Ji B, et al: Förhöjtcdc20-uttryck är associerat med pankreatisk duktaladenokarcinomdifferentiering och progression. J Hematol Oncol.5:152012. Visa artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Kim JM, Sohn HY, Yoon SY, et al:identifiering av gastriska cancerrelaterade gener med hjälp av en cDNAmicroarray innehållande nya uttryckta sekvenstaggar uttryckta ingastriska cancerceller. Clin Cancer Res. 11: 473-482. 2005.PubMed/NCBI
	Espinosa AM, Alfaro A, Roman-Basaure E, etal: mitos är en källa till potentiella markörer för screening ochöverlevnad och terapeutiska mål i livmoderhalscancer. PloS One.8:.PubMed/NCBI
	Ouellet V, Guyot MC, Le Page C, et al:vävnadsanalys av expressionsmikroarraykandidateridentifierar markörer associerade med tumörkvalitet och utfall iserös epitelial äggstockscancer. Int J Cancer. 119:599–607. 2006.Visa artikel: Google Scholar
	Roessler S, Jia HL, Budhu A, et al: Aunique metastasis-gensignatur möjliggör förutsägelse av tumörrelapse hos patienter med hepatocellulärt karcinom i tidigt stadium. Cancer. 70:10202–10212. 2010. Visa artikel: Google Scholar
	Irizarry RA, Hobbs B, Collin F, et al:utforskning, normalisering och sammanfattningar av sondnivådata med hög densitetoligonukleotid. Biostatistik. 4:249–264.2003. Visa artikel: Google Scholar
	Dai m, Wang P, Boyd AD, et al: Evolvinggene/transkriptdefinitioner förändrar signifikant tolkningen av GeneChip-data. Nukleinsyror Res 33: e1752005. Visa artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Tusher VG, Tibshirani R och Chu g:Signifikansanalys av mikroarrayer applicerade på joniserande strålningssvar. Proc Natl Acad Sci USA. 98:5116–5121. 2001.Visa Artikel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Huang ZX, Tian HY, Hu ZF, Zhou YB, Zhao Jand Yao KT: GenCLiP: ett program för klustring gen listsby litteratur profilering och konstruera gen co-förekomstnätverk relaterade till anpassade sökord. BMC bioinformatik. 9:3082008.Visa artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Adhikary S och Eilers M: Transkriptionalregulering och transformation av Myc-proteiner. Nat Rev Mol CellBiol. 6:635–645. 2005. Visaartikel : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Detre S, Saclani Jotti G and Dowsett M: A’quickscore’ method for immunohistochemical semiquantitation:validation for oestrogen receptor in breast carcinomas. J ClinPathol. 48:876–878. 1995.
	Früh MPM: EGFR IHC score for selection ofcetuximab treatment: Ready for clinical practice? Transl LungCancer Res. 1:145–146. 2012.
	Hwang LH, Lau LF, Smith DL, et al: Buddingyeast Cdc20: ett mål för spindelkontrollpunkten. Vetenskap.279:1041–1044. 1998. Visa artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Kops GJ, Weaver BA och Cleveland DW: påvägen till cancer: aneuploidy och den mitotiska kontrollpunkten. Nat RevCancer. 5:773–785. 2005. Viewartikel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Mondal g, Sengupta S, Panda CK, Gollin SM,Saunders WS och Roychoudhury S: överuttryck av Cdc20 leder tillskada på spindelmonteringspunkten och aneuploidiseringi oral cancer. Karcinogenes. 28:81–92. 2007. Visa artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Moura IM, Delgado ML, Silva PM, et al:högt CDC20-uttryck är förknippat med dålig prognos vid oralskvocellkarcinom. J Oral Pathol Med. 43:225–231. 2013.Visa artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Wu WJ, Hu KS, Wang DS, et al: CDC20overexpression förutsäger en dålig prognos för patienter medkolorektal cancer. J Transl Med. 11:1422013. Visa artikel : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Yeong FM, Lim HH, Padmashree CG och SuranaU: utgång från mitos i spirande jäst: bifasisk inaktivering av cdcdc28-Clb2 mitotiskt Kinas och rollen av cdc20. Mol Cell.5:501–511. 2000. Visa artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Huang HC, Shi J, Orth JD och Mitchison TJ:bevis för att mitotisk utgång är ett bättre cancerterapeutiskt målän spindelmontering. Cancercell. 16:347–358. 2009. Visa artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Wang Z, Wan L, Zhong J, et al: Cdc20: apotential nytt terapeutiskt mål för cancerbehandling. Curr PharmDes. 19:3210–3214. 2013. Visa Artikel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Bunz F, Dutriaux a, Lengauer C, et al:krav på p53 och p21 för att upprätthålla G2-arrestering efter DNA-skada.Vetenskap. 282:1497–1501. 1998. Visa artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Wells J, Boyd KE, Fry CJ, Bartley SM ochfarnham PJ: Målgenspecificitet för E2F-och fickproteinfamiljemedlemmar i levande celler. Mol Cell Biol. 20:5797–5807. 2000.Visa Artikel : Google Scholar