Introducere

carcinomul hepatocelular (HCC) care reprezintă subtipul histologic major al cancerelor hepatice primare, este al cincilea cel mai frecvent cancer la nivel mondial și a treia cauză principală a mortalității prin cancer (1,2). Cele mai mari rate de cancer hepatic sunt întâlnite în țările în curs de dezvoltare, în special în Asia de Est/Sud-Est și Africa de mijloc/Vest,în timp ce ratele sunt scăzute în Asia de Sud-Centrală, de Vest, Europa de Nord și de Est (3). Alterarea genetică și factorii epigenetici de risc ridicat,cum ar fi infecția cronică cu VHB sau VHC, ciroza hepatică, boala hepatică alcoolică și aflatoxinele, reprezintă morbiditatea ridicată a HCC (4-6).Cu toate acestea, mecanismul molecular însoțit dehepatocarcinogeneza și progresia sunt încă în mare parte neclare.Astfel, este esențial pentru noi să clarificăm etiologia și să investigăm modificarea moleculară vitală care stă la baza inițierii și progresiei hepatocelularcarcinomului și, în cele din urmă, să îmbunătățim conceptele noastre actuale pentru diagnosticarea, screeningul și tratamentul acestei boli.

în timpul procesului de hepatocarcinogeneză, abrogarea punctelor de control ale ciclului celular este un semn distinctiv important care poate promova formarea cancerului (2).ca unul dintre regulatorii punctului de control al ciclului celular, ciclul de diviziune celulară 20 (CDC20) pare să acționeze ca o proteină reglatoare care interacționează cu complexul/ciclozomul care promovează anafaza (APC / C)din ciclul celular, care este necesar pentru inițierea anafazei și ieșirea mitozei târzii (7,8). Doi factori de reglementare, CDC20 și Cdh1direct se leagă de APC și activează ubiquitinationactivity ciclină în timpul mitozei și faza G1 (9,10).S-a raportat că proteina 80 asociată receptorului(RAP80), care recrutează BRCA1 la locurile de deteriorare a ADN-ului în calea ubichitinsemnală indusă de deteriorarea ADN-ului, poate fi degradată de complexul de promovare a anafazei (APC/c-Cdc20) sau (APC/C-Cdh1) prinpoliubiquitinare în timpul mitozei la faza G1 (11). Epuizarea RAP80 a arătat un control eficient al punctului de control al fazei G2-M și a promovat progresia ciclului mitoticcell.

expresia CDC20 poate fi suprimată remarcabil de proteina p53 care inhibă transformarea malignă prin reglarea ciclului celular, senescența celulară și genele legate de apoptoză(12). Expresia ridicată a Cdc20 a fost raportată în diferite tumori maligne, inclusiv adenocarcinom pancreaticductal (13), carcinom cu celule scuamoase, cancer gastric (14), cancer de col uterin (15) și diferite celule canceroase (14,16).Cu toate acestea, modelul de Expresie al CDC20 și semnificația sa clinică în carcinomul hepatocelular uman nu au fost clarificate.

în acest studiu, prin analiza setului de date microarray(aderarea nr. GSE14520) din gene Expression Omnibus (GEO)database (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/), am constatat că Cdc20a fost nodul major în rețelele de interacțiune moleculară HCC. Am examinat nivelul de Expresie al CDC20 în HCC primar și țesuturile non-tumorale adiacente și am evaluat semnificația clinicopatologică a acestuia în 132 de probe HCC arhivate. A fost investigat și efectul eliminării cdc20de siRNA asupra creșterii și ciclului celular al celulelor canceroase hepatice. Constatările noastre sugerează că CDC20 poate juca un rol semnificativ în dezvoltarea HCC.

materiale și metode

analiza bioinformatică

setul de date Microarray GSE14520 (17) a fost descărcat de pe GEO. În acest studiu au fost utilizate un număr total de 183 HCC și 179 de țesuturi paracarcinice corespunzătoare care au fost testate cu cipuri genice Affymetrix U133A de la pacienți chinezi din cohorta 2. Datele de profilare a expresiei genice au fost Re-rezumate folosind metoda RMA(18) și fișierele CDF centrate pe gene Entrez (19) (în loc de fișierele CDF originale Affymetrix), care au filtrat sonde nespecifice pe jetoane și au îmbinat mai multe seturi de sonde reprezentând aceeași genă entrez într-un singur set de sonde. Analiza semnificației microarray (SAM) (20) a fost efectuată pentru a identifica gene exprimate diferit între HCC și țesuturile carcinomului para corespondent. Delta a fost setată la 2.25, iar pragul ofFDR a fost setat la 0.001. Au fost studiate genele supraexprimate în HCC care au fost exprimate în mai mult de 50 de țesuturi HCC, dar mai puțin de 10 țesuturi paracarcinice corespunzătoare. Genele au fost analizate în continuare cu software-ul GenCLiP (21) (http://ci.smu.edu.cn) pentru a adnota funcțiile genelor și pentru a construi rețele de interacțiune moleculară.

declarație de etică

probele clinice au fost utilizate numai în scopuri de cercetare. Aprobarea a fost obținută de la Comitetul de etică al Spitalului General ChinesePLA (LREC 2012/40). Toate probele au fost colectate sub condiția unui consimțământ prealabil scris în cunoștință de cauză din partea pacienților.

pacienți și probe de țesut

șaisprezece perechi de HCC proaspete și țesuturi non-tumorale adiacente utilizate pentru analize PCR în timp real și western blot au fost colectate în timpul intervenției chirurgicale de la Spitalul General PLA din China(Beijing, China) din noiembrie 2012 până în februarie 2013. Țesuturile au fost înghețate în azot lichid până la utilizare. Parafină-încorporat, HCC arhivate și țesuturile non-tumorale adiacente utilizate pentruimunohistochimie (IHC) au fost obținute de la 132 de pacienți HCC care au suferit o rezecție parțială a ficatului la același spital între ianuarie 2006 și decembrie 2007. Vârsta medie a paciențilora fost de 52 de ani (Interval 24-80 ani).

cultura celulară

o linie normală de celule hepatice (LO2) și trei linii celulare HCC (HepG2, SMMC7721, Huh7) au fost achiziționate de la American Typeculture Collection (ATCC, Manassas, VA) sau Academia Chineză ofScience Cell Bank și au fost menținute în Institutul ofBiotechnology, Academia de științe Medicale Militare. Toate celulele au fost menținute în mediul Eagle modificat Dulbecco (DMEM, Invitrogen,CA) suplimentat cu 10% ser fetal bovin (FBS, Gibco, Carlsbad,CA) și 2 mM L-glutamină, 100 U/ml penicilină, 100 XCT/mlstreptomicină la 37 xtct cu 5% CO2.

extracția ARN, sinteza ADNc și analiza PCR în timp real

ARN-ul Total a fost extras din liniile celulare și eșantioanele de țesut utilizând reactivul TRIzol (Invitrogen) conform instrucțiunilor producătorului. Un total de 2 ARN-uri de la suta a fost inversat cu ajutorul TransScript-ului si a kitului de sinteza ADNc de la transgen Biotech (Beijing, China). Real-time PCR was performed toexamine CDC20 mRNA level in cell lines and tissue samples by usinga Bio-Rad iQ5 Multicolor Real-Time PCR Detection System (Bio-Rad,Hercules, CA). β-actin was used as an internal control fornormalization. PCR primers were designed using the Primer Premier 5software and the sequences were: CDC20 forward,5′-TCGCATCTGGAATGTGTGCT-3′; and reverse,5′-CCCGGGATGTGTGACCTTTG-3′; β-actin forward,5′-TGACGTGGACATCCGCAAAG-3′; and reverse, 5′-CTGGAAGGTGGACAGCGAGG-3′. Datele de Expresie au fost normalizate la media geometrică a genei de menaj-actină și au fost calculate cudectct (22), iar rezultatele au fost exprimate cu 2−centict.

analiza Western blot

analiza Western blot a fost efectuată în conformitate cu protocolul standard. Electroforeza în gel SDS-poliacrilamidă (10%) a fost utilizată pentru a separa proteina care a fost apoi electrotransferată de gel într-o membrană din fluorură de poliviniliden (PVDF). După blocarea cu 5% lapte degresat uscat timp de 1 oră, membrana a fost încubată cu anticorp policlonal cdc20 anti-uman de iepure(1:1.000, Bioworld Technology, St. Louis Park, MN) timp de 1 oră la camerătemperatură. Anticorpul monoclonal anti-uman al șoarecelui(1:5.000; Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) a fost utilizat ca aninternal control. După spălarea cu soluție salină tamponată Tris cu între-20 (TBST) de trei ori, membrana a fost incubată cu anticorp secundar conjugat cu peroxidază de hrean împotriva șoarecelui rabbitor (diluție 1:5.000). Detectarea chemiluminiscentă a fost efectuată cu substratul Immobilon Western CHEMILUMINESCENT HRP (Millipore Corporation, Billerica, MA).

imunohistochimie (IHC) andscoring

imunohistochimie pentru expresia CDC20 în HCC și probe non-tumorale adiacente a fost realizată folosind metode standard.Pe scurt, secțiunile de țesut au fost incubate cu iepure Anti-Cdc20diluat 1: 200 (tehnologie Bioworld) peste noapte la 4 C. Serumalbumina bovină (1%; BSA) fără anticorpi primari a fost utilizată ca control negativ. Anticorpul IgG anti-iepure poly-hrean peroxidază (HRP)secundar (ZSGB-Bio, Beijing, China) a fost incubat la temperatura camerei timp de 20 min.

toate secțiunile imunosupresoare au fost analizate și înregistrate independent de către doi patologi într-un mod orb, fără cunoașterea informațiilor clinicopatologice, bazate pe metoda scorului H, care ia în considerare intensitatea colorării împreună cu procentul de celule care colorează pozitiv (23,24).Pentru metoda scorului H, 10 câmpuri au fost alese aleatoriu la 400magnification. Intensitatea colorării în celule a fost marcată ca 0,1, 2 și 3 corespunzătoare negativ, slab, intermediar șicolorare puternică, respectiv. În fiecare câmp numărul total decelulele și celulele colorate la fiecare intensitate au fost numărate. Scorul H a fost calculat după formula: (%din celulele colorate laintensitate categoria 1 int.1) + (%din celulele colorate la intensitate categoria 2 int. 2) + (%din celulele colorate la intensitate categoria 3 int. 3). Scorurile H au variat de la 0 la 300, unde 300 au reprezentat 100% din celule puternic colorate (3+) (24). Expresia ridicată a Cdc20 a fost definită ca colorarea scorurilor H ale celulelor 200.

suprimarea CDC20 de interferingrna mici (siARN)

dublu catenar, mici interferând ARN (siARN) a fost sintetizat și purificat de GenePharma (Shanghai, China). Subsecvențele corespunzătoare regiunii de codificare a cdc20 umane au fost: sense, 5′-GGAGCUCAUCUCAGGCCA UUU-3′; antisens,5′-AUGGCCUGAGAUGAGCUCUCUU-3′. Un Sirna fără țintă a fost folosit pentru controlul negativ. Aceste siRNAs au fost dizolvate în apă de pirocarbonat de indietil (DEPC) pentru a ajunge la o concentrație de 20 MMC. Cancer hepatic celulele HepG2 au fost tratate cu cdc20 siARN sauarna de control negativ la 20 nM prin utilizarea reactivului de transfecție INTERFERin invitro siARN (PolyPLUS Transfection, NewYork, NY).

analizele cantitative PCR în timp real și western blot au fost utilizate pentru detectarea efectului de interferență al siCDC20. Celulele care au fost netratate sau tratate cu sirnaoligonucleotide de control negative au fost grupurile de control.

testul de proliferare celulară

două baloane de plastic de 25 cm2 au fost inoculate fiecare cu 2 celule canceroase hepatice (HepG2), care au fost apoi transfectate cu siRNA de control negativ de 20 nM și, respectiv, CDC20siRNA, pentru incubarea cu 48 de ore. Apoi, celulele au fost digerate și însămânțate în plăci cu 6 puțuri care conțin 2 ml mediu pe godeu.Ulterior, celulele dintr-un puț au fost digerate și numărate de către contorul celular automat (Invitrogen) la fiecare 24 de ore până în ziua a cincea.

testul de sortare a celulelor activate prin fluorescență(FACS) al ciclului celular

siARN pentru CDC20 și sirnaoligonucleotidele de control negativ au fost transfectate în celule HepG2 cu interferina in vitro reactiv de transfecție a siARN timp de 48 de ore. după tratamentul cu 2 hectolitri/ml timidină (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) timp de 24 0, 3, 6, 9, 12-h dupăîndepărtarea timidinei din mediu și fixată cu 70% alcool.Înainte de analize, celulele au fost spălate cu PBS, tratate cu 1 mg/mlrnază a la 37 centicc timp de 30 min și apoi colorate cu iodură de propidiu(PI). Analizele au fost efectuate de bd FACSCalibur (Becton-Dickinson,Franklin Lakes, NJ), iar rezultatele au fost analizate de software-ul WinMDI versiunea 2.9.

analize statistice

toate analizele statistice au fost realizate folosind pachetul software statistic IBMSPSS 20.0. Analiza unidirecțională a varianței (ANOVA) a fost utilizată pentru a compara expresia CDC20 mrnanormalizată cu actina-actină în liniile celulare. Aceeași metodă a fost, de asemenea, realizată în compararea diferențierii histologice în țesuturile tumorale normalizate la probele hepatice normale. Comparații de date în douăgrupuri au fost efectuate prin testul T al elevului. Testul cu numărul 2A fost utilizat pentru a analiza relația dintre expresia CDC20 și caracteristicile clinicopatologice. Corelațiile Bivariate între variabile au fost calculate prin coeficienții de corelație ai lui Spearman.Nivelul semnificației statistice a fost stabilit la P <0.05 pentru toate testele.

rezultate

CDC20 este nodul major în rețelele de interacțiune moleculară HCC

analiza SAM a identificat 4.358 de gene supraexprimate în CCC, în care 137 de gene au fost exprimate în mai mult de 50 de țesuturi HCC,dar în mai puțin de 10 țesuturi para-carcinom. Analiza GenCLiP a arătat că, dintre cele 137 de gene, 72 de gene au fost legate de ciclul celular(P=1.238 e-15, prin testul de la x2), 19 gene au fost legate de ansamblul de la x2 (P=2.172 e-55, prin testul de la x2), iar 26 de gene au fost legate de segregarea cromozomială (p=5.472 E-55, prin testul de la x2). Printre rețelele moleculare construite cu 137 de gene, CDC20 a fost nodul major care nu a fost raportat anterior ca fiind legat de HCC. Nouă gene (NEK2, E2F1,BUB1, BUB1B, AURKB, CCNB1, CCNB2, UBE2C și CDKN2A) sunt cunoscute pentru a interacționa cu CDC20, în care 7 gene au fost legate de punctul de control spindleassembly (SAC) (Fig.1). Obiectivul SAC este CDC20 (25). Astfel, am dedus că în HCC, supraexprimarea CDC20 duce la absența sacului, iar celulele devin rapid aneuploide.

CDC20 este supraexprimat în HCC

PCR cantitativ în timp real a fost utilizat pentru a examina nivelul transcrierii CDC20 în trei linii celulare HCC (HepG2, SMMC-7721și Huh7) și o linie celulară hepatică normală (LO2). Nivelul ARNm CDC20 a fost mai mare în toate cele trei linii celulare HCC decât în linia normală (Fig. 2).

pentru a determina dacă reglarea ascendentă a ccdc20 în liniile celulare HCC este similară la pacienții cu HCC, am efectuat quantitative real-time PCR pe 16 perechi de HCC potrivite și țesuturi hepatice adiacente. Așa cum se arată în Fig.3A, CDC20 s-a dovedit a fi supraexprimat diferențiat în 14 din toate probele umane primare examinate HCC comparativ cu eșantioanele non-canceroase de la aceiași pacienți. În plus, raportul tumoral/non-tumoral (T/NT) al expresiei ARNm CDC20 a fost de cel puțin >de 2 ori în toate aceste 14 probe reglate în sus, iar cel mai mare raport a fost chiar până la aproximativ 40 de ori. Nivelul proteic al CDC20 a fost confirmat în toate16 probe de țesut pereche prin analiza western blot. Software-ul Image J1.47V a fost utilizat pentru a cuantifica nivelul de gri al fiecărei benzi și pentru a calcula raportul CDC20 t/NT al fiecărui pacient normalizând cu a-tubulină. Rezultatele au arătat că toate probele HCC examinate au prezentat un nivel de Expresie mai ridicat al proteinei CDC20, cu excepția probei 1 și a probei4, care a fost în concordanță cu nivelul ARNm (Fig. 3B). Aceste constatări au indicat faptul că ccdc20 a fost reglat în mod obișnuit fie în țesuturile HCC, fie în liniile celulare.

imunohistochimie colorarea proteinei Cdc20

imunohistochimia (IHC) a fost efectuată pentru a analiza expresia proteinei și localizarea CDC20 în 132 de probe de țesut HCC arhivate încorporate în parafină, inclusiv 14 cazuri de bine diferențiate, 78 de cazuri de diferențiere moderată și 40 de cazuri de tumori slab diferențiate. Proteina CDC20 a fost reglată în sus (scor h-200) în 90 (68,18%) din 132 de țesuturi HCC. Așa cum se arată inFig. 4A, nivelurile ridicate de CDC20 au fost prezente în leziunile primare HCC și colorația pozitivă în principal localizată în citoplasmă și nuclee. În schimb, CDC20 a fostnegativ sau slab colorat în țesuturile non-tumorale corespunzătoare. Comparând cantitativ scorurile colorării CDC20 între 132 CMC arhivate și țesuturile non-tumorale adiacente (incluzând în principal hepatociroza și hepatita), scorurile colorării CDC20 au crescut semnificativ în probele HCC comparativ cu eșantioanele peritumorale (Fig. 4B). În plus, scorurile de colorare CDC20 au crescut semnificativ odată cu progresia diferențierii histologice a tumorii de la țesuturile bine diferențiate (Fig.5).

corelația dintre creșterea expresiei Cdc20 și parametrii clinicopatologici ai HCC

relația dintre expresia proteinei CDC20 și caracteristicile clinicopatoligice ale 132 pacienți cu HCC a fost analizată în continuare. Așa cum este rezumat în tabelul I, expresia CDC20 a fost asociată semnificativ cu sexul (P=0,013), diferențierea tumorală (P=0,000), stadiul TNM (P=0,012), p53 și Ki-67expresia (P=0,023 și, respectiv, P=0,007). Cu toate acestea, s-a constatat o asociere nostatistică semnificativă între expresia Cdc20 ridicată și alte caracteristici clinicopatologice, inclusiv vârsta, dimensiunea tumorii, infecția cu VHB,nivelul seric AFP, ciroza hepatică, invazia vasculară și metastazele hepatice intra/extra. Analiza corelației Spearmancorrelation a relevat faptul că expresia ridicată a CDC20 a fost strâns legată de gen (R=0,215, P=0,013), diferențierea tumorală mai slabă (R=0,421, p<0,001), stadializarea avansată a TNM(R=0,218, P=0,012), nivelul de Expresie mai ridicat al p53 (R=0,212,P=0,014) și Ki-67 (R=0,235, p=0,007) (tabelul II). Luate împreună, aceste rezultate au indicat faptul că CDC20 a fost foarte exprimat în țesuturile HCC și expresia sa strâns corelată cu diferențierea și progresul HCC.

suprimarea expresiei CDC20 de către isirna

PCR cantitativ în timp real a evidențiat suprimarea nivelului transcripțional de 90% a CDC20 la 48 de ore după transfecție cu sicdc20, comparativ cu celulele netratate sau celuletransfectat cu siARN de control negativ (fig. 6A) (P<0,0001). Analiza western Blot a arătat, de asemenea, o suprimare evidentă a nivelului proteinei CDC20 la 48 h după transfecția cu siCDC20 (Fig. 6B). Expresia modificată a proteinei inhibitorului kinazei dependente de ciclină 1A (p21) a fost, de asemenea, examinată prin analiza western blot, iar rezultatele au arătat că nivelul proteinei P21 a fost remarcabil de reglat datorită supresiei CDC20 (Fig. 6B).

efectul supresiei CDC20 asupra proliferării celulare și a ciclului celular

testul de proliferare celulară a arătat că creșterea celulară a celulelor CDC20 siARN transfectate a fost remarcabil inhibată în comparație cu celulele transfectate cu siARN martor negativ(Fig. 6C). Inhibarea proliferării celulare de către siCDC20 a fost de așteptat să fie însoțită de oprirea la metafaza ciclului celular. Prin testul de citometrie în flux, un număr crescut de celule în faza G2/M a fost observat în celulele transfectate sicdc20 comparativ cu celulele transfectate cu siRNA de control negativ (Fig. 6D). Aceste date au indicat faptul că suprimarea CDC20 a inhibat creșterea celulară prin inducerea opririi fazei G2/M.

discuție

prin analiza bioinformatică a unui microarraydataset din Baza de date GEO, am identificat CDC20 care a fost principalul cod în rețelele de interacțiune moleculară HCC, a fost legat de Checkpoint assembly checkpoint (SAC) în ciclul celular. În timpul tumorigenezei, s-a considerat că defectele sau perturbarea punctului de control al asamblării axului sunt responsabile pentru rata crescută de aneuploidizare (26). Mondalet al au raportat că CDC20 este supraexprimat în tumorile primare ale capului și gâtului și în mai multe linii celulare de carcinom cu celule scuamoase orale(OSCC). Nivelul ridicat de exprimare a CDC20 în celulele OSCC este asociat cu promovarea prematură a anafazei, ceea ce duce la anomalii mitotice (27). Studiile au arătat, de asemenea, că expresia CDC20 ridicată este detectată în carcinomul cu celule scuamoase și în țesuturile cancerului colorectal, iar supraexprimarea acesteia poate prezice un prognostic slab pentru pacienți (28,29).

CDC20 este, de asemenea, necesar pentru celulele anafazei târzii să iasă din mitoză (30). Țintirea ccdc20 are ca rezultat blocarea ieșirii din mitoză, care poate fi o strategie terapeutică mai bună pentru uciderea celulelor canceroase mai eficient decât medicamentele care perturbă axul (31). Wang și colab au raportat că cdc20, care poate funcționa ca o oncoproteină pentru a promova progresul și dezvoltarea cancerelor umane, reprezintă o țintă terapeutică promițătoare (32). Deși rolul CDC20 în tumorigeneză și prognosticul mai multor cancere umane a fost profund cercetat și confirmat, studiile limitate au investigat funcția potențială a CDC20 în inițierea și progresia carcinomului hepatocelular.

în acest studiu, am evaluat nivelul de Expresie alcdc20 în 16 țesuturi HCC proaspete congelate pereche și probe non-tumorale corespunzătoare. Rezultatele au indicat că media ARNm șinivelul proteic al CDC20 în țesuturile HCC a fost mult mai mare decât în țesuturile non-tumorale. Imunohistochimia a fost utilizată pentruinvestigarea localizării subcelulare a CDC20 și a relației sale cu parametrii patologici clinici ai HCC patients.By cu ajutorul testului cu ajutorul testului cu numărul 2, s-a constatat că un nivel mai ridicat al proteinexpresiei CDC20 a fost asociat cu sexul, diferențierea tumorală,stadiul TNM, expresia P53 și Ki-67. Pentru a investiga potențialulfuncția biologică și mecanismul molecular al CDC20 în HCC, am proiectat un ARN dublu catenar, interferent mic (siARN) țintindcdc20 pentru a interfera cu nivelul său de Expresie în linia celulară HepG2. Prin testul de proliferare celulară și testul FACS, am constatat că celulele transfectate cu oligonucleotide siCDC20 au arătat o viteză de creștere scăzută și o proporție crescută de celule în stadiul G2/M.

eliminarea specifică a cdc20 de către siARN a arătat un efect suprimat împotriva proliferării celulelor canceroase hepatice invitro, ceea ce a indicat că supraexprimarea CDC20 ar putea fi de așteptat să accelereze proliferarea celulelor și să promoveze inițierea tumorii și progresia HCC. Celulele canceroase hepatice cu expresie cdc20 suprimată au fost induse să acumuleze faza inG2 / M, care poate fi responsabilă pentru inhibarea creșterii celulare. Inhibitorul de kinază dependent de ciclină 1A (p21) care este cunoscut pentru a participa la punctul de control G2/M (33), S-a dovedit a fi reglat în sus atunci când expresia CDC20 a fost suprimată în mod specific în celulele canceroase hepatice. P21 poate inhiba activitatea CDK care duce laacumularea proteinei supresoare tumorale RB nefosforilate, careinhibă activarea transcripțională a E2F și ulteriorprevenește intrarea celulelor în faza S a ciclului celular (34).

În concluzie, acesta este primul studiu care vizează examinarea expresiei CDC20 în țesuturile și liniile celulare HCC, oferind un nou accent pe faptul că CDC20 poate fi un indicator clinic relevant și o țintă terapeutică promițătoare a HCC. Cu toate acestea, sunt necesare studii suplimentare axate pe mecanismele moleculare ale CDC20 în inițierea și progresul HCC și cercetări privind semnificația prognostică a cdc20.

mulțumiri

autorii mulțumesc colegilor lor de la Institutul de Biotehnologie al Academiei de Medicină Militarăștiințe pentru sprijinul lor tehnic.

	Parkin DM: Global cancer statistics in theyear 2000. Lancet Oncol. 2:533–543. 2001.PubMed/NCBI
	El-Serag HB and Rudolph KL: Hepatocellularcarcinoma: epidemiology and molecular carcinogenesis.Gastroenterology. 132:2557–2576. 2007. View Article : Google Scholar : PubMed / NCBI
	Jemal a, Bray F, Centrul MM, Ferlay J, Warde și Forman D: statistici globale privind cancerul. Ca Cancer J Clin.61:69–90. 2011. Vezi articolul: Google Scholar
	Severi t, van Malenstein H, Verslype c andvan Pelt JF: inițierea și progresia tumorii în hepatocelularcarcinom: factori de risc, clasificare și ținte terapeutice.Acta Pharmacol Sin. 31:1409–1420. 2010. Vizualizare Articol: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Michielsen P și Ho e: bandă hepatitică virală carcinom hepatocelular. Acta Gastroenterol Belg. 74:4–8.2011.
	McGivern DR și Lemon SM: mecanisme specifice virusului carcinogenezei în cancerul hepatic asociat virusului hepatitei C. Oncogene. 30:1969–1983. 2011. Vezi articol: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Fung TK și Poon RY: Un roller coaster ridewith ciclinele mitotice. Semin Cell Dev Biol. 16:335–342. 2005.Vezi articolul : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Weinstein J, Jacobsen FW, Hsu-Chen J, Wu Tand Baum LG: o proteină mamifer nou, p55CDC, prezent în divizarecelule este asociat cu activitatea protein kinazei și are omoloaga proteinele ciclului de diviziune celulară Saccharomyces cerevisiae cdc20 și cdc4. Mol Cell Biol. 14:3350–3363. 1994.
	Peters JM: Biologie celulara: checkpointbrake ușurat. Natura. 446:868–869. 2007. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Fang G, Yu H și Kirschner MW: Directbinding de membri ai familiei de proteine CDC20 activeaza complex de promovare a anafazei în mitoză și G1. Celula Mol. 2:163–171.1998. Vezi articol: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Cho HJ, Lee eh, Han Sh, și colab: Degradationof umane RAP80 este ciclul celular reglementat de cdc20 și cdh1 ubiquitinligases. Res.10:615-625. 2012. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Kidokoro t, Tanikawa c, Furukawa Y,Katagiri T, Nakamura Y și Matsuda K: CDC20, o țintă terapeutică potențială pentru cancer, este reglementată negativ de p53. Oncogene.27:1562–1571. 2008. Vezi articol: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Chang DZ, Ma Y, Ji B, și colab: Creșterea expresiei cdc20 este asociată cu diferențierea și progresia ductaladenocarcinomului pancreatic. J Hematol Oncol.5:152012. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Kim JM, Sohn HY, Yoon Sy, et al:identificarea genelor legate de cancerul gastric folosind un cDNAmicroarray care conține noi etichete de secvență exprimate exprimate celulele canceroase ingastrice. Res.11:473-482. 2005.PubMed / NCBI
	Espinosa am, Alfaro a, Roman-Basaure E, etal: mitoza este o sursă de markeri potențiali pentru screening-ul și țintele de supraviețuire și terapeutice în cancerul de col uterin. PloS Unu.8:.PubMed / NCBI
	Ouellet V, Guyot MC, Le Page C și colab.: analiza matricei tisulare a expresiei candidatelor microarray identifică markerii asociați cu gradul tumorii și rezultatul cancerului ovarian epitelial inseros. Int J Cancer. 119:599–607. 2006.Vezi articolul: Google Scholar
	Roessler s, Jia HL, Budhu a, și colab.: Aunique semnătura genei metastaze permite predicția tumorrelapse la pacienții cu carcinom hepatocelular stadiu incipient. Cancer. 70:10202–10212. 2010. Vezi articol: Google Scholar
	Irizarry RA, Hobbs B, Collin F, și colab:explorare, normalizare, și rezumate ale densității ridicateoligonucleotide matrice date la nivel de sondă. Biostatistică. 4:249–264.2003. Vezi articolul: Google Scholar
	Dai m, Wang P, Boyd AD, și colab.: definițiile Evolvinggene / transcriere modifică semnificativ interpretarea datelor GeneChip. Acizii nucleici Rez. 33: e1752005. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Tusher VG, Tibshirani R și Chu G:analiza semnificația microarrays aplicate la răspunsul ionizingradiation. Proc Natl Acad Sci Statele Unite ale Americii. 98:5116–5121. 2001.Vizualizare Articol: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Huang ZX, Tian HY, Hu ZF, Zhou YB, Zhao Jand Yao KT: GenCLiP: un program software pentru clustering listsby genei literatura de profilare și construirea gene Co-aparițierețele legate de cuvinte cheie personalizate. Bioinformatică BMC. 9:3082008.Vezi articol: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Adhikary S și Eilers M: Transcriptionalregulation și transformarea de proteine Myc. Nat Rev Mol CellBiol. 6:635–645. 2005. Vizualizarearticol : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Detre S, Saclani Jotti G and Dowsett M: A’quickscore’ method for immunohistochemical semiquantitation:validation for oestrogen receptor in breast carcinomas. J ClinPathol. 48:876–878. 1995.
	Früh MPM: EGFR IHC score for selection ofcetuximab treatment: Ready for clinical practice? Transl LungCancer Res. 1:145–146. 2012.
	Hwang LH, Lau LF, Smith DL, și colab.: Buddingyeast Cdc20: o țintă a punctului de control al axului. Știință.279:1041–1044. 1998. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Kops GJ, Weaver BA și Cleveland DW: pe drumul spre cancer: aneuploidie și punctul de control mitotic. Nat RevCancer. 5:773–785. 2005. Vizualizarearticol: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Mondal G, Sengupta s, Panda CK, Gollin SM,Saunders WS și Roychoudhury s: supraexprimarea Cdc20 duce la deteriorarea punctului de control al ansamblului axului și la aneuploidizarea cancerului oral. Carcinogeneza. 28:81–92. 2007. Vezi articol: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Moura IM, Delgado ML, Silva PM, și colab.: ridicat de Expresie CDC20 este asociat cu prognostic slab in carcinom cu celule scuamoase oralsquamous. J Oral Pathol Med. 43:225–231. 2013.Vezi articol: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Wu WJ, Hu KS, Wang DS, et al: CDC20overexpression prezice un prognostic slab pentru pacientii cucancer colorectal. J Transl Med. 11:1422013. Vezi articolul : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Yeong FM, Lim HH, Padmashree CG și SuranaU: ieșire din mitoză în devenire drojdie: inactivarea bifazică a theCdc28-Clb2 mitotic kinazei și rolul cdc20. Celula Mol.5:501–511. 2000. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Huang HC, Shi J, Orth JD și Mitchison TJ:dovada că ieșirea mitotică este o țintă terapeutică mai bună pentru cancer decât ansamblul axului. Celule Canceroase. 16:347–358. 2009. Vezi articol: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Wang Z, Wan L, Zhong J, și colab: Cdc20: apotential roman țintă terapeutică pentru tratamentul cancerului. Curr PharmDes. 19:3210–3214. 2013. Vizualizare Articol: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Bunz F, Dutriaux A, Lengauer C, et al:cerință pentru p53 și p21 pentru a susține arestarea G2 după deteriorarea ADN-ului.Știință. 282:1497–1501. 1998. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Wells J, Boyd KE, Fry CJ, Bartley SM andFarnham PJ: specificitatea genei țintă a membrilor E2F și a proteinei de buzunar în celulele vii. Mol Cell Biol. 20:5797–5807. 2000.Vezi Articolul : Google Scholar