morcovul (Daucus carota) este o plantă bienală condimentată de iarnă care este cultivată pentru rădăcina sa comestibilă. Este una dintre cele mai consumate și produse legume datorită varietății sale dietetice de culoare, aromă, fibre și vitamina A, precum și consumului său atât în forme crude, cât și fierte. Peste 20 de milioane de tone din acesta sunt produse în fiecare an pentru consumul uman.

practicile de cultură a țesuturilor au fost foarte populare în clonarea plantelor. Primul studiu al culturii țesutului morcovului a fost raportat în 1939 de Gautheret și Nobecourt. Cu toate acestea, Steward și colab. și Reinert a raportat primul studiu al „embriogenezei morcovului”; au încercat să crească rădăcinile folosind suspensie celulară și culturi de calus.embriogeneza somatică este o metodă eficientă de a înțelege și investiga aspectele biochimice, fiziologice și genetice ale culturii celulare vegetale.

multe studii privind cultura țesutului morcovului au condus la dezvoltarea unei metode simple de embriogeneză la morcovi. Conform metodei, creșterea culturilor de morcov poate fi indusă doar prin îndepărtarea hormonului 2,4-D din culturile de suspensie celulară. Acum, morcovul este adesea folosit ca model experimental pentru analiza embriogenezei somatice în diferite laboratoare din întreaga lume.

materiale și echipamente necesare pentru stabilirea culturii

materiale sterilizate

• 5 Cultură friabilă de calus de morcov, necontaminată și menținută la 25 de la unt.
• 5 flacoane Erlenmeyer (250 ml), conținând mediu de cultură cu 5 x 10-8 g/ml 2, 4-D.
• 5 cilindri de măsură (100 ml) cu capace din folie.
• 2 spatule.
• 25 foi de folie de aluminiu (100 x 100 mm).
• 2 bucăți de nylon sau site din oțel inoxidabil cu o porozitate de 250 mm, care pot fi introduse în deschiderea cilindrilor de măsurare.
• 5 Petri-vase.

Non-sterilizate materiale

• impermeabil marcaj stilou
• Rotativ agitare mașină
• Bunsen arzător
• 1 Erlenmeyer balon (150 ml) conținând 95% etanol
• Parafilm

procedura de inițiere și stabilire a culturii

1. luați tuburile culturii calusului, sterilizați gura tuturor celor 5 tuburi și transferați calusul în vasul Petri separat (5 calli în 5 vase Petri).
2. se ia un balon canonic de 250 ml care conține mediul de cultură și 2, 4-D.
3. transferați toate cele 5 calli din vasul Petri în 5 baloane canonice, separat.
4. Flame / sterile gura baloanelor și acoperiți-le cu capacul. Fixați capacul folosind parafilm.
5. așezați toate flacoanele care conțin cultura pe mașina de agitare rotativă în întuneric sau cu intensitate redusă a luminii la 25%.
6. după 7 zile, transferați baloanele din agitator într-o cameră sterilă.
7. scoateți parafilmul și capacul foliei din fiecare balon și flacați / sterilizați gura baloanelor.
8. se transferă separat suspensia fiecărui balon într-un cilindru steril de 100 ml, trecând-o printr-o sită.
9. lăsați conținutul să se așeze timp de 10 minute și apoi aruncați supernatantul.
10. se transferă reziduurile celulelor rămase în cilindrul de măsurare într-un balon de 250 ml care conține 60 ml de mediu proaspăt.
11. repetați pasul 10 pentru fiecare balon de cultură.
12. puneți din nou toate cele cinci baloane pe agitator.
13. după 7 zile repetați procedura pe care ați făcut-o înainte (de la Pasul 6-10). Cu toate acestea, de data aceasta luați doar 1/5 din celulele reziduale ca inocul.
14. repetați procedura de aproximativ 3-4 ori. Procedând astfel, numai celule unice sau agregate mici vor rămâne în suspensia de morcov.
15. pentru suspensia de celule de morcov, numărul de celule corespunzătoare variază între 105 și 3 x 105 celule/ml sau 100 și 300 mg (greutate proaspătă) de inocul într-un volum de 60 ml mediu proaspăt care conține medii și 5×10-8 g/ml, 2,4-D.
16. o perioadă de transfer de 7 zile este adecvată pentru ca morcovul să obțină celule unice în cultura de suspensie.

Approximate Schedule of the Culture

Event	Timing (approximate)
Initiation of cell suspension and determination of total cell number and PCV (packed cell volume)	Day 0
First transfer of cultures	Day 8
Fourth transfer of cultures	Day 29

Result

What should you observe while experimenting? Iată câteva puncte de reținut în timp ce notați rezultatele.

• data și durata experimentului.
• numărul de culturi și tratamente aplicate.
• morfologia Record și numărul de culturi infectate la un interval de trei săptămâni.
• determinați PCV (volumul celular ambalat) la începutul și la sfârșitul transferului culturii.
• estimați numărul total de celule după 3 subculturi, în zilele 1, 2, 4 și 7 și trasați un grafic în funcție de timp.
• studiați relația dintre densitatea inoculului și modelul de creștere.

cultura suspensiei oferă un beneficiu față de alte culturi, deoarece permite mișcarea țesutului în mediul de cultură care facilitează schimbul gazos. În plus, elimină orice polaritate a țesutului și a gradientului de nutrienți din interiorul și din mediu.

aplicarea culturii de țesut pentru morcov

1. pentru a clona taproots.
2. pentru a studia forma mutantă a morcovilor.
3. pentru a studia răspunsurile fiziologice ale morcovului care pot facilita înțelegerea și a altor plante.
4. pentru a studia creșterea și dezvoltarea morcovului dintr-o singură celulă.
5. pentru a studia răspunsul la stres al morcovului care oferă o perspectivă asupra răspunsurilor altor plante.
6. pentru a genera sute de plante transgenice din suspensia de celule unice pentru orice scop experimental.

1. Reinert J. și Yeoman M. M. (1982). Cultura celulelor și țesuturilor vegetale: un manual de laborator. Springer-Verlag, Berlin Heidelberg, New York.
2. Hardegger M., Shakya R. (2004) transformarea morcovului. În: Curtis I. S. (eds) culturile transgenice ale lumii. Springer, Dordrecht. https://doi.org/10.1007/978-1-4020-2333-0_22.
3. creșterea și divizarea celulelor morcovului în cultura suspensiei. (1970). Fiziologia plantelor și a celulelor. DOI: 10.1093 / oxfordjournals.pcp.a074564.
4. https://www.atzlabs.com/prodcut-info/C1955-Carrot-…