de Circulação cellsEdit
As técnicas necessárias para obter células isoladas variar dependendo do tipo de célula necessária. As células circulantes, tais como as células sanguíneas ou algumas células tumorais, podem ser isoladas através da colheita de uma amostra de sangue. Como as amostras de sangue contêm uma mistura de muitos tipos de células diferentes, deve ser utilizado um método de separação das células em diferentes tipos. O método mais comumente usado para isso é a citometria de fluxo, durante a qual um analisador automatizado inspeciona um fluxo Estreito de células. Numa versão desta técnica, é brilhada uma luz na corrente das células e o analisador detecta a luz reflectida ou a fluorescência antes de utilizar esta informação para manobrar rapidamente as células em causa para uma câmara de recolha.quando se trata de tecidos sólidos, a obtenção de tecido para isolamento celular pode ser mais desafiadora. O excesso de tecido humano às vezes pode ser obtido no momento da cirurgia planejada, por exemplo, espécimes do apêndice Auricular direito são muitas vezes excisados e descartados durante a cirurgia de coração aberto, como cirurgia de bypass da artéria coronária. Outros tecidos, tais como amostras de pâncreas ou bexiga podem ser tomadas como uma biópsia. Alternativamente, o tecido de animais é frequentemente obtido sacrificando o animal.após a obtenção de uma amostra de tecido, esta deve ser cercada ou perfundida por uma solução a uma temperatura adequada que contenha os sais e nutrientes necessários para manter as células vivas. Isto pode ser realizado simplesmente submergindo o tecido na solução, ou pode envolver arranjos mais complexos, como a perfusão de Langendorff. Soluções comumente usadas incluíam modificações da solução de tirode ou Krebs e da solução de Henseleit estas soluções contêm concentrações precisas de eletrólitos incluindo sódio, potássio, cálcio, magnésio, fosfato, cloreto e glicose. As concentrações destes electrólitos devem ser cuidadosamente equilibradas, prestando atenção à pressão osmótica. A acidez da solução deve ser regulada, muitas vezes utilizando um tampão pH como HEPES. O isolamento das células de alguns tecidos pode ser melhorado através da oxigenação da solução. Nos estágios iniciais, perfurar o tecido com uma solução que não contém cálcio é útil particularmente ao isolar miócitos cardíacos, uma vez que a ausência de cálcio causa separação dos discos intercalados.as enzimas proteolíticas podem então ser adicionadas à solução. Enzimas que digerem colagénio (colagenases) são frequentemente utilizadas quando isolam células do coração ou da bexiga. Enzimas de uso geral que digerem muitos tipos de proteínas (proteases) também podem ser usadas. Ao isolar células do tecido cerebral, podem ser necessárias outras enzimas que decomponham o ADN (DNAases).
estas enzimas, além de digerir a matriz extracelular, também podem digerir outras proteínas importantes essenciais para as células de interesse para funcionar. Se as células são expostas a estas enzimas por muito tempo, então os resultados da morte celular, mas se eles não são expostos às enzimas por tempo suficiente, então a digestão da matriz extracelular não será completa. Depois que as enzimas foram removidas do tecido, perfurando-o com uma segunda solução que não contém enzimas, as células podem ser separadas mecanicamente ou dissociadas. Uma técnica simples para dissociar as células envolve cortar o tecido em pedaços pequenos antes de agitar os pedaços numa solução usando uma pipeta.
