Coxsackievirus B3 (CVB3) är ett enterovirus i familjen Picornaviridae. Efter bindning till coxsackievirus-och adenovirusreceptorn (6, 64) kommer det virala RNA in i cytoplasman, där det översätts till ett enda polyprotein av värdtranslationsmaskinen. Polyproteinet behandlas sedan proteolytiskt av virala proteaser för att producera alla virala strukturella och icke-strukturella proteiner. Det viruskodade RNA-beroende RNA-polymeraset transkriberar virala RNA-rna med negativ sträng, som fungerar som mallar för syntes av flera avkomman genom. Efter viral förpackning frigörs viruset, potentiellt under påverkan av det viruskodade 2B-proteinet (67). Under den replikativa processen och viral avkomman Frisättning, Den cytopatiska effekten (CPE) inträffar och värdcellen skadas, med eventuell förlust av livskraft.

flera värdcellulära processer förändras under picornavirusparasitisering. Virusprotein 2apro klyver direkt eukaryot initieringsfaktor 4 gamma (eIF4G). Klyvning av denna översättningsinitieringsfaktor avskaffar inte bara cap-beroende mRNA-översättning (19); klyvningsprodukterna tros stimulera översättning av obehandlat mRNA, såsom det icke-cellulära picornavirusgenomet (43), som använder en ny intern ribosominträdesmekanism för att börja proteinöversättning (31, 76). Poliovirusproteiner 2apro och 3cprohar visat sig klyva det TATA-bindande proteinet, med 3Cpro som också stänger av transkription av RNA-polymeraser I, II och III (11, 72, 74). Transkriptionsfaktorerna TFIIIC (10), CREB (73) och Oct-1 (75) klyvs också av 3cpro under picornavirusinfektion. Cvb3-protein 2B har visat sig modifiera endoplasmatisk retikulum och plasmamembranpermeabilitet (14), vilket orsakar en ökning av den cytosoliska fria kalciumkoncentrationen (28, 67) och membranlesioner som kan underlätta viral avkomman frisättning. Joniska gradienter kollapsar (40, 52) och fosfolipasaktiviteten förändras (24, 29). Cvb3-infektion av HeLa-celler resulterar i tyrosinfosforylering av två cellulära proteiner vid 4 h efterinfektion, och inhibering av dessa fosforyleringar minskar signifikant viral avkommaproduktion (27). Det är uppenbart att infektion är en dynamisk cellulär process där tidiga interaktioner mellan virus-och värdproteiner bestämmer resultatet för både viruset och värdcellerna.

det är nu klart att cysteinproteaser i kaspasfamiljen av enzymer är nyckeleffektormolekyler vid apoptotisk celldöd. När kaspaser har aktiverats klyver de specifika substraten, inklusive poly (ADP-ribos) polymeras (PARP) (35), DNA-fragmenteringsfaktor (DFF) (37), gelsolin (34), lamin A (58), sterolreglerande elementbindande proteiner (68), Bisexuell-fodrin (12, 66), fokal adhesionskinas (71) och mdm2 (18), bland många andra. Sådana klyvningshändelser resulterar i viktiga förändringar i normala homeostatiska cellulära processer och motsvarande cellmorfologiska strukturella förändringar.

många virus har biokemiska mekanismer för att undvika och / eller inducera apoptos i celler där de bor (för recensioner, se referenser49 och 60). Olika virus interagerar i olika stadier av den apoptotiska dödsvägen. Virus har utvecklat strategier som riktar sig mot Fas ligand-Fas eller tumörnekrosfaktor alfa (TNF–Xiaomi)-TNF-receptorsignaleringskomplex, Bcl-2-familjen av regulatorer eller caspase-familjen av böner (49, 60). Mekanismerna för död hos cvb3-infekterade celler återstår att bestämma; det finns emellertid begränsade morfologiska bevis för induktion av apoptos i picornavirusinfekterade celler. Bevis som erhållits med Theilers Murin encefalitvirus (32, 65) och poliovirus (63) har visat att picornavirusinfekterade celler genomgår apoptos, baserat på morfologiska kriterier inklusive kärnkondensation och DNA-fragmentering.

för att avgöra om kaspaser är aktiverade och ansvariga för CPE observerad efter cvb3-infektion, HeLa-celler (American type Culture Collection, Rockville, Md. infektion (MOI) av 5, med CVB3 (generöst tillhandahållen av Charles Gauntt, University of Texas Health Sciences Center, San Antonio) eller sham behandlad med minimum essential medium (MEM) saknar fetalt bovint serum (FBS) för 45 min. Celler tvättades med fosfatbuffrad saltlösning (PBS) och fullständig MEM innehållande 10% FBS ersattes sedan. En positiv apoptoskontroll bestod av HeLa-celler behandlade med fotosensibiliseraren bensoporfyrinderivat monoacidring a (BPD-MA) under 1 h och exponerades sedan för synligt ljus som tidigare beskrivits (22, 23). Kulturer undersöktes och skördades vid 0, 1, 3, 5, 6, 7, 8, 9, 10, och 12 h postinfektion. Celler tvättades två gånger i kalla PBS och lyserades i 1 ml lysbuffert (20 mM Tris , 137 mM NaCl, 10% glycerol, 1% Nonidet P-40, 1 mM fenylmetylsulfonylfluorid, 0,15 U aprotinin per ml) per 75-cm2 odlingsområde. Efter en 20-min inkubation på is samlades supernatanter efter centrifugering vid 10,000 xnumx kg och lagrades vid -20 xnumx C för ytterligare biokemiska analyser.

det temporala mönstret för produktion av cvb3 virala proteiner, avkomman virus, och utvecklingen av HeLa cell degenerativa morfologiska förändringar övervägdes i samband med en undersökning av värdcelldödsproteiner. Celllysatprover separerades med natriumdodecylsulfat-polyakrylamidgelelektrofores. Proteiner överfördes till nitrocellulosa (Hybond ECL nitrocellulosemembran; Amersham). Membranen inkuberades i 1 h vid rumstemperatur i blockerande buffert (PBS med 0,1% Tween 20 och 5% pulveriserad fettfri mjölk). Efter två tvättar i tvättbuffert (PBS med 0.1% Tween 20) inkuberades membranen med antikropp mot CVB3 (kaninpolyklonal anti-CVB3, 1:1000; exakta kemikalier). Membranen tvättades tre gånger i tvättbuffert och inkuberades med en donkey Anti-rabbit immunoglobulin sekundär antikropp (Amersham). Membranen tvättades tre gånger och pepparrotperoxidaskonjugerade sekundära immunoglobuliner detekterades genom den förbättrade kemiluminescensmetoden (ECL, Amersham) och exponerades för Hyperfilm (Amersham) autoradiografifilm. Signifikanta ökningar av viral proteinsyntes kunde detekteras mellan 3 och 5 timmar efter infektion (Fig.1B). De virala proteaserna klyver virala såväl som värdproteiner tidigt efter infektion. Genom immunoblot-analys med mus monoklonal anti-eIF4G (1: 1000; Transduktionslaboratorier) fann man att eIF4G klyvs av viralt proteas 2A som börjar inom 1 h efterinfektion, med ytterligare förlust av detektion av 220-kDa-proteinet med 5 h efterinfektion (Fig. 1C). Mängden CVB3 i cellens supernatant (frisatt virus) bestämdes på monolager av HeLa-celler med agar overlay plaque assay-metoden som tidigare beskrivits (3). Kortfattat späddes prov supernatanten seriellt 10-faldigt, utspädningarna överlagrades på 90 till 95% sammanflytande monolager av HeLa-celler i sexbrunnsplattor (Costar) och de överlagrade cellerna inkuberades i 1 h (5% CO2, 37 kcal C). Medium innehållande nonbound virus avlägsnades, och varm komplett MEM innehållande 0,75% agar överlagrades i varje brunn. Plattorna inkuberades 36 till 48 h (5% CO2, 37 CCB), fixerades med Carnoys fixativ (95% etanol–ättiksyra) och färgades med 1% kristallviolett. Avkomman virus var närvarande i supernatanten vid basala nivåer mellan 1 och 5 h. genom 6 h postinfektion fanns en detekterbar ökning av supernatant virusnivåer, och exponentiell virusproduktion började vid 9 h postinfektion som bestäms av plackanalyser (Fig. 1A). HeLa-celler uppvisade markerade förändringar i morfologi, inklusive cellulär kondensation, avrundning och frisättning från odlingsmonoskiktet, mellan 6 och 7 timmar efter infektion, som noteras genom kontrastmikroskopi (Fig. 1D).

för att avgöra om värdcellsdödsmaskinen aktiveras efter cvb3-infektion utfördes immunoblot-analys av lysat som samlats in vid specifika tidpunkter. Caspase 3, som är närvarande i celler som ett prekursorprotein med en molekylmassa av 32 kDa, är en primär molekyl som är involverad i utförandet av celldöd. Med användning av monoklonalt anti-caspase 3 (1:1000; Transduktionslaboratorier) bestämdes det att oinfekterade celler innehöll 32-kDa-prekursorproteinet. Efter cvb3-infektion började nivån av 32-kDa-prekursorproteinet minska mellan 7 och 8 timmar efter infektion, och det var nästan helt odetekterbart med 12 timmar efter infektion (Fig.2). För att bestämma om det utarmade pro-caspase 3 hade bearbetats proteolytiskt från en enkelkedjig zymogen till dess aktiva tvåkedjiga enzym inkuberades HeLa-celllysater med caspase 3 fluorescerande substrat som tidigare beskrivits (23). I korthet inkuberades cellulära lysater med reaktionsbuffert (20 mM Tris , 137 mM NaCl, 1% Nonidet P-40, 10% glycerol) innehållande 100 czccm caspase 3-substrat acetyl-Asp-Glu-Val–asp-7-amino-4-metylkumarin (Ac-DEVD-AMC) (Calbiochem, Cambridge, massa.) eller Z-Asp-Glu-Val-asp-7-amino-4-trifluormetylkumarin (Z-DEVD-AFC) (Enzymsystemprodukter, Livermore, Calif.). Reaktionsblandningen inkuberades vid 37 C i 2 h, och fluorescensexcitering av AMC eller AFC vid 380 respektive 400 nm mättes vid 460 respektive 505 nm med en CytoFluor 2350 cytofluorometer (Perseptive Biosystems, Burlington, Ontario, Kanada). Med hjälp av detta tillvägagångssätt var caspase 3-aktivitet uppenbar med 5 h postinfektion. Ökningen av caspase 3-aktivitet från 7 till 10 timmar efter infektion, när den maximala aktiveringsnivån uppnåddes, bibehölls till 12 timmar efter infektion (Fig. 2). Denna proteasanalys visade att caspase 3 var i en aktiv form i infekterade celler och att den kunde proteolytiskt bearbeta andra kaspaser och substrat.

Caspase 3 klyver specifika substrat vid asparaginsyrarester (42). PARP, ett kärnprotein involverat i DNA-reparation (13, 69), har visat sig vara ett substrat för aktiverat caspase 3 såväl som andra caspaser (35). I apoptotiska celler klyvs PARP från ett 116-kDa-protein, vilket ger fragment av 85 och 25 kDa, bestämda med antikroppar för amino-respektive karboxyltermini av proteinet. I cvb3-infekterade HeLa-celler detekterades PARP-nedbrytning, med utseendet av ett 85-kDa-fragment, med 9 h postinfektion, med ytterligare reduktion av nivåerna av 116-kDa-peptiden med 10 och 12 h postinfektion, bestämd genom immunoblot-analys med musmonoklonal anti-PARP (1:2000; Biomol) (Fig. 3).

DFF är ett cytosoliskt protein som kan klyvas av caspase 3 (37). När det har klyvts frigör detta protein ett endonukleas som migrerar till kärnan, där det kan klyva DNA vid internukleosomala ställen, vilket resulterar i DNA-fragmentering (16). Det har tidigare visats att internukleosomal DNA-nedbrytning är en cellulär egenskap hos picornavirusinfektion (32). Som bestäms genom att använda kaninpolyklonal anti-DFF (generöst tillhandahållen av Xiaodong Wang, University of Texas Southwestern Medical School, Dallas) klyvs DFF från ett 45-kDa-protein och producerar ett 30-kDa-fragment som börjar vid 9 h efter infektion, med fortsatt bearbetning och förlust av 45-kDa-proteinet mellan 10 och 12 h efter infektion (Fig. 3).

för att avgöra om kaspaser direkt producerar den karakteristiska CPE som uppstår efter picornavirusinfektion eller aktiveras efter de morfologiska förändringarna behandlades celler med den allmänna kaspashämmaren bensyloxikarbonyl-Val-Ala-asp-fluorometylketon (ZVAD.fmk). En stamlösning (100 mM i dimetylsulfoxid) av ZVAD.fmk (Bachem) späddes i fullständig MEM till koncentrationer som sträcker sig från 0 till 200 kcal, och utspädningarna inkuberades med celler i 30 minuter före infektion eller ljusbehandling. Efter cvb3-infektion tvättades cellerna med PBS och komplett MEM innehållande 10% FBS och färsk ZVAD.fmk (0 till 200 occurm) ersattes sedan. Denna peptid har visat sig hämma induktionen av morfologiska förändringar genom flera apoptotiska stimuli (46, 54). ZVAD.fmk i koncentrationer av 50, 100 och 200 occurm blockerade både caspasaktivitet och klyvning av PARP och DFF i BPD-MA – och ljusbehandlade HeLa-celler (positiv kontroll för apoptos) (Fig. 4). I cvb3-infekterade HeLa-celler förhindrades klyvningen av PARP och DFF delvis av hämmaren vid koncentrationer av 50 och 100 occurm (Fig. 4). Vid den högsta koncentrationen av hämmaren (200 MICR) fanns inga tecken på PARP-eller dff-klyvningsfragment i cvb3-behandlade celler vid 10 timmar efter infektion. Kaspas klyvning av strukturella proteiner såsom aktin, gelsolin, lamin B och fokal vidhäftningskinas är ansvarig för de morfologiska förändringar som observerats efter induktion av apoptos (42, 45). Vid 2 h efter fotoaktivering av BPD-MA kondenserades HeLa-celler, hade omfattande membranblebbing och släpptes från monoskiktet (Fig.5). Vid ökande koncentrationer av ZVAD.fmk, denna apoptotiska fenotyp var inte uppenbar, med cellerna som upprätthåller en morfologi som liknar kontrollcellerna (Fig. 5). Cvb3-infekterade HeLa-celler kondenserades och släpptes från monoskiktet men uppvisade ingen membranblebbing vid 10 h efter infektion (Fig. 5). Blockad av caspasaktivitet av ZVAD.fmk i koncentrationer upp till 200 kg förändrade inte den cytopatiska fenotypen trots att klyvning av substrat (DFF och PARP) hämmades.

en klassisk egenskap hos virus av familjen Picornaviridae är den cellulära CPE efter infektion. Sedan upptäckten av en extraneural cellodlingsteknik för multiplikation av poliovirus (17) har degenerativa förändringar i cellmorfologi noterats. Först beskrivs av Robbins et al. (48) år 1950 innefattar dessa cytopatiska förändringar kärnkrympning, kondensation av kromatin, cellrundning och frisättning från monoskiktet, med eventuell progression till acidofil cytoplasma, nukleär pyknos och fragmentering av kärnkromatinet (karyorrhexis) (47).

den senaste förståelsen av celldödsmekanismer sätter scenen för undersökning av värdcelldödsproteiner och deras möjliga roll i CPE för cvb3-infektion. Många virus hämmar eller aktiverar celldöd, strategier som förmedlar distinkta aspekter av cellskada, inflammatoriska svar eller viral uthållighet. Som nämnts ovan har tidigare picornavirusstudier avslöjat de morfologiska egenskaperna hos apoptotisk celldöd, inklusive cellkrympning, DNA-fragmentering och kärnkondensation (21, 32, 47).

Caspase 3, ett cysteinproteas med homologi tillcaenorhabditis elegans protein Ced-3 (77), anses vara ett av de viktigaste proteinerna som är involverade i exekveringsstadiet av celldöd. Apoptos inducerad av flera stimuli, inklusive Fas, TNF, etoposid, staurosporin, fotodynamisk terapi, joniserande strålning och tillväxtfaktoruttag, involverar Pro-caspase 3-bearbetning och efterföljande aktivering (15, 23, 30, 33, 51). Från och med 7 till 8 timmar efter infektion med CVB3 är pro-caspase 3 utarmat och kaspasaktiveringsanalyser har visat att detta protein klyvs i sin aktiva form. Flera proteiner kan aktivera caspase 3, inklusive caspase 8 (via signalering genom TNF-eller Fas-receptorer) (55), granzyme B från cytotoxiska lymfocyter (62) och caspase 9 (via frisättning av mitokondriell cytokrom c och montering av apoptotiska proteasaktiveringsfaktorer) (36). En gång aktiverad kan caspase 3 försämra specifika substrat, vilket i sin tur resulterar i strukturella förändringar och förlust av homeostatisk reglering av cellulära processer. Många proteiner har visat sig klyvas av aktiverade kaspaser. I överensstämmelse med aktiveringen av caspase 3 klyvs både PARP och DFF efter cvb3-infektion. Caspasaktivering och DNA-fragmentering är direkt kopplade genom klyvning av DFF (37). DFF är en human cytosolisk faktor som består av två underenheter på 45 och 40 kDa, varav den större bryts ned till mindre polypeptider av caspase 3. I de senaste studierna av Enari et al. (16) med användning av murina lymfomceller isolerades ett endonukleas, caspasaktiverat DNas (CAD). Den murina ekvivalenten av DFF-protein isolerades och benämndes hämmare av CAD (50). Caspase 3-klyvning av hämmare av CAD (DFF) möjliggör CAD-nukleär translokation och DNA-nedbrytning. DFF klyvs från och med 9 h efterinfektion, vilket resulterar i ett 30-kDa-fragment (Fig. 3) som kan bearbetas vidare till ett 11-kDa-fragment (37). PARP ligger i kärnan och är involverad i DNA-reparation. Klyvning av PARP börjar vid 9 h efter infektion, vilket tyder på att när kaspaser aktiveras i cytosolen kan de komma åt kärnlokaliserade substrat.

Observera, kaspashämning med den allmänna kaspashämmaren ZVAD.fmk hindrade inte CPE inducerad av CVB3 efter infektion. Vid mellan 6 och 7 h postinfektion blev CPE uppenbar genom kontrastmikroskopi i vår cvb3-infektionsmodell. Tiden mellan infektion och utseende av CPE, som observerats genom kontrastmikroskopi, var konsekvent vid ZVAD.FMK koncentrationer av från 50 till 200 oc.m. Förutom att inte påverka tiden till CPE, ZVAD.fmk-behandling resulterade i celler med ett morfologiskt utseende som liknar det hos obehandlade, infekterade celler (Fig. 5). Vi använde behandling med BPD-MA och ljus som en alternativ metod för att inducera apoptos i HeLa-celler (22, 23). Hämning av kaspasaktivering med hämmaren ZVAD.fmk förhindrade den apoptotiska fenotypen (Fig. 5). Från dessa resultat drar vi slutsatsen att caspasaktivitet och klyvning av substrat inte tar hänsyn till den karakteristiska CPE som är associerad med picornavirusinfektion utan istället aktiveras efter de morfologiska förändringarna.

skärningspunkten för den virala replikativa cykeln och aktiveringen av värdcelldödsvägen återstår att bestämmas. Picornavirusinfektion resulterar snart i hämning av cellulärt RNA och proteinsyntes (19, 74). Tidiga studier av förhållanden mellan picornavirusinducerade metaboliska förändringar och virusinducerad CPE indikerade att inhiberingen av protein-och RNA-syntes inte var direkt relaterad till cellmorfologiska förändringar (4). Protein-och RNA-synteshämmare fördröjde celldöd, men cellerna visade färre morfologiska förändringar än picornavirusinfekterade celler (5). Hämning av protein-och RNA-syntes med något av flera medel, såsom aktinomycin D, putromycin och difteritoxin, resulterar i apoptos (39). Tidiga studier gjorda i poliovirusinfektionssystem visade att putromycin, en hämmare av översättningen av virala såväl som värdproteiner, försenar uppkomsten av cytopatiska förändringar, vilket tyder på att vissa virala proteiner kan vara direkt cytotoxiska (4). Att öka MOI leder till en snabbare start av CPE (opublicerade observationer), även om nästan all värdproteinöversättning stängs av inom 3 timmar vid en relativt låg MOI (25) som den som används i denna studie (MOI = 5). Nyligen har det visat sig att 2B-proteinet kodat av coxsackievirus och poliovirus associerar med cellulära membranfraktioner, inklusive plasmalemma och endoplasmatisk retikulum, och stör jonrörelsen, inklusive rörelsen av Ca2+ till cytosolen (1, 67). Ca2 + tillströmning sker i apoptos (7, 44), men det är inte klart om tillströmningen sker före eller efter kaspasaktivering. Genom undersökning av de joniska kraven för kaspaser har det fastställts att kalciumjonkoncentrationen har liten effekt på kaspasaktivitet (56). En tidig kalciuminflöde efter coxsackievirusinfektion kan bero på påverkan av 2B-proteinet på membranpermeabilitet, och den stora sena kalciuminflödet noteras (>6 h postinfektion) (67) kan vara en nedströms effekt av caspasaktivering.

under de tidiga infektionsfaserna skulle det vara fördelaktigt för viruset att hämma värdcellsdöd, vilket möjliggör maximal produktion av viral avkomma. Vid sena stadier av virusets livscykel skulle det också vara fördelaktigt för viruset att inducera apoptos snarare än nekros. En sådan dödsmekanism är ett potentiellt medel för värdimmunsystemflykt av viruset under dess frisättning till den omgivande vävnaden. Apoptos kännetecknas av den snabba fagocytosen hos drabbade celler utan frisättning av proinflammatoriska cytokiner (53).

virus har visat sig interagera på olika nivåer av den apoptotiska vägen. Flera gammaherpesvirus (inklusive Kaposis sarkomassocierade humana herpesvirus 8) samt tumörgenic molluscum contagiosum virus innehåller FLICE-hämmande proteiner som interagerar med Fas-adapterproteinet FADD och tävlar om att hämma rekrytering av caspase 8 och efterföljande aktivering (61). Uttryck av cowpox-viruset serpin CrmA blockerar caspase 8-medierad aktivering av nedströms caspaser såsom caspase 1 och caspase 3 (55). IAP-proteinerna (för hämmare av apoptos) utgör en familj av proteiner, uttryckta av baculovirus, som blockerar apoptos inducerad av virusinfektion eller av caspase 1 (78). Dessutom har flera virala homologer av BCL-2-familjen av proteiner upptäckts (2, 8, 20, 70). Adenovirus (9, 20, 57), Afrikansk svinpestvirus (41) och Epstein-Barr-virus (26, 41, 59) kodar proteiner (e1b-19k, LMWS-HL respektive BHRF1) som uppvisar sekvenshomologi till Pro-överlevnadsgener av BCL-2-Familjen.

identifieringen av virala proteiner som direkt inducerar apoptos är inte så omfattande dokumenterad som för virala proteiner som hämmar celldöd. Lentiviruses humant immunbristvirus och humant T-cell leukemivirus typ 1 kodar transkriptionsregulatorerna Tat och skatt, som har visat sig öka uttrycket av Fas-ligand samtidigt som uttrycket av BCL-2-familjemedlemmar minskar (79, 80). De humana adenovirus-kodade E1A -, E3-och E4-genprodukterna orsakar celldöd efter uttryck i cellodling. De adenovirus dödsinducerande generna uttrycks sent i infektionscykeln och överväger slutligen de viruskodade dödshämmande generna (38).

våra data visar att caspase 3-aktivering följer, snarare än föregår, cvb3-inducerade degenerativa morfologiska förändringar i infekterade HeLa-celler. Aktiverade kaspaser bearbetar specifika substrat, inklusive PARP och DFF. Hämning av kaspasaktivitet eliminerar emellertid inte det morfologiska utseendet (CPE) hos virusinfekterade celler, vilket bestäms genom kontrastmikroskopi. Kaspas bearbetning och klyvning av substrat kan vara viktigt i den ultimata förändringen av normala homeostatiska processer i infekterade celler och kan underlätta den slutliga clearance av virusinfekterade celler. De virala proteaserna 2a, 3c och 3CD kan klyva specifika strukturella proteiner, vilket resulterar i morfologiska förändringar som överensstämmer med CPE, på ett sätt som är analogt med verkan av kaspaser, som klyver separata substrat för att uppnå en distinkt apoptotisk fenotyp.

• upphovsrätt 1998 amerikanska samhället för mikrobiologi

11.

1. Clark M. E.,
2. Lieberman P. M.,
3. Berk A. J.,
4. Dasgupta A.

direkt klyvning av humant TATA-bindande protein genom poliovirusproteas 3C in vivo och in vitro.Mol. Cell. Biol.13199312321237

12.

1. Cryns V. L.,
2. Bergeron L.,
3. Zhu H.,
4. Li H.,
5. Yuan J.

specifik klyvning av Bisexuell-fodrin under fas-och tumörnekrosfaktorinducerad apoptos medieras av ett interleukin-1-konverterande enzym / Ced – 3-proteas som skiljer sig från poly (ADP-ribos) polymerasproteas .J. Biol. Chem.27119963127731282

13.

1. De Murcia J. M.,
2. Niedergang C.,
3. Trucco C.,
4. Ricoul M.,
5. Dutrillaux B.,
6. Mark M.,
7. Oliver F. J.,
8. Masson M.,
9. Dierich A.,
10. LeMeur M.,
11. Walztinger C.,
12. Chambon P.,
13. De Murcia G.

krav på poly (ADP-ribos) polymeras vid återhämtning från DNA-skador hos möss och i celler.Proc. Natl. Acad. Sci. USA94199773037307

14.

1. Doedens Jr,
2. Kirkegaard K.

hämning av cellulär proteinsekretion av poliovirusproteiner 2B och 3a.EMBO J. 141994894907

15.

1. Enari M.,
2. kram H.,
3. Nagata S.

involvering av ett ISLIKNANDE proteas i Fas-medierad apoptos.Nature37519957881

16.

1. Enari M.,
2. Sakahira H.,
3. Yokoyama H.,
4. Okawa K.,
5. Iwamatsu A.,
6. Nagata S.

ett kaspasaktiverat DNase som bryter ned DNA under apoptos och dess hämmare ICAD.Nature39119984350

17.

1. Enders J. F.,
2. Weller T. H.,
3. Robbins R. C.

odling av Lansing-stammen av poliomyelitvirus i kulturer av olika mänskliga embryonala vävnader.Science10919498587

18.

1. Erhardt P.,
2. Tomaselli K. J.,
3. Cooper G. M.

identifiering av MDM2-onkoproteinet som ett substrat för CPP32-liknande apoptotiska proteaser.J. Biol. Chem.27219971504915052

19.

1. Etchison D.,
2. Milburn S. C.,
3. Edery I.,
4. Sonenberg N.,
5. Hershey J. W.

hämning av HeLa-cellproteinsyntes efter poliovirusinfektion korrelerar med proteolysen av en 220 000-dalton-polypeptid associerad med eukaryot initieringsfaktor 3 och ett cap-bindande proteinkomplex.J. Biol. Chem.25719821480614810

20.

1. Farrow S. N.,
2. Vit J. H.,
3. Martinou I.,
4. Raven T.,
5. ordlek K. T.,
6. Grinham C. J.,
7. Martinou J. C.,
8. brun R.

kloning av en bcl-2 homolog genom interaktion med adenovirus e1b 19k.Nature3741995731733

21.

1. Godman G. C.

cytopatologin för enteroviral infektioninternationell granskning av experimentell patologirichter G. W., Epstein M. A. 5196667110akademisk PressNew York, N. Y

22.

1. Granville D. J., Jiang H., M. T., Levy J. G., McManus B. M.,
2. Hunt D. W.

överuttryck av Bcl-X(L) förhindrar caspase-3-medierad aktivering av DNA-fragmenteringsfaktor (DFF) producerad genom behandling med det fotokemo-terapeutiska medlet BPD-MA.FEBS Lett.4221998151154

23.

1. Granville D. J.,
2. Levy J. G.,
3. Hunt D. W.

fotodynamisk terapi inducerar caspase – 3-aktivering i hl-60-celler.Celldöd Skiljer Sig Åt.41997623629

24.

1. Guinea R.,
2. Lopez-Rivas A.,
3. Carrasco L.

modifiering av fosfolipas C och fosfolipas A2-aktiviteter under poliovirusinfektion.J. Biol. Chem.26419892192321927

25.

1. Helentjaris T.,
2. Ehrenfeld E.

hämning av värdcellsproteinsyntes av UV-inaktiverat poliovirus.J. Virol.211977259267

26.

1. Henderson S.,
2. Huen D.,
3. Rowe M.,
4. Dawson C.,
5. Johnson G.,
6. Rickinson A.

Epstein-Barr-viruskodat BHRF1-protein, en viral homolog av Bcl-2, skyddar mänskliga B-celler från programmerad celldöd.Proc. Natl. Acad. Sci. USA90199384798483

27.

1. Huber M.,
2. Selinka H.-C.,
3. Kandolf R.

Tyrosinfosforyleringshändelser under coxsackievirus B3-replikering.J. Virol.711997595600

28.

1. Irurzun A.,
2. Arroyo J.,
3. Alvarez A.,
4. Carrasco L.

förbättrad intracellulär kalciumkoncentration under poliovirusinfektion.J. Ferrule.69199551425146

29.

1. irurzun A., Perez L., Carrasco L.

förbättring av fosfolipas aktivitet under poliovirusinfektion.J. Gen. Ferrule.74199310631071

30.

1. Jacobsen M. D., Weil M., Raff M. C.

roll av Ced-3 / ISFAMILJPROTEASER i staurosporininducerad programmerad celldöd.J. Cell Biol.133199610411051

31.

1. Jang S. K., Davies M. V., Kaufman R. J.,
2. Wimmer E.

initiering av proteinsyntes genom intern inträde av ribosomer i den 5 ’ icke-översatta regionen av encefalomyokarditvirus RNA in vivo.J. Virol.63198916511660

32.

1. Jelachich M. L.,
2. Lipton H. L.

Theilers murina encefalomyelitvirus dödar restriktiva men inte tillåtna celler genom apoptos.J. Virol.70199668566861

33.

1. Kaufmann S. H.,
2. Desnoyers S.,
3. Ottaviano Y.,
4. Davidson N. E.,
5. Poirier G. G.

specifik proteolytisk klyvning av poly (ADP-ribos) polymeras: en tidig markör för kemoterapiinducerad apoptos.Cancer Res. 53199339763985

34.

1. Kothakota S.,
2. Azuma T.,
3. Reinhard C.,
4. Klippel A.,
5. Tang J.,
6. Chu K.,
7. McGarry T. J.,
8. Kirschner M. W.,
9. Koths K.,
10. Kwiatkowski D. J.,
11. Williams lt

caspase-3-genererat fragment av Gelsolin: effektor av morfologisk förändring i apoptos.Science2781997294298

35.lazebnik Y. A., Kaufmann S. H., Desnoyers S., Putrefy G. G., Earnshaw W. C.

klyvning av poly(ADP-ribos) polymeras med ett proteinas med egenskaper som IS.Nature3711994346347

36.

1. It P., Nijhawan D., Budihardjo I., Srinivasula S. M.,
2. Ahmad M., Alnemri E. S.,
3. Wang X.

cytokrom c och dATP-beroende bildning av apaf-1/caspase-9-komplex initierar och apoptotisk proteaskaskad.Cell911997479489

37.

1. Liu X.,
2. Zou H.,
3. slakt C.,
4. Wang X.

DFF, ett heterodimeriskt protein som fungerar nedströms caspase-3 för att utlösa DNA-fragmentering under apoptos.Cell891997175184

38.

1. Liu Y.,
2. Kitsis R. N.

induktion av DNA-syntes och apoptos i hjärtmyocyter av E1A-onkoprotein.J. Cell Biol.1331996325334

39.

1. Martin S. J.,
2. Lennon S. V.,
3. Bonham A. M.,
4. Cotter T. G.

induktion av apoptos (programmerad celldöd) i humana leukemiska HL-60-celler genom hämning av RNA eller proteinsyntes.J. Immunol.145199018591867

40.

1. Nair C. N.

monovalent katjonmetabolism och cytopatiska effekter av poliovirusinfekterade HeLa-celler.J. Virol.371981268273

41.

1. Neilan J. G.,
2. Lu Z.,
3. Afonso C. L., Kutish G. F., Sussman M. D., Rock D. L.

den afrikanska svinpestvirusgenen med likhet med proto-onkogen bcl-2 och Epstein-Barr-virusgenen BHRF1.J. Ferrule.67199343914394

42.det finns en mängd olika typer av proteaser.Trender Biochem. Sci.221997299306

43.

1. Ohlmann T., Rau M.,
2. smärta V., Morley S.

den C-terminala domänen för eukaryot proteinsyntes initieringsfaktor (eIF) 4G är tillräcklig för att stödja cap-oberoende översättning i frånvaro av eIF4E.EMBO J. 15199613711382

44.

1. Orrenius S.,
2. Nicotera P.

kalciumjonen och celldöd.J. Neural Transm. Suppl.431994111

45.

1. Porter A. G.,
2. Ng P.,
3. Janicke R. U.

dödssubstrat kommer till liv.Bioanalyser191997501507

46.

1. Pronk G. J.,
2. Ramer K.,
3. Amiri P.,
4. Williams lt

krav på ett ISLIKNANDE proteas för induktion av apoptos och ceramidgenerering av REAPER.Science2711996808810

47.

1. Reissig M.,
2. Howes D. W.,
3. Melnick J. L.

sekvens av morfologiska förändringar i epitelcellkulturer infekterade med poliovirus.J. Exp. Med.1041956289309

48.

1. Robbins F. C.,
2. Enders J. F.,
3. Weller T. H.

Cytopathogen effekt av poliomyelitvirus” in vitro ” på mänskliga embryonala vävnader.Proc. Soc. Exp. Biol. Med.751950370

49.

1. Rudin C. M.,
2. Thompson C. B.

apoptos och sjukdom: reglering och klinisk relevans av programmerad celldöd.Annu. Rev. Med.481997267281

50.

1. Sakahira H.,
2. Enari M.,
3. Nagata S.

klyvning av CAD-hämmare vid CAD-aktivering och DNA-nedbrytning under apoptos.Nature39119989699

51.

1. Sarin A.,
2. Wu M. L.,
3. Henkart P. A.

olika interleukin – 1 beta-omvandlande enzym (ICE) familjeproteaskrav för apoptotisk död av T-lymfocyter utlöst av olika stimuli.J. Exp. Med.184199624452450

52.

1. Schaefer A.,
2. K.,
3. Zibirre R.,
4. Koch G.

Poliovirusinducerade förändringar i HeLa-cellmembranfunktioner.J. Virol.441982444449

53.

1. Schwartzman R. A.,
2. Cidlowski J. A.apoptos: biokemi och molekylärbiologi för programmerad celldöd.Endocr. Rev. 141993133151

54.

1. Slee E. A.,
2. Zhu H.,
3. Chow S. C.,
4. MacFarlane M.,
5. Nicholson D. W.,
6. Cohen G. M.

Bensyloxikarbonyl-Val-Ala-Asp (OMe) fluorometylketon (Z-vad.FMK) hämmar apoptos genom att blockera behandlingen av CPP32.Biochem. J. 31519962124

55.

1. Srinivasula S. M.,
2. Ahmad M.,
3. Fernandes-Alnemri T.,
4. Litwack G.,
5. Alnemri E. S.

Molekylär ordning av Fas-apoptotisk väg: Fas/APO-1-proteas Mch5 är ett CrmA-hämmande proteas som aktiverar flera Ced-3/ISLIKNANDE cysteinproteaser.Proc. Natl. Acad. Sci. USA9319961448614491

56.

1. Stennicke H. R.,
2. Salvesen G. S.

biokemiska egenskaper hos caspase-3, -6, -7 och -8.J. Biol. Chem.27219972571915723

57.

1. Subramanian T.,
2. Tarodi B.,
3. Chinnadurai G.

funktionell likhet mellan adenovirus e1b 19-kDa-protein och proteiner kodade av BCL-2 proto-onkogen och Epstein-Barr-virus BHRF1-gen.Curr. Topp. Mikrobiol. Immunol.1991995153161

58.

1. Takahashi A.,
2. Alnemri E. S.,
3. Lazebnik Y. A.,
4. Fernandes-Alnemri T.,
5. Litwack G.,
6. Moir R. D.,
7. Goldman R. D.,
8. Poirier G. G.,
9. Kaufmann S. H.,
10. Earnshaw W. C.

klyvning av lamin A med Mch2 Alfa men inte Cpp32: flera interleukin 1 beta-omvandlande enzymrelaterade proteaser med distinkta substratigenkänningsegenskaper är aktiva vid apoptos.Proc. Natl. Acad. Sci. USA93199683958400

59.tarodi B.,

Subramanian T.,

Chinnadurai G.

Epstein-Barr-virus BHRF1-protein skyddar mot celldöd inducerad av DNA-skadliga medel och heterolog virusinfektion.Virologi2011994404407

60.

1. Teodoro J. G.,
2. Branton P. E.

reglering av apoptos genom virala genprodukter.Vir71199717391746

61.

1. Thome M.,
2. Schneider P.,
3. Hofmann K.,
4. Fickenscher H.,
5. Meinl E.,
6. Neipel F.,
7. Mattmann C.,
8. Burns K.,
9. Bodmer bod Schroter M.,

li>

10. scaffidi C.,
11. krammer P.,
12. Peter M. E.,
13. Tschopp.Nature3861997517521

62.

1. Thornberry,
2. Peterson E. P.,
3. Rasper D. M.,
4. Timkey T.,
5. Garcia-Calvo M.,
6. Houtzager V. M.,
7. Nordstrom P. A.,
8. Roy S.,
9. Vaillancourt J. P.,
10. Chapman K. T.,
11. Nicholson D. W.

en kombinatorisk metod definierar specificiteter av medlemmar av Capsas-familjen och granzyme B. funktionella relationer etablerade för Nyckelmediatorer av apoptos.J. Biol. Chem.27219971790717911

63.

1. Tolskaya E. A.,
2. Romanova L. I.,
3. Kolesnikova M. S.,
4. Ivannikova T. A.,
5. E. Smirnova A.,
6. Raikhlin N. T.,
7. Agol V. I.

apoptos-inducerande och apoptos-förebyggande funktioner av poliovirus.J. Virol.69199511811189

64.

1. R. Tomko P.,
2. Xu R.,
3. Philipson L.

HCAR och MCAR: humana och muscellulära receptorer för undergrupp C adenovirus och grupp B coxsackievirus.Proc. Natl. Acad. Sci. USA94199733523356

65.

1. Tsunoda I.,
2. C. Kurtz I.,
3. Fujinami R. S.

apoptos vid akut och kronisk sjukdom i centrala nervsystemet inducerad av Theilers Murin encefalomyelitvirus.Virologi2281997388393

66.

1. Vanags D. M.,
2. Pron-Ares M. I.,
3. Coppola S.,
4. Burgess D. H.,
5. Orrenius S.

proteas involvering i fodrinklyvning och fosfatidylserinexponering vid apoptos.J. Biol. Chem.27119963107531085

67.

1. van Kuppeveld F. J.,
2. Hoenderop J. G.,
3. Smeets R. L.,
4. Willems P. H.,
5. Dijkman H. B.,
6. Galama J. M.,
7. Melchers W. J.

Coxsackievirusprotein 2B modifierar endoplasmatisk retikulummembran och plasmamembranpermeabilitet och underlättar virusfrisättning.EMBO J. 16199735193532

68.

1. Wang X.,
2. Zelenski ng,
3. Yang J.,
4. Sakai J.,
5. Brown ms,
6. Goldstein Jl

klyvning av sterolreglerande elementbindande proteiner (SREBPs) av CPP32 under apoptos.EMBO J. 15199610121020

69.Wang Z. Q., Stingl L., Morrison C., Jantsch M.,

Los M., Schulze-Osthoff K., Wagner E. F.

PARP är viktigt för genomisk stabilitet men dispenserbar vid apoptos.Gener Dev.11199723472358

70.

1. Wattre P., Bert V., Hober D.

apoptos och humana virusinfektioner.Ann. Biol. Blinka.541996189197

71.

1. Wen L. P., Fahrni J. A., Troie S., Guan J. L.,
2. Orth K.,
3. Rosen G. D.

klyvning av fokal vidhäftningskinas av caspaser under apoptos.J. Biol. Chem.27219972605626061

72.

1. Yalamanchili P.,
2. Banerjee R.,
3. Dasgupta A.

Poliovirus-kodat proteas 2apro klyver det TATA-bindande proteinet men hämmar inte värdcell-RNA-polymeras II-transkription in vitro.J. Virol.71199768816886

73.

1. Yalamanchili P.,
2. Datta U.,
3. Dasgupta A.

hämning av värdcellstranskription av poliovirus: klyvning av transkriptionsfaktor CREB av poliovirus-kodat proteas 3Cpro.J. Virol.71199712201226

74.

1. Yalamanchili P.,
2. Harris K.,
3. Wimmer E.,
4. Dasgupta A.

hämning av basal transkription av poliovirus: ett viruskodat proteas (3cpro) hämmar bildandet av TBP-Tata box-komplex in vitro.J. Virol.70199629222929

75.

1. Yalamanchili P.,
2. Weidman K.,
3. Dasgupta A.

klyvning av transkriptionsaktivator Oct-1 av poliovirus kodat proteas 3Cpro.Virologi2391997176185

76.

1. yang D.,
2. Wilson J. E.,
3. Anderson D. R.,
4. Bohunek L.,
5. Cordeiro C.,
6. Kandolf R.,
7. McManus B. M.

in vitro mutational och hämmande analys av cis-verkande translationella element inom 5′ oöversatt region av coxsackievirus B3: potentiella mål för antiviral verkan av antigener oligomerer.Virologi22819976373

77.

1. Yuan J.

evolutionär bevarande av en genetisk väg för en programmerad celldöd.J. Cell Biochem.601996411

78.

1. Yuan J.

Transducing signaler om liv och död.Curr. Opin. Cell Biol.91997247251

79.

1. Zauli G.,
2. Gibellini D.

humant immunbristvirus typ-1 (HIV-1) tat-protein och Bcl-2-genuttryck.Leuk. Lymfom231996551560

80.

1. Zauli G.,
2. Gibellini D.,
3. Caputo A.,
4. Bassini A.,
5. Negrini M.,
6. Monne M.,
7. Mazzoni M.,
8. Capitani S.

humant immunbristvirus typ-1 tat-protein uppreglerar Bcl-2-genuttryck i Jurkat T-cellinjer och primära perifera mononukleära blodceller.Blod86199538233834