TEXT

o serie de cancere umane sunt sensibile la stresul mitotic, implicând defecte ale punctului de control. Multe proteine care conțin domenii asociate cu forkhead (FHA) sunt puncte de control ale ciclului celular. Pentru a izola noile gene mitotice ale punctului de control, Scolnick și Halazonetis (2000) au căutat o bază de date EST pentru CDN-uri care conțin domenii FHA. Ei au identificat un ADNc pe care l-au numit CHFR pentru ‘checkpoint with forkhead and ring finger domains’ care codifică o proteină de 664 aminoacizi cu domenii FHA și inelar în interiorul terminusului său N. În cadrul terminalului său C, CHFR conține o regiune bogată în cisteină care nu a prezentat o asemănare semnificativă cu nicio proteină din Baza de date GenBank, dar este foarte conservată între oameni și șoareci. Prin analiza Northern blot, expresia CHFR este omniprezentă în țesuturile umane normale; cu toate acestea, 3 din 8 linii de celule canceroase umane examinate nu conțin ARNm CHFR. Aceleași linii celulare nu au exprimat proteina CHFR, determinată prin testul imunoblot. Scolnick și Halazonetis (2000) au arătat că gena CHFR a fost inactivată din cauza lipsei de exprimare sau a mutației în 4 din 8 linii celulare canceroase umane examinate. Celulele primare normale și liniile celulare tumorale care exprimă chfr de tip sălbatic au prezentat o intrare întârziată în metafază atunci când separarea centrozomilor a fost inhibată de stresul mitotic. În schimb, liniile celulare tumorale care au pierdut funcția CHFR au intrat fără întârziere în metafază. Expresia ectopică a wildtype chfr a restabilit întârzierea ciclului celular și a crescut capacitatea celulelor de a supraviețui stresului mitotic. Astfel, Scolnick și Halazonetis (2000) au concluzionat că CHFR definește un punct de control care întârzie intrarea în metafază ca răspuns la stresul mitotic.

Toyota și colab. (2003) a analizat modelul expresiei CHFR într-un număr de linii celulare de cancer uman și tumori primare. Ei au descoperit reducerea CpG a exprimării CHFR dependentă de metilare în 45% din liniile celulare canceroase, 40% din cancerele colorectale primare, 53% Din adenoamele colorectale și 30% din cancerele primare ale capului și gâtului. Expresia CHFR a fost corelată precis atât cu metilarea CpG, cât și cu deacetilarea histonelor H3 și H4 în regiunea de reglementare bogată în CpG. Celulele cu metilare CHFR au avut un indice mitotic intrinsec ridicat atunci când au fost tratate cu inhibitor de microtubuli. Aceasta înseamnă că celulele în care CHFR a fost inactivat epigenetic au constituit alele de pierdere a funcției pentru controlul punctului de control mitotic. Luate împreună, aceste descoperiri aruncă lumină asupra căii prin care punctul de control mitotic este ocolit în celulele canceroase și sugerează că inactivarea genelor punctului de control este mult mai răspândită decât se bănuia anterior.

Ahel și colab. (2008) a identificat un nou motiv de deget de zinc(PBZ) care leagă poli (ADP-riboză) într-o serie de proteine eucariote implicate în răspunsul la deteriorarea ADN-ului și reglarea punctului de control. Motivul PBZ este, de asemenea, necesar pentru poli posttranslațional(ADP-ribozil)ation. Ahel și colab. (2008) a demonstrat interacțiunea poli (ADP-riboză) cu acest motiv în 2 proteine umane reprezentative, APLF(611035) și CHFR și a arătat că acțiunile CHFR în punctul de control al antefazei sunt abrogate prin mutații în PBZ sau prin inhibarea sintezei poli (ADP-riboză).

expresia proteinei chfr a punctului de control mitotic se pierde în 20 până la 50% din tumorile primare și liniile celulare tumorale. Pentru a explora dacă reglarea în jos a CHFR contribuie direct la tumorigeneză, Yu și colab. (2005) a generat șoareci knockout Chfr. S-a constatat că șoarecii cu deficit de Chfr sunt predispuși la cancer, dezvoltă tumori spontane și au o incidență crescută a tumorilor cutanate după tratamentul cu antracen dimetilbenz(alfa). Deficitul de Chfr a dus la instabilitate cromozomială în fibroblastele embrionare și a reglat kinaza mitotică aurora a (603072), care este frecvent reglată într-o varietate de tumori. Chfr a interacționat fizic cu aurora a și Aurora a omniprezentă atât in vitro, cât și in vivo. Yu și colab. (2005) a concluzionat că CHFR este un supresor tumoral și că asigură stabilitatea cromozomială prin controlul nivelurilor de Expresie ale proteinelor mitotice cheie, cum ar fi aurora A.