Cushman fez a sua primeira aparição profissional na idade de dezoito anos em 8 de abril de 1835, em Boston, do Tremont Teatro. Ela então foi para Nova Orleans, onde ela se apresentou com sucesso por uma temporada, depois que ela voltou para Nova York para atuar sob contrato com o Bowery Theatre. Ela fez críticas fantásticas em Albany, Nova Iorque por sua interpretação de Lady Macbeth.
em 1839, sua irmã Susan Webb Cushman se tornou uma atriz, e com a idade de 14 casou com Nelson Merriman. O marido abandonou-a quando ela estava grávida e a Charlotte cuidou da irmã. As duas irmãs se tornaram famosas por interpretar Romeu e Julieta juntos, com Charlotte interpretando Romeu e Susan interpretando Julieta.em 1843, Cushman envolveu-se romanticamente com Rosalie Sully, filha do artista Thomas Sully. Em 1844, o romance tinha terminado. Ela começou a viajar para o exterior, atuando no teatro, e Sully morreu pouco tempo depois. Ela também era muito próxima da escritora Anne Hampton Brewster por volta de 1844, mas a pressão social do irmão de Brewster significava que eles tinham que se separar. Brewster relembrou o seu tempo idílico juntos em cartas em 1849. Ela eventualmente deixou um retrato de Cushman por Thomas Sully como um legado para a Biblioteca da Filadélfia.
Em 1848, a Cushman conheceu o jornalista, escritor e a tempo parcial, a atriz Matilda Hays. As duas mulheres tornaram-se amigas íntimas e, após um curto período de tempo e alguma correspondência, envolveram-se num caso. Nos próximos dez anos, os dois estarão juntos quase constantemente. Eles tornaram-se conhecidos por se vestirem da mesma forma, e na Europa eram publicamente conhecidos como um casal.em 1849, Cushman retornou aos Estados Unidos e em 1852 decidiu retirar-se do palco. Ela passou a residir com Hays em Roma, Itália. Eles começaram a viver em uma comunidade Americana expatriada lá, composta principalmente dos muitos artistas lésbicas e escultores da época. Cushman usou sua notoriedade para promover as obras da escultora Afro-americana Edmonia Lewis, que havia se tornado uma amiga próxima e cujo trabalho Cushman admirava muito.em 1854, Hays deixou Cushman para o escultor Harriet Hosmer, que lançou uma série de interações ciumentas entre as três mulheres. Hays eventualmente retornou para viver com Cushman, mas as tensões entre ela e Cushman nunca seriam reparadas. No final de 1857, Cushman estava secretamente envolvido com a escultora Emma Stebbins. Uma noite, enquanto o Cushman escrevia um bilhete, o Hays apanhou-a. Suspeitando que o bilhete era para Stebbins, Hays exigiu vê-lo. Embora Cushman afirmasse que a nota não era para Stebbins, ela se recusou a mostrá-la a Hays. A altercação que se seguiu foi explosiva. Hays ficou enfurecido e começou a perseguir Cushman em torno da casa, batendo-lhe com os punhos em todas as oportunidades. A relação terminou imediatamente e Hays se mudou. Ela então processou Cushman, afirmando em sua alegação que ela tinha sacrificado sua própria carreira para apoiar a carreira de Cushman e, portanto, foi devido um certo pagamento. O Cushman pagou-lhe uma quantia desconhecida e as duas mulheres separaram-se para sempre.