celule circulante
tehnicile necesare pentru obținerea celulelor izolate variază în funcție de tipul de celulă necesar. Celulele circulante, cum ar fi celulele sanguine sau unele celule tumorale, pot fi izolate prin prelevarea unei probe de sânge. Deoarece probele de sânge conțin un amestec de mai multe tipuri de celule diferite, trebuie utilizată o metodă de separare a celulelor în diferite tipuri. Metoda cea mai frecvent utilizată pentru aceasta este citometria în flux, în timpul căreia un analizor automat inspectează un flux îngust de celule. Într-o versiune a acestei tehnici, o lumină este strălucită pe fluxul de celule, iar analizorul detectează lumina reflectată sau fluorescența înainte de a utiliza aceste informații pentru a manevra rapid celulele de interes într-o cameră de colectare.
țesuturi Solideedit
atunci când se ocupă cu țesuturi solide, obținerea de țesut pentru izolarea celulelor poate fi mai dificilă. Surplusul de țesut uman poate fi obținut uneori în momentul intervenției chirurgicale planificate, de exemplu exemplarele de apendice atrial drept sunt adesea excizate și aruncate în timpul intervenției chirurgicale pe cord deschis, cum ar fi chirurgia bypass coronarian. Alte țesuturi, cum ar fi probele de pancreas sau vezică, pot fi luate ca biopsie. Alternativ, țesutul de la animale este obținut frecvent prin sacrificarea animalului.
după ce s-a obținut o probă de țesut, aceasta trebuie înconjurată sau perfuzată de o soluție la o temperatură adecvată care conține sărurile și nutrienții necesari pentru a menține celulele în viață. Acest lucru poate fi realizat prin simpla scufundare a țesutului în soluție sau poate implica aranjamente mai complexe, cum ar fi perfuzia Langendorff. Soluțiile utilizate în mod obișnuit au inclus modificări ale soluției Tyrode sau ale soluției Krebs și Henseleit aceste soluții conțin concentrații precise de electroliți, inclusiv sodiu, potasiu, calciu, magneziu, fosfat, clorură și glucoză. Concentrațiile acestor electroliți trebuie să fie atent echilibrate, acordând atenție presiunii osmotice. Aciditatea soluției trebuie reglată, adesea folosind un tampon de pH, cum ar fi HEPES. Izolarea celulelor din unele țesuturi poate fi îmbunătățită prin oxigenarea soluției. În stadiile inițiale, perfuzarea țesutului cu o soluție care nu conține calciu este utilă în special atunci când se izolează miocitele cardiace, deoarece absența calciului determină separarea discurilor intercalate.
enzimele proteolitice pot fi apoi adăugate la soluție. Enzimele care digeră colagenul (colagenazele) sunt adesea folosite atunci când izolează celulele din inimă sau vezică. De asemenea, pot fi utilizate enzime de uz General care digeră multe tipuri de proteine (proteaze). La izolarea celulelor din țesutul cerebral, pot fi necesare alte enzime care descompun ADN-ul (Dnaaze).
aceste enzime, pe lângă digerarea matricei extracelulare, pot digera și alte proteine importante esențiale pentru funcționarea celulelor de interes. Dacă celulele sunt expuse la aceste enzime pentru prea mult timp, atunci moartea celulelor rezultă, dar dacă nu sunt expuse la enzime suficient de mult timp, atunci digestia matricei extracelulare nu va fi completă. După ce enzimele au fost îndepărtate din țesut prin perfuzarea acestuia cu o a doua soluție care nu conține enzime, celulele pot fi separate sau disociate mecanic. O tehnică simplă pentru disocierea celulelor implică tăierea țesutului în bucăți mici înainte de a agita bucățile într-o soluție folosind o pipetă.
