Abstrakt

utvecklingen av en kontinuerlig tvåstegscentrifugeringsprocess för avlägsnande av hybridomceller och cellskräp från odlingsbuljong rapporteras. Syftet var att generera supernatant, som direkt kan användas för ultrafiltrering eller kromatografi utan några filtreringssteg.

det första centrifugeringssteget för avlägsnande av hybridomceller från upprepad satsfermentering i 100 L skala utfördes av en förbättrad skivstapelseparator. Centrifugen var utrustad med ett hydrohermetiskt matningssystem, vilket möjliggjorde en skadafri separation av cellerna med måttlig centrifugalkraft.

förtydligandet för däggdjursceller i detta steg var i intervallet 99 till 99, 9%. Mängden subcellulära partiklar i den klarade vätskefasen reducerades upp till 50% av partikelinnehållet i matningsströmmen.

i ett andra centrifugeringssteg avlägsnades den återstående mängden cellskräp och andra små partiklar. Den utfördes med centrifugalkrafter upp till 18000 * g i en höghastighetscentrifug utrustad med ett kontinuerligt flödessystem.

de monoklonala antikropparna i den resulterande supernatanten koncentrerades direkt genom ultrafiltrering och kromatografiska metoder. I denna process observerades ingen nedsmutsning av UF-membran eller kromatografiska membran.

kostnaderna för membranersättning kan minskas drastiskt genom att använda centrifugeringsprocessen i två steg.