morot (Daucus carota) är en vinterkryddad tvåårig växt som odlas för sin ätbara taproot. Det är en av de mest konsumerade och producerade grönsakerna på grund av dess kostvariation i färg, smak, fiber och vitamin A, liksom dess konsumtion i både råa och kokta former. Mer än 20 miljoner ton av det produceras varje år för konsumtion.

Vävnadskulturpraxis har varit mycket populär vid kloning av växter. Den första studien av morotvävnadskultur rapporterades 1939 av Gautheret och Nobecourt. Dock, Steward et al. och Reinert rapporterade den första studien av” morotembryogenes”; de försökte växa rötterna med cellsuspension och calluskulturer.somatisk embryogenes är en effektiv metod för att förstå och undersöka de biokemiska, fysiologiska och genetiska aspekterna av växtcellsodling.

många studier på morotvävnadskulturen ledde till utvecklingen av en enkel metod för embryogenes i morötter. Enligt metoden kan tillväxten av morotkulturer induceras genom att bara ta bort hormonet 2,4-D från cellsuspensionskulturer. Nu används moroten ofta som en experimentell modell för analys av somatisk embryogenes i olika laboratorier över hela världen.

Material och utrustning som krävs för Etablering av kulturen

steriliserade Material

• 5 fräck kallusodling av morot, oförorenad och bibehållen vid 25 kg.
• 5 Erlenmeyer-kolvar (250 ml), innehållande odlingsmedium med 5 x 10-8 g/ml 2, 4-D.
• 5 mätcylindrar (100 ml) med foliehattar.
• 2 spatler.
• 25 ark aluminiumfolie (100 x 100 mm).
• 2 stycken nylon eller rostfria siktar med en porositet på 250 OC, som kan sättas in i mätcylindrarnas öppning.
• 5 petriskålar.

icke-steriliserade material

• vattentät märkpenna
• roterande skakmaskin
• bunsenbrännare
• 1 Erlenmeyer-kolv (150 ml) innehållande 95% etanol
• Parafilm

förfarande för initiering och etablering av kulturen

1. ta rören av calluskultur, steril munnen på alla 5 rören och överför callus till petriskålen separat (5 Calli i 5 petriskålar).
2. ta en 250 ml kanonisk kolv som innehåller odlingsmediet och 2, 4-D.
3. överför alla 5 calli från petriskålen till 5 kanoniska kolvar, separat.
4. flamma / sterila kolvarnas mun och täck dem med locket. Säkra locket med parafilm.
5. placera alla kolvar som innehåller kulturen på den roterande skakmaskinen i mörk eller låg ljusintensitet vid 25 kcal.
6. efter 7 dagar överför kolvarna från skakan till ett sterilt rum.
7. ta bort parafilm – och folielocket från varje kolv och flamma / sterila kolvarnas mun.
8. överför suspensionen av varje kolv till en steril 100 ml cylinder separat genom att föra den genom en sikt.
9. låt innehållet lösa sig i 10 minuter och kassera sedan supernatanten.
10. överför rester av celler kvar i mätcylindern till en 250 ml kolv innehållande 60 ml färskt medium.
11. Upprepa steg 10 för varje odlingskolv.
12. Lägg alla fem kolvarna på skakan igen.
13. efter 7 dagar upprepa proceduren du har gjort tidigare (från steg 6-10). Men den här gången tar bara 1/5 av de kvarvarande cellerna som inokulum.
14. upprepa proceduren ca 3-4 gånger. Genom att göra det kommer endast enstaka celler eller små aggregat att förbli i morotsuspensionen.
15. för morotcellsuspension varierar antalet lämpliga celler mellan 105 och 3 x 105 celler/ml eller 100 och 300 mg (färskvikt) inokulum i en volym av 60 ml färskt medium innehållande media och 5×10-8 g/ml, 2,4-D.
16. en överföringsperiod på 7 dagar är lämplig för moroten att få enstaka celler i suspensionskulturen.

Approximate Schedule of the Culture

Event	Timing (approximate)
Initiation of cell suspension and determination of total cell number and PCV (packed cell volume)	Day 0
First transfer of cultures	Day 8
Fourth transfer of cultures	Day 29

Result

What should you observe while experimenting? Här är några punkter att komma ihåg när du noterar dina resultat.

• datum och varaktighet för experimentet.
• antalet kulturer och behandlingar som tillämpas.
• registrera morfologi och antal infekterade kulturer med ett intervall på tre veckor.
• Bestäm PCV (packad cellvolym) i början och slutet av överföringen av kulturen.
• uppskatta det totala cellnumret efter 3 subkulturer, dag 1, 2, 4 och 7, och rita en graf mot tiden.
• studera förhållandet mellan inokulatets densitet och tillväxtmönstret.

suspensionskulturen ger en fördel jämfört med andra kulturer eftersom den tillåter rörelse av vävnaden i odlingsmediet som underlättar gasutbyte. Dessutom tar det bort eventuell polaritet av vävnad och näringsgradient inom och vid media.

applicering av vävnadskultur för morot

1. för att klona taprootsna.
2. för att studera mutantformen av morötterna.
3. för att studera de fysiologiska svaren hos moroten som kan underlätta en förståelse för andra växter också.
4. för att studera tillväxten och utvecklingen av moroten från en enda cell.
5. för att studera morotens stressrespons som ger en inblick i svaren från andra växter också.
6. att generera hundratals transgena växter från suspensionen av enskilda celler för alla experimentella ändamål.

1. Reinert J. och Yeoman M. M. (1982). Växtcell och vävnadsodling: en laboratoriehandbok. Springer-Verlag, Berlin Heidelberg, New York.
2. Hardegger M., Shakya R. (2004) omvandling av morot. I: Curtis I. S. (Red) transgena grödor i världen. Springer, Dordrecht. https://doi.org/10.1007/978-1-4020-2333-0_22.
3. tillväxt och uppdelning av morotceller i suspensionskultur. (1970). Växt-och cellfysiologi. DOI: 10.1093/oxfordjournals.pcp.a074564.
4. https://www.atzlabs.com/prodcut-info/C1955-Carrot-…