cirkulerande cellredigera
de tekniker som krävs för att erhålla isolerade celler variera beroende på vilken celltyp som krävs. Cirkulerande celler som blodceller eller vissa tumörceller kan isoleras genom att ta ett blodprov. Eftersom blodprover innehåller en blandning av många olika celltyper måste en metod för att separera ut celler i olika typer användas. Den vanligaste metoden för detta är flödescytometri, under vilken en automatiserad analysator inspekterar en smal ström av celler. I en version av denna teknik lyses ett ljus på strömmen av celler, och analysatorn detekterar det reflekterade ljuset eller fluorescensen innan denna information används för att snabbt manövrera cellerna av intresse i en uppsamlingskammare.
fast vävnadredigera
vid hantering av fasta vävnader kan det vara mer utmanande att få vävnad för cellisolering. Överskott av mänsklig vävnad kan ibland erhållas vid tidpunkten för planerad operation, till exempel exemplar av höger förmaksbihang skärs ofta ut och kasseras under öppen hjärtkirurgi, såsom bypassoperation av kranskärl. Andra vävnader såsom prover av bukspottkörteln eller urinblåsan kan tas som en biopsi. Alternativt erhålls vävnad från djur ofta genom att offra djuret.
Efter att ett vävnadsprov har erhållits måste det omges eller perfuseras av en lösning vid en lämplig temperatur som innehåller de salter och näringsämnen som krävs för att hålla cellerna vid liv. Detta kan utföras genom att helt enkelt nedsänka vävnaden i lösningen, eller kan innebära mer komplexa arrangemang såsom Langendorff perfusion. Vanliga lösningar inkluderade modifieringar av Tyrodes lösning eller Krebs och Henseleits lösning dessa lösningar innehåller exakta koncentrationer av elektrolyter inklusive natrium, kalium, kalcium, magnesium, fosfat, klorid och glukos. Koncentrationerna av dessa elektrolyter måste balanseras noggrant och uppmärksamma osmotiskt tryck. Lösningens surhet måste regleras, ofta med hjälp av en pH-buffert såsom HEPES. Isolering av celler från vissa vävnader kan förbättras genom att syre lösningen. I de inledande stadierna är perfusion av vävnaden med en lösning som inte innehåller kalcium användbar särskilt vid isolering av hjärtmyocyter, eftersom frånvaron av kalcium orsakar separation av de interkalerade skivorna.
proteolytiska enzymer kan sedan tillsättas till lösningen. Enzymer som smälter kollagen (kollagenaser) används ofta vid isolering av celler från hjärtat eller urinblåsan. Generella enzymer som smälter många typer av protein (proteaser) kan också användas. Vid isolering av celler från hjärnvävnad kan andra enzymer som bryter ner DNA (Dnaaser) krävas.
dessa enzymer, förutom att smälta den extracellulära matrisen, kan också smälta andra viktiga proteiner som är nödvändiga för att cellerna av intresse ska fungera. Om celler utsätts för dessa enzymer för länge resulterar celldöd, men om de inte utsätts för enzymerna tillräckligt länge kommer matsmältningen av den extracellulära matrisen inte att vara fullständig. Efter att enzymerna har tagits bort från vävnaden genom att perfusera den med en andra lösning som inte innehåller enzymer, kan celler separeras mekaniskt eller dissocieras. En enkel teknik för att dissociera celler innebär att skära vävnaden i små bitar innan de rör om bitarna i en lösning med hjälp av en pipett.
