podczas ich starzenia się In vivo, czerwone krwinki (RBC) zwiększają gęstość i stają się mniejsze. Subpopulacje RBC zdefiniowane przez Wiek są zwykle zbierane przez odwirowanie. Jako ulepszoną alternatywę dla takiej separacji wiekowej zaproponowano frakcjonowanie według objętości RBC. Ponieważ kilka danych przedstawionych w literaturze wskazuje na pewne rozbieżności między tymi dwiema metodami, próbki krwi oddzielano albo przez odwirowanie, albo przez odwirowanie przeciwprądowe, a niektóre cechy RBC w ten sposób frakcjonowane były badane. Aktywność enzymu zmniejsza się, gdy gęstość wzrasta lub gdy zmniejsza się objętość (MCV). Jednak porównanie innych cech RBC silnie sugeruje, że te dwie procedury nie prowadzą do zbierania tych samych subpopulacji RBC: na przykład, zawartość hemoglobiny wzrasta, gdy MCV wzrasta, podczas gdy pozostaje stała niezależnie od gęstości RBC. W przypadku komórek znakowanych radioizotopem wykazano 1), że najbardziej gęste RBC są odzyskiwane we wszystkich rozdzielonych wielkością subpopulacjach RBC, mimo że mają tendencję do koncentracji we frakcjach o największym MCV, oraz 2), że najmniejsze RBC są prawie sprawiedliwie rozmieszczone we wszystkich subpopulacjach RBC, niezależnie od ich gęstości, podczas gdy największe RBC są głównie, ale nie wyłącznie, obecne w frakcjach o dużej gęstości. Tak więc frakcjonowanie w zależności od wielkości nie odpowiada separacji w zależności od gęstości. W połączeniu z wynikami eksperymentów in vivo przeprowadzonych na myszach oraz z faktem, że retikulocyty są obecne we wszystkich frakcjach rozdzielonych wielkością, dane te sugerują, że odwirowanie przeciwprądowe może być bardzo wątpliwą procedurą osiągnięcia frakcjonowania RBC w zależności od wieku, a zatem objętość RBC może nie być wiarygodnym kryterium wieku RBC.