de Cenoura (Daucus acordes da garota) é um inverno temperado bienal planta que é cultivada por suas comestíveis raiz principal. É um dos vegetais mais consumidos e produzidos por causa de sua variedade dietética em cor, sabor, fibra e vitamina A, bem como o seu consumo em formas cruas e cozidas. Mais de 20 milhões de toneladas são produzidas anualmente para consumo humano.as práticas de cultura de tecidos têm sido muito populares na clonagem de plantas. O primeiro estudo da cultura de tecidos de cenoura foi relatado em 1939 por Gautheret e Nobecourt. No entanto, Steward et al. e Reinert relatou o primeiro estudo da “embriogênese da cenoura”; eles tentaram crescer as raízes usando a suspensão celular e culturas calosas.a embriogénese somática é um método eficiente para compreender e investigar os aspectos bioquímicos, fisiológicos e genéticos da cultura de células vegetais.muitos estudos sobre a cultura de tecidos de cenoura levaram ao desenvolvimento de um método simples de embriogénese em cenouras. De acordo com o método, o crescimento das culturas de cenoura pode ser induzido apenas removendo o hormônio 2,4-D das culturas de suspensão celular. Agora, a cenoura é muitas vezes usada como um modelo experimental para a análise da embriogênese somática em vários laboratórios em todo o mundo.Material e equipamento necessários para o estabelecimento da cultura materiais esterilizados culturas Calus friáveis de cenoura, não contaminadas e mantidas a 25 ℃.frascos de Erlenmeyer (250 ml), contendo meio de cultura com 5 x 10-8 g/ml 2, 4-D. 5 cilindros de medição (100 ml) com tampas de folha.2 espátulas.25 folhas de folha de alumínio (100 x 100 mm).2 peças de nylon ou peneiras de aço inoxidável com uma porosidade de 250 µm, que podem ser inseridas na abertura dos cilindros de medição.

5 placas de Petri.

Não-materiais esterilizados

• à prova d’água caneta de marcação
• o Rotary agitação máquina
• bico de Bunsen
• 1 frasco de Erlenmeyer (150 ml) contendo 95 % etanol
• Parafilm

Procedimento para a Iniciação e o Estabelecimento da Cultura

1. Pegue os tubos de calo cultura estéril, de boca de todos os 5 tubos de transferência e o calo para a placa de Petri separadamente (5 calos em 5 placas de Petri).tomar um frasco canónico de 250 ml contendo o meio de cultura e 2, 4-D.transfere todas as 5 calli da placa de Petri para 5 frascos canónicos, separadamente.chama / esteriliza a boca dos frascos e cobre-os com a tampa. Proteja a tampa usando parafilm.colocar todos os frascos que contêm a cultura na máquina agitadora rotativa, de intensidade escura ou baixa à luz, a 25 ℃.após 7 dias, transfira os frascos do agitador para uma sala estéril.retirar o parafilme e a cápsula de alumínio de cada frasco e colocar a chama/a boca esterilizada dos frascos.Transferir separadamente a suspensão de cada frasco para um cilindro estéril de 100 ml, passando-a através de um peneiro.
2. deixar o conteúdo assentar durante 10 minutos e depois rejeitar o sobrenadante.transferir os resíduos de células deixados no cilindro de medida para um balão de 250 ml contendo 60 ml de meio fresco.repetir o passo 10 para cada frasco de cultura.põe os cinco frascos no agitador outra vez.após 7 dias, repita o procedimento que fez antes (a partir do passo 6-10). No entanto, desta vez, tomar apenas 1/5 das células residuais como inóculo.
3. repita o procedimento cerca de 3-4 vezes. Ao fazê-lo, apenas células únicas ou pequenos agregados permanecerão na suspensão da cenoura.
4. Para cenoura suspensão de células, o número apropriado de intervalos de células entre 105 e 3 x 105 células/ml ou 100 e 300 mg (peso fresco) de inóculo em um volume de 60 ml de meio fresco contendo mídia e 5×10-8 g/ml, 2,4-D.
5. Uma transferência período de 7 dias, é apropriado para a cenoura para obter células isoladas na cultura de suspensão.

Approximate Schedule of the Culture

Event	Timing (approximate)
Initiation of cell suspension and determination of total cell number and PCV (packed cell volume)	Day 0
First transfer of cultures	Day 8
Fourth transfer of cultures	Day 29

Result

What should you observe while experimenting? Aqui estão alguns pontos a lembrar ao anotar seus resultados.data e duração da experiência.número de culturas e tratamentos aplicados.registar a morfologia e o número de culturas infectadas com um intervalo de três semanas.

determina o PCV (volume de células embaladas) no início e no fim da transferência da cultura.

estimar o número total de células após 3 subculturas, nos dias 1, 2, 4 e 7, e traçar um gráfico em função do tempo.

estuda a relação entre a densidade do inóculo e o padrão de crescimento.

a cultura da suspensão proporciona um benefício sobre outras culturas, uma vez que permite o movimento do tecido nos meios de cultura que facilita a troca gasosa. Além disso, remove qualquer polaridade do gradiente de tecido e nutrientes dentro e no meio.aplicação da cultura de tecidos à cenoura para clonar os taproots.estudar a forma mutante das cenouras.para estudar as respostas fisiológicas da cenoura que podem facilitar a compreensão de outras plantas também.para estudar o crescimento e desenvolvimento da cenoura a partir de uma única célula.

para estudar a resposta ao stress da cenoura que fornece uma visão sobre as respostas de outras plantas também.para gerar centenas de plantas transgénicas a partir da suspensão de células únicas para fins experimentais.Reinert J. and Yeoman M. M. (1982). Plant Cell and Tissue culture: A laboratory manual. Springer-Verlag, Berlin Heidelberg, Newyork.Hardegger M., Shakya R. (2004) Transformation of Carrot. In: Curtis I. S. (eds) Transgenic Crops of the World. Springer, Dordrecht. https://doi.org/10.1007/978-1-4020-2333-0_22. crescimento e divisão das células de cenoura em cultura de suspensão. (1970). Fisiologia Vegetal e celular. DOI: 10.1093 / oxfordjournals.contratacao.a074564.

https://www.atzlabs.com/prodcut-info/C1955-Carrot-…