TEXT

wiele ludzkich nowotworów jest wrażliwych na stres mitotyczny, co oznacza wady punktu kontrolnego. Wiele białek, które zawierają domeny związane z forkhead (FHA) są punktami kontrolnymi cyklu komórkowego. Aby wyizolować nowe mitotyczne geny punktów kontrolnych, Scolnick i Halazonetis (2000) przeszukali bazę danych EST w poszukiwaniu cDNA zawierających domeny FHA. Zidentyfikowali cDNA nazwali CHFR dla „punktu kontrolnego z domenami forkhead i ring finger”, który koduje 664-aminokwasowe białko z domenami FHA i ring finger w jego n końcówce. W obrębie końca C, CHFR zawiera region bogaty w cysteinę, który nie wykazuje znaczącego podobieństwa do żadnego białka w bazie danych GenBank, ale jest wysoce zachowany między ludźmi a myszami. Według analizy Northern blot ekspresja CHFR jest wszechobecna w normalnych tkankach ludzkich; jednak 3 z 8 badanych linii ludzkich komórek nowotworowych nie zawierały CHFR mRNA. Te same linie komórkowe nie wykazywały ekspresji białka CHFR, oznaczonego metodą immunoblot. Scolnick i Halazonetis (2000) wykazali, że Gen CHFR został inaktywowany z powodu braku ekspresji lub mutacji w 4 z 8 badanych ludzkich linii komórek nowotworowych. Normalne komórki pierwotne i linie komórek nowotworowych wyrażające dziki Typ CHFR wykazywały opóźnione wejście do metafazy, gdy separacja centrosomów była hamowana przez stres mitotyczny. Natomiast linie komórkowe guza, które utraciły funkcję CHFR, weszły bezzwłocznie do metafazy. Ektopowa ekspresja chfr typu dzikiego przywróciła opóźnienie cyklu komórkowego i zwiększyła zdolność komórek do przetrwania stresu mitotycznego. Tak więc Scolnick i Halazonetis (2000) doszli do wniosku, że CHFR definiuje punkt kontrolny opóźniający wejście do metafazy w odpowiedzi na stres mitotyczny.

(2003) analizował wzór ekspresji CHFR w szeregu ludzkich linii komórek nowotworowych i guzów pierwotnych. Stwierdzono, że zależne od metylacji CPG wyciszanie ekspresji CHFR w 45% linii komórek nowotworowych, 40% pierwotnych nowotworów jelita grubego, 53% gruczolaków jelita grubego i 30% pierwotnych nowotworów głowy i szyi. Ekspresja CHFR była dokładnie skorelowana zarówno z metylacją CpG, jak i deacetylacją histonów H3 i H4 w regionie regulacyjnym bogatym w CPG. Komórki z metylacją CHFR miały wewnętrzny wysoki indeks mitotyczny, gdy były traktowane inhibitorem mikrotubul. Oznacza to, że komórki, w których inaktywowano epigenetycznie CHFR, stanowiły allele utraty funkcji dla mitotycznej kontroli punktu kontrolnego. Zebrane razem, te odkrycia rzucają światło na drogę, przez którą mitotyczny punkt kontrolny jest omijany w komórkach nowotworowych i sugerują, że inaktywacja genów punktu kontrolnego jest znacznie bardziej rozpowszechniona niż wcześniej podejrzewano.

(2008) zidentyfikował nowy motyw Poli (ADP-ryboza) wiążący palec cynkowy (PBZ) w wielu białkach eukariotycznych biorących udział w odpowiedzi na uszkodzenia DNA i regulacji punktu kontrolnego. Motyw PBZ jest również wymagany dla posttranslacyjnych Poli (ADP-rybozyl)ation. Ahel i in. (2008) wykazał interakcję Poli(ADP-rybozy) z tym motywem w 2 reprezentatywnych białkach ludzkich, APLF (611035) i CHFR, i wykazał, że działanie CHFR w punkcie kontrolnym antefazy jest anulowane przez mutacje w PBZ lub przez hamowanie syntezy Poli(ADP-rybozy).

ekspresja mitotycznego białka chfr jest tracona w 20 do 50% guzów pierwotnych i linii komórkowych guza. Aby zbadać, czy downregulation CHFR przyczynia się bezpośrednio do tumorigenezy, YU et al. (2005) wygenerował myszy nokautujące Chfr. Stwierdzono, że myszy z niedoborem Chfr są podatne na raka, rozwijają spontaniczne guzy i mają zwiększoną częstość występowania nowotworów skóry po leczeniu dimetylobenzem(Alfa)antracenem. Niedobór Chfr doprowadził do niestabilności chromosomalnej w fibroblastach embrionalnych i regulował kinazę mitotyczną aurora A (603072), która jest często regulowana w różnych guzach. Chfr fizycznie oddziaływała z Aurorą a i ubikwitynowaną Aurorą a zarówno in vitro, jak i In vivo. Yu et al. (2005) stwierdził, że CHFR jest supresorem nowotworu i zapewnia stabilność chromosomów poprzez kontrolowanie poziomów ekspresji kluczowych białek mitotycznych, takich jak aurora A.