esta é a primeira de uma série de três partes sobre a transformação de E. coli. No final, você deve ser um especialista em transformação de E. coli e em quais estirpes escolher para diferentes aplicações. Se já é um especialista, espero que seja um refrescador agradável para si. Em ambos os casos, por favor, comente abaixo se tiver alguma coisa a acrescentar.o ADN estranho Pode ser introduzido na E. coli competente através de electroporação ou transformação química. Ao usar a electroporação, aplica-se uma corrente eléctrica através da célula. Pensa-se que a corrente cria poros momentâneos nas membranas celulares, o que força o DNA carregado negativamente nas células por um efeito eletroforese-tipo. Para fazer E. coli electro-competente, lavar cuidadosamente as células para remover todos os sais médios. Isto garante que a carga não é conduzida através do meio. Além disso, executar a eletroporação a 0°C para minimizar os danos de calor para as células.

produtos químicos: eles também trabalham

para fazer células quimicamente competentes, ressuspender E. coli em uma solução de CaCl2 a 0 ° C. Nestas condições, acredita-se que o íon Ca2+ cria poros na membrana, ajuda a ligação do DNA à membrana celular e mascara a carga negativa no DNA. Juntos, estes facilitam a passagem do DNA através da membrana celular hidrofóbica. Forçar o DNA para as células aplicando um curto choque térmico de 42 ° C, O que resulta em uma corrente térmica que varre o DNA para as células.

os prós e contras de cada Electroporação

é menos pesado do que a transformação química e geralmente dá maior eficiência de transformação (medida em colónias formadas por micrograma de ADN). No entanto, é mais caro. Requer um aparelho especializado para entregar a carga e as cuvetas para transferir a carga para a suspensão celular. A electroporação é sensível ao sal – pode perder amostras preciosas se o excesso de sal for transportado para a cuveta.

pessoalmente, prefiro transformação química. Embora demore cerca de meia hora mais, acho que os resultados são mais previsíveis e gosto do facto de se poder adicionar um maior volume de ADN se a concentração for demasiado baixa. Você não pode aumentar o volume de DNA com eletroporação por causa do risco de adicionar muito sal para a solução. Embora a desvantagem comumente citada de transformação química é a sua menor eficiência, você pode agora comprar células ultra-competentes, como o XL10-ouro da Stratagene, então isso não é mais um problema.artigos desta série: E. coli Electroporation vs Chemical Transformation (this article) E. coli Competente E. coli: to Buy or Not To Buy?

originalmente publicada em 18 de setembro de 2007. Revisto e atualizado em 11 de julho de 2016.