contribuiu para a extracção do ADN por Paul Barber

extracção do ADN através de Chelex

Chelex é notório por ser tão instável quanto barato e fácil. Aqui estão algumas dicas para boas amplificações: 1. Às vezes o samples funciona melhor se usado imediatamente, às vezes é melhor esperar de um dia para o outro antes de usá-los. Experimente e encontre o que funciona para a sua espécie. Os resultados podem variar de taxa para taxa.2. Ao fazer as RCP iniciais, faça uma diluição em série do modelo.A quantidade de uma extracção de ADN do Chelex utilizada numa PCR pode ser tão elevada como metade do volume da PCR ou tão baixa como 1 microlitro de uma diluição de 1:10 000. Eu acho que 1 microlitro de um 1: 1 é bom para a maioria das aplicações.3. Se não obtiver amplificações da sua PCR pela primeira vez com um extracto Quelex, repita o vórtice, girar, incubar, vórtice, rodar, sentar durante a noite procedimento descrito acima. Muitas vezes isso fará um trabalho negativo PCR.método com lixívia, esterilizar uma espátula de reagente seca e uma pequena barra magnética.preparar uma suspensão de 5-10% em massa de resina Chelex100 (parte Biorad 143- 3832,100-200 quelex de malha, forma de sódio) e água HPLC esterilizada por UV. A forma mais eficaz de o fazer é tomar um tubo de Falcão estéril de 50 ml, colocar numa escala dentro de um pequeno copo e zero a escala. Em seguida, adicione 5 gramas de Chelex e preencha a marca de 50 ml com água.

a precisão não é crítica. É a técnica estéril.coloque o agitador estéril no tubo e coloque no agitador magnético. Chelex se instala rapidamente de modo que se a suspensão não estiver bem misturada, suas concentrações e resultados serão variáveis. Mantendo o chorume bem misturado, alíquotas 300-500micro litros em tubos eppendorf de 0, 6 ou 1, 6 ml (novamente esterilizados) e tampa imediatamente. Se você tem acesso a um laminar flow hood, que é um bom lugar para fazer tudo isso. Você pode querer limpar a escala e agitador com uma solução de lixívia de 10% e/ou UV esterilizar antes de usar.liga o bloco de aquecimento. Ajustar a 95 ° C. encher buracos com água.

• usando fórceps estéreis (chama sobre Queimador de álcool várias vezes para esterilizar), remova um pequeno pedaço de tecido da sua amostra. Este pedaço de tecido deve ser grande o suficiente para ser visível, mas não tão grande a ponto de ser facilmente visível. Imagine cortar uma seção de 0,2 mm de um grampo padrão. Isto é muito grande. Demasiado tecido Pode inibir as suas reacções.

esterilizar fórceps entre amostras.quando terminar, faça um controlo Quelex negativo mergulhando os seus fórceps esterilizados num tubo de chorume Chelex.amostra de vórtice e chorume de chelex durante 10-15 segundos.

certifique-se de que as tampas são apertadas firmemente antes de começar.

• Spin samples briefly at high speed in a microcentrifuge