aceasta este prima dintr-o serie de trei părți privind transformarea E. coli. Până la sfârșitul acestei ar trebui să fie un expert pe E. coli transformare și pe care tulpinile de a alege pentru diferite aplicații. Dacă sunteți deja un expert, sper că va fi o reîmprospătare plăcută pentru dvs. În ambele cazuri, Vă rugăm să comentați mai jos dacă aveți ceva de adăugat.

utilizarea electricității pentru Transformare

ADN-ul străin poate fi introdus în E. coli competent folosind electroporarea sau transformarea chimică. Când utilizați electroporarea, aplicați un curent electric peste celulă. Se crede că curentul creează „pori” momentan în membranele celulare, care forțează ADN-ul încărcat negativ în celule printr-un efect de tip electroforeză. Pentru a face E. coli electro-competent, spălați bine celulele pentru a îndepărta toate sărurile medii. Acest lucru asigură că încărcarea nu este efectuată prin intermediul mediului. De asemenea, efectuați electroporarea la 0 centicc pentru a minimiza deteriorarea termică a celulelor.

chimicale: ele acționează, de asemenea,

pentru a face celule competente din punct de vedere chimic, omogenizează E. coli într-o soluție CaCl2 la 0 centimetric C. În aceste condiții, se crede că ionul Ca2 + creează pori în membrană, ajută la legarea ADN-ului de membrana celulară și maschează sarcina negativă a ADN-ului. Împreună, acestea ușurează trecerea ADN-ului prin membrana celulară hidrofobă. Forțați ADN-ul în celule prin aplicarea unui șoc termic scurt de 42 de centi C, care are ca rezultat un curent termic care mătură ADN-ul în celule.

avantajele și dezavantajele fiecărei

electroporarea este mai puțin greoaie decât transformarea chimică și, în general, oferă o eficiență de transformare mai mare (măsurată în colonii formate pe micrograme de ADN). Cu toate acestea, este mai scump. Este nevoie de un aparat specializat pentru a livra încărcătura și cuvele pentru a transfera încărcătura în suspensia celulei. Electroporarea este sensibilă la sare – puteți pierde probe prețioase dacă excesul de sare este transportat în cuvă.

personal, prefer transformarea chimică. Deși durează aproximativ o jumătate de oră mai mult, constat că rezultatele sunt mai previzibile și îmi place faptul că un volum mai mare de ADN poate fi adăugat dacă concentrația este prea mică. Nu puteți crește volumul de ADN cu electroporare din cauza riscului de a adăuga prea multă sare în soluție. Deși dezavantajul frecvent citat al transformării chimice este eficiența sa mai mică, acum Puteți cumpăra celule ultra-competente, cum ar fi Xl10-gold de la Stratagene, deci aceasta nu mai este o problemă atât de mare.

articole din această serie:

• electroporarea E. coli vs transformarea chimică (acest articol)
• E. coli Competent: să cumpere sau să nu cumpere?
• alegerea unei tulpini competente de E. coli

publicat inițial la 18 septembrie 2007. Revizuit și actualizat la 11 iulie 2016.