dyskusja
w bieżącym badaniu staraliśmy się ocenić, czy CD myszy może mieć wskaźnik niepowodzenia, który przełożył się na obawy dotyczące dobrostanu zwierząt. Użyliśmy czasu na zatrzymanie oddechu jako naszego zastępczego markera dla kryterium AVMA ” czasu potrzebnego do wywołania utraty przytomności.”1 uznaliśmy, że czyste odcięcie kręgosłupa szyjnego powyżej C2 może spowodować zatrzymanie oddechu bez utraty przytomności, ale rażący uraz różnych metod CD wydaje się mało prawdopodobny, aby doprowadzić do tego wyniku.
ustawiamy czas zatrzymania oddechu równy 0 s jako granicę dla określenia udanej eutanazji. Uważamy, że każda metoda eutanazji, po której myszy mogą kontynuować oddychanie (niezależnie od tego, jak długo) wymaga ostrożności. Jeśli wykonywana jest na nieestetyzowanych myszach, niepełna eutanazja pozostawia potencjalnie świadomą mysz doświadczającą ciężkiego urazu, dopóki operator nie będzie mógł powtórzyć procedury lub przejść na inną metodę eutanazji. Całkowite odcięcie śródstopia OUN może pozostawić ciało ogonowe przeciwbólowe, ale uszkodzona tkanka otaczająca i czaszkowa do zmiany może być nadal bolesna.17,25 zwierząt, które mają wystarczającą unerwienie ruchowe, aby kontynuować oddychanie, prawdopodobnie miałoby wystarczającą unerwienie aferentne, aby wystąpić ból.
w naszych pracach pilotażowych niektóre myszy kontynuowały oddychanie nawet przez 15 minut, zanim uśmierciliśmy je pentobarbitalem sodu; myszy te prawdopodobnie mogły nadal oddychać jeszcze dłużej. Gdyby zostali usunięci ze znieczulenia i odzyskali przytomność, z wieloma urazami kręgosłupa, ich cierpienie mogłoby być poważne. Nawet jako dodatek do środków do inhalacji lub wstrzykiwania środków eutanazji, gdyby mysz mogła odzyskać (prawdopodobnie wewnątrz zamrażarki tuszy) po źle wykonanej technice zwichnięcia, potencjał bólu lub dystresu byłby zwiększony. Istotne jest, że każda metoda CD spełniają wymóg, że zasadniczo 100% zwierząt trwale zaprzestać oddychania natychmiast.
Nasz 21% procent nieudanych metod CD, w oparciu o czas do zatrzymania oddechu, był podobny do nieudanego odsetka w raportach myszy, które przeszły CD, ale nie miały widocznych radiologicznie zmian w kręgosłupie szyjki macicy.7,14 autorzy poprzednich badań7, 14 nie wyszczególniają swoich metod radiograficznych. Ponieważ nie zgłoszono żadnych przypadków nieudanej eutanazji,autorzy mogli błędnie zinterpretować myszy z uszkodzeniami szyjki macicy i klatki piersiowej, ale niewystarczające rozproszenie podczas radiografii jako mające tylko uszkodzenia klatki piersiowej.
w świetle wcześniejszych ustaleń,7,14 postulowaliśmy, że wystarczająco silne napięcie stosowane w dowolnym miejscu wzdłuż rdzenia kręgowego może wywołać utratę przytomności i zatrzymanie oddechu, nawet gdy uraz szkieletu był ogonowy do zalecanego obszaru wysokiego szyjki macicy. Nasz 100% nieudany wskaźnik dla grupy dyslokacji klatki piersiowej nie potwierdza tej hipotezy. Użyliśmy zwichnięcia klatki piersiowej u znieczulonych myszy do modelowania niewłaściwej techniki, którą może wykonać źle wyszkolony operator, i Sprawdziliśmy, że prawidłowa technika jest niezbędna do udanej eutanazji myszy.
wytyczne AVMA traktowały CD ogólnie, bez szczegółowego opisu procedury, odzwierciedlając brak porównawczych ocen różnych technik CD. Różne publikacje opisują różne techniki wykonywania zwichnięcia szyjki macicy.8,13,14,16,22 inne, w tym raporty Panelu AVMA, nie rozróżniają różnych technik CD.3,10,12,24 oprócz 3 metod, które wybraliśmy, autorzy określili, że MCD należy wykonać podciągając pod kątem 30°, w nadziei, że proces odontoidowy kręgu C2 uszkodzi rdzeń kręgowy, a tym samym zwiększy skuteczność techniki.7 złamanie tego małego procesu kostnego u myszy jest mało prawdopodobne, aby było widoczne radiologicznie. Co więcej, niektórzy operatorzy opisują ciągnięcie, aż czaszka poczuje się całkowicie niezwiązana z kręgosłupem i jest to metoda, której uczymy w naszej instytucji. Ta praktyka jest rozsądna, gdy CD jest stosowany po innych technikach eutanazji (na przykład, przedawkowanie znieczulenia), ale ta dłuższa, wolniejsza procedura może powodować dodatkowy ból u jeszcze nieprzytomnego zwierzęcia.
radiografia pośmiertna może odegrać rolę w ocenie powodzenia eutanazji po tym wydarzeniu, ale ta technika jest pracochłonna i musi być interpretowana ostrożnie. Obawialiśmy się, że bez dostatecznego rozproszenia uwagi, nienaruszone więzadła mogą utrzymać czaszkę wystarczająco blisko kręgosłupa, aby w niektórych przypadkach zamaskować udane zwichnięcie. Okazało się, że pośmiertne zdjęcia rentgenowskie najłatwiej zinterpretować, gdy zastosowano napięcie w celu rozciągnięcia tuszy, ale zrobienie tego spowodowało podejrzaną lukę między kręgami C2 i C3, która wymagała dokładnej oceny. Negatywne kontrole tylko CO2 (Rysunek 2) były pomocne w odróżnianiu zmian od normalnych. Kiedy ustaliliśmy czas zatrzymania oddechu jako nasz „złoty standard”, radiografia szyjki macicy wykazała dodatnią wartość prognostyczną wynoszącą zaledwie 71%. Dlatego, gdy radiografia jest używana jako narzędzie kontroli jakości lub oceny umiejętności, niektóre przypadki nieudanej eutanazji zostaną pominięte.
podczas gdy wszystkie nieudane eutanazje miały uszkodzenia klatki piersiowej lub lędźwiowej (lub oba), tak samo jak 50 z 64 udanych eutanazji. Stwierdzamy, że obecność zmian piersiowych lub lędźwiowych nie jest diagnostyką złej techniki. Ponadto żadne z 11 zwierząt z CD, które przeszły do punktu końcowego 180-s, nie miało zauważalnych zmian w szyjce macicy. W przeciwieństwie do tego, 63 Z 64 udanych przypadków CD tak się stało, a mysz, która nie miała zauważalnej zmiany szyjki macicy (Rysunek 3), może odzwierciedlać błędną diagnozę subtelnej zmiany lub służyć jako dowód na to, że wystarczająco ciężki dystalny uraz rdzenia kręgowego może spowodować zatrzymanie oddechu; rzeczywiście, 2 myszy w grupie dyslokacji klatki piersiowej ostatecznie osiągnęły zatrzymanie oddechu, zanim można było zastosować inną technikę. Ponadto 6 myszy z CD poddano nieudanej eutanazji, ale zmarło przed punktem końcowym 180-s, mimo że radiografia wykazała zmiany w szyjce macicy u 5 z tych myszy. Błędna diagnoza radiologiczna jest możliwa, podobnie jak możliwość, że pośrednie obrażenia, chociaż widoczne radiologicznie, mogą ostatecznie być śmiertelne, ale są zbyt długotrwałe, aby zakwalifikować wynik jako ” dobrą śmierć.”
uznajemy pewne ograniczenia w naszych badaniach. Nie wykonaliśmy wszystkich opisanych lub możliwych wariantów CD u myszy. Nie próbowaliśmy używać fal mózgowych ani innych pomiarów do analizy funkcji mózgu po zwichnięciu. Nie usunęliśmy oddychających zwierząt z maski znieczulającej, aby ocenić możliwość powrotu do świadomości. Obecność czasu do zatrzymania oddechu przekraczającego 0 s sugeruje co najmniej minimalną czynność mózgu w stanie nienaruszonym, stan, który wydaje się niezgodny z „dobrą śmiercią”; nie przedstawiamy danych na temat jakości śmierci, gdy czas do zatrzymania oddechu wynosi 0 s.
efekt operatora, który zauważyliśmy, wymaga dalszych badań. W przypadku tylko 2 operatorów efekt nie mógł być przypisany do różnic w wieku operatora, treningu, sile lub jakimkolwiek innym czynniku. Całkiem możliwe, że inni operatorzy różniliby się wskaźnikami sukcesu. Dalsze badanie mające na celu pełniejsze zbadanie efektu operatora musi uwzględniać wiedzę różnych operatorów o tym, że byli oni punktowani oraz wpływ, jaki ta wiedza może mieć na ich wyniki. Obawy budzi fakt, że w 8,1% przypadków operator nadal nie odniósł sukcesu.
ponadto diagnostyka radiologiczna może podlegać efektowi interpretacyjnemu. Bez „złotego standardu” dla prawidłowej diagnozy radiologicznej (na przykład brak widocznej zmiany w udanej eutanazji może oznaczać, że złamanie kręgosłupa lub zwichnięcie w tym miejscu nie jest konieczne do szybkiej śmierci, lub że radiograf przegapił zmianę), nie moglibyśmy zbadać możliwości efektu interpretera. Pilotażowe prace nad zdjęciami rentgenowskimi wykazały skromne rozbieżności w diagnozie wśród kilku lekarzy weterynarii, którzy czytają zdjęcia rentgenowskie.
Wreszcie wszystkie myszy zostały zwichnięte pod znieczuleniem izofluranem z powodów humanitarnych, ponieważ wiedzieliśmy, że będziemy utrzymywać nieudane przypadki przy życiu i oddychać przez kilka minut, zamiast powtarzać procedurę natychmiast. Ponieważ znieczulający zniósł napięcie mięśniowe, metoda ta może modelować pośmiertne CD lepiej niż modeluje CD jako jedyną metodę eutanazji. Ponieważ jest to środek hamujący oddech, izofluran może przyspieszyć zatrzymanie oddechu w niektórych pośrednich przypadkach. Jako środek neuroprotekcyjny, izofluran może opóźnić śmierć. Tak czy inaczej, zastosowanie izofluranu uniemożliwiło nam ocenę potencjalnej świadomości w nieudanych przypadkach bez oddychania, ponieważ nigdy nie odstawiliśmy ich od środka znieczulającego, aby dokonać tej oceny.
wnioskujemy, że 3 metody CD mogą prowadzić do nieudanej eutanazji, w której myszy kontynuują oddychanie po próbie zwichnięcia. Nie możemy stwierdzić, czy świadomość lub percepcja bólu towarzyszą temu rezultatowi. Praktyka na znieczulonych myszach może być użyteczną metodą treningową, z czasem do zatrzymania oddechu ustawionym jako miara sukcesu stażysty. Radiografia jest pracochłonnym narzędziem oceny umiejętności, które wydaje się nie być bardziej pouczające niż obserwacja praktyki na znieczulonych myszach. Jeśli dodatkowe badania powielają nasze ustalenia, zalecane praktyki będą musiały się zmienić, czy zakazać CD nieestetyzowanych myszy, zidentyfikować metodę CD z wyższym wskaźnikiem sukcesu, lub podkreślić, że myszy muszą być uważnie obserwowani po CD, a jeśli nadal oddychają (co może być trudne do ustalenia, biorąc pod uwagę wyładowanie motoryczne, które często następuje po CD), natychmiast leczone tą samą lub alternatywną metodą eutanazji.
