3.8 CARD11 deficiência
Caspase recrutamento de domínio 11 (CARD11), também conhecido como caspase recrutamento de domínio de membrana associada a guanilato proteína quinase 1 (CARMA1) é um membro de uma família de membrana associada a guanilato cinases, e funciona como um andaime de proteína que facilita a formação de complexos macromoleculares que integram TCR e BCR-mediada sinalização e promover a ativação da canonical NF-kB via de sinalização (Bertin et al., 2001). É predominantemente expresso em tecidos hematopoiéticos e linfóides, tais como baço, timo e leucócitos periféricos (Bertin et al., 2001). Na sequência da activação do receptor do antigénio PLC-γ, o 4,5-bifosfato de fosfatidilinositol (PIP2) é convertido em inositol 1,4,5-trisphosphate (InsP3) e diacilglicerol (DAG). Este último activa a proteína cinase C (PKC)-β em linfócitos B e PKC-θ em linfócitos T. PKC fosforila a região de linker de CARD11 (Matsumoto et al., 2005; Sommer et al., 2005), inducing conformational changes that enable CARD11 to associate with B cell lymphoma 10 (BCL10) and mucosa-associated lymphoid tissue lymphoma translocation protein 1 (MALT1) (McCully & Pomerantz, 2008). O complexo CARD11-BCL10-MALT1 (CBM) recruta a proteína do factor 6 associado ao receptor do factor de necrose tumoral (TRAF6), que activa o complexo IkB kinase (IKK) que fosforila o inibidor IkBa, resultando na sua fosforilação e ubiquitinação. This releases subunits of NF-kB from IkBa. Dímeros NF-kB podem, assim, translocar para o núcleo e ligar-se a sequências consensuais de genes-alvo, mediando assim a sua transcrição (Fig. 4.2). Em particular, o CARD11 liga-se à subunidade regulamentar IKK-γ (também conhecido como modulador essencial NF-kB, NEMO) (Stilo et al., 2004) e modula a sua poliubiquitinação após estimulação do receptor antigénio (Shambharkar et al., 2007). Esta modificação é essencial para a actividade do IKK kinase (Shambharkar et al., 2007).
Uma função para o CBM complexo em função imune e a homeostase foi demonstrada quando somáticas ganho-de-função de mutações de CARD11, e translocações cromossômicas envolvendo BCL10 e MALT1 foram identificadas em pacientes com difuso de grandes células B linfoma e linfoma MALT (Shaffer, Jovens, & Staudt, 2012). Curiosamente, a introdução de mutações pontuais CARD11 encontradas no linfoma em linfócitos B maduros activados pelo antigénio em ratinhos determinou uma mudança da morte das células B auto-induzida pelo antigénio para a proliferação independente das células T, indicando que CARD11 actua também como modulador da tolerância das células B (Jeelall et al., 2012).mais recentemente, foram identificadas mutações bialélicas de perda de função do CARD11 em doentes com imunodeficiência combinada. Stepensky et al. descreveram uma criança de 13 meses de idade, nascida de pais consanguíneos, que apresentou infecções recorrentes, incluindo P. pneumonia jiroveci, e panhypogamaglobulinemia progressiva (Stepensky et al., 2013). Da mesma forma, Greil et al. relatou o caso de uma mulher de 6 meses nascida de pais consanguíneos, que apresentou pneumonia P. jiroveci, e agamaglobulinemia (Greil et al., 2013). Ambos os doentes tinham um número normal de linfócitos T e B na periferia, com um repertório de TCR policlonal e níveis preservados de TRECs e de círculos de excisão do receptor kappa, indicando que a geração de linfócitos T e B não foi afectada. No entanto, as células B foram imaturas, com uma proporção aumentada de linfócitos B transitórios (Greil et al., 2013; Stepensky et al., 2013). Além disso, tanto os linfócitos B ingénuos como os transitórios expressaram quantidades mais baixas do receptor do factor activador das células B (BAFF-R) (Stepensky et al., 2013). Em ambos os casos, foram identificadas anomalias significativas no compartimento das células T. Em particular, ambos os lactentes apresentaram uma diminuição acentuada do número de células Treg circulantes. A proliferação in vitro de linfócitos T em anti-CD3 solúvel foi abolida. A estimulação dos linfócitos T e B com PMA e ionomicina resultou em degradação defeituosa do IkBa, redução da fosforilação p65 e translocação nuclear, e diminuição da produção de citoquinas em comparação com o observado nos controlos saudáveis. Além disso, linfócitos T activados in vitro com PMA e ionomicina, ou com anti-CD3/CD28 solúveis, produziram quantidades reduzidas de IL-2 e não conseguiram aumentar a expressão de ICOS, CD25 e OX40. Da mesma forma, a estimulação dos linfócitos B com anti-IgM levou à redução da expressão de CD25 e ICAM-1 em comparação com os controlos (Greil et al., 2013; Stepensky et al., 2013). Estes dados eram fortemente indicativos de ativação defeituosa de NF-kB. WES revelou mutações bialélicas em ambos os pacientes, em particular uma mutação sem sentido (Q945*) (Greil et al., 2013), e uma supressão de exon 21 (Stepensky et al., 2013). Introdução da linha celular Q945 * mutação em CARD11-deficiente JPM50.6 Jurkat t resultou na incapacidade de ativar NF-kB e marcadamente defeituosa produção IL – 2 (Greil et al., 2013). Card11−/− ratos e não modulada ratos (portador de um hypomorphic Card11 mutação), mostram um fenótipo semelhante, com seletiva defeito na ativação de NF-kB, diminuição da proliferação e deficiência produção de citocinas em resposta a TCR/BCR estimulação, hipogamaglobulinemia, e pobres, as respostas de anticorpos à T-dependentes e T-independentes de antígenos (Hara et al., 2003; Jun et al., 2003). No geral, estas observações identificam mutações de perda de função Germinal de CARD11 como uma nova causa de imunodeficiência combinada com linfócitos T e B disfuncionais.curiosamente, mutações heterozigóticas de ganho de função germinal em CARD11 também demonstraram causar anomalias das células T e B. Em particular, Snow et al. foram notificados quatro doentes de duas famílias, que apresentaram esplenomegalia e linfocitose das células B. Investigações imunológicas revelaram um aumento do número de células B transitórias tardias policlonais na periferia, um aumento da proliferação de células B in vitro em resposta à estimulação da IgM e um aumento da translocação nuclear da proteína p65 nos linfócitos B E T circulantes (Snow et al., 2012). A acumulação de células B transitórias tardias na periferia não reflectiu o aumento da proliferação nem o aumento da sobrevivência, e foi provavelmente devido ao aumento da produção da medula óssea. O exame histológico dos tecidos linfóides mostrou folículos primários proeminentes, com centros germinais atróficos. Os doentes apresentaram um número reduzido de células B da memória circulante e não conseguiram obter respostas de anticorpos aos antigénios polissacáridos. Além disso, a diferenciação in vitro dos linfócitos B dos doentes em plasmablastos foi prejudicada.a utilização de sequenciação massivamente paralela de ARNm permitiu a identificação de uma mutação heterozigótica E127G do CARD11 em doentes afectados da primeira família. A introdução deste mutante em células JPM50, 6 T Card, com deficiência em CARD11, resultou na ativação constitutiva de NF-kB. O paciente afetado da segunda família foi encontrado para transportar uma mutação heterozigótica G116S CARD11, que já havia sido relatado como sendo um mutante somático ganho de função em um tumor DLBCL (Lenz et al., 2008). Apesar da natureza activadora das mutações CARD11, os linfócitos T dos doentes apresentaram proliferação defeituosa, redução da expressão de CD25 e CD69 e diminuição da produção de IL-2 em resposta à estimulação com anti-CD3/CD28 solúveis. A introdução do mutante E127G em células T normais levou ao aumento da expressão CD69 e da produção IL – 2; Contudo, quando as células foram estimuladas através do CD3/CD28, produziram significativamente menos IL-2 e mostraram uma proliferação reduzida em comparação com os transfectantes de controlo (Snow et al., 2012). Estes dados indicam que as mutações do gain-of-function do card11 heterozigous germline causam sinalização constitutiva NF-kB que promove o aumento da libertação de células B transitórias a partir da medula óssea, a expansão selectiva de células B periféricas transitórias e naïve, associada à incapacidade de manter um conjunto de células B de memória e a indução de anergia das células T. Esta condição também tem sido referida como” expansão da célula B com a síndrome de anergia das células NF-kB e T ” (Snow et al., 2012). Ao todo, estes dados demonstram que tanto as mutações de perda de função como de ganho de função do CARD11 interferem com a função das células T.
