Tło& cele: celiakię można leczyć i potencjalnie wyleczyć przywracając tolerancję komórek T na gliadynę. Badaliśmy Bezpieczeństwo i skuteczność ujemnie naładowanych 500-nm nanocząstek Poli (laktyd-Ko-glikolidu) enkapsulujących białko gliadynowe (TIMP-GLIA) w 3 mysich modelach celiakii. Wykazano, że wychwyt tych nanocząstek przez komórki prezentujące antygen indukuje tolerancję immunologiczną w innych zwierzęcych modelach chorób autoimmunologicznych.
metody: wykonaliśmy badania na myszach C57BL/6, RAG1-/- (C57BL/6) oraz HLA-DQ8, hucd4 transgenicznych AB0 NOD. Myszom podawano 1 lub 2 zastrzyki z żyłą ogonową TIMP-GLIA lub nanocząstek kontrolnych. Niektórym myszom podawano śródskórne zastrzyki gliadyny w kompletnym adiuwancie Freunda (immunizacja) lub rozpuszczalnej gliadyny lub albuminy jaja (wyzwanie dla ucha). Myszy RAG-/- otrzymały zastrzyki dootrzewnowe komórek T CD4 + CD62L-CD44hi od myszy C57BL/6 immunizowanych gliadyną i karmiono je dietą opartą na AIN-76A zawierającą gluten pszenny (wyzwanie doustne) lub bez glutenu. Komórki śledziony lub węzłów chłonnych analizowano w testach proliferacji i wydzielania cytokin lub za pomocą cytometrii przepływowej, sekwencjonowania RNA lub ilościowej reakcji łańcuchowej polimerazy w czasie rzeczywistym. Próbki surowicy analizowano za pomocą enzymatycznego testu immunosorpcyjnego przeciwciała gliadynowego, a tkanki jelitowe analizowano za pomocą histologii. Komórki jednojądrzaste ludzkiej krwi obwodowej lub niedojrzałe komórki dendrytyczne pochodzące z jednojądrzastych komórek ludzkiej krwi obwodowej hodowano w pożywce zawierającej TIMP-glia, przeciwciało anty-CD3 lub lipopolisacharyd (kontrole) i analizowano w testach proliferacji i wydzielania cytokin lub cytometrii przepływowej. Całą krew lub osocze zdrowych ochotników inkubowano z TIMP-GLIA, analizowano hemolizę, aktywację i agregację płytek krwi oraz aktywację lub koagulację dopełniacza.
wyniki: TIMP-GLIA nie zwiększał markerów dojrzewania hodowanych ludzkich komórek dendrytycznych ani nie indukował aktywacji komórek T u pacjentów z aktywną lub leczoną celiakią. W nadwrażliwości typu opóźnionego (model 1), transgenicznej HLA-DQ8 (model 2) i enteropatii komórek T pamięci gliadynowej (model 3) w modelach celiakii, dożylne iniekcje TIMP-GLIA znacząco zmniejszały proliferację komórek T gliadynowych (w modelach 1 i 2), wydzielanie cytokin zapalnych (w modelach 1, 2 i 3), krążące gliadynowe IgG/IgG2c (w modelach 1 i 2), obrzęk ucha (w modelu 1), enteropatię glutenozależną (w modelach 3) oraz utrata masy ciała (w modelu 3). W modelu 1 wykazano, że efekty są zależne od dawki. Splenocyty z transgenicznych myszy HLA-DQ8, którym podawano nanocząstki TIMP-glia, ale nie kontrolujące nanocząstki, miały zwiększone poziomy sygnatur ekspresji FOXP3 i genów związanych z indukcją tolerancji.
wnioski: u myszy z wrażliwością na gliadynę wstrzyknięcie nanocząstek TIMP-glia spowodowało brak reakcji na gliadynę i zmniejszenie markerów stanu zapalnego i enteropatii. Strategia ta może być opracowana w leczeniu celiakii.
