ponieważ immunoterapia staje się coraz ważniejsza w leczeniu różnych nowotworów, monitorowanie odpowiedzi immunologicznej w celu odzwierciedlenia skuteczności terapii staje się również coraz ważniejsze. Wcześniej odpowiedzi humoralne specyficzne dla antygenu nowotworowego u pacjentów otrzymujących szczepionki przeciwko chłoniakowi grudkowemu o niskim stopniu złośliwości (FL) korelowały z wynikami klinicznymi, w tym regresją guza, remisją molekularną, przeżywalnością bez progresji (PFS) i całkowitym przeżyciem (OS). Natomiast odpowiedzi immunologiczne limfocytów T były trudne do potwierdzenia. Testy proliferacji komórek T, głównie, mierzą odpowiedzi limfocytów T CD4; podczas gdy limfocyty T CD8 mogą być ważnymi efektorami generowanymi przez immunoterapię. Jednakże testy przeznaczone do pomiaru limfocytów T CD8, tj. testy CTL uwalniania chromu oraz ELISPOT IFN-γ i wewnątrzkomórkowe testy cytometrii przepływowej są trudne do odtworzenia. Aby rozwiązać ten problem, PBL uzyskano od pacjentów z FL, krioprezerwowano i rozmrażano, a następnie wykorzystano do zaprojektowania znormalizowanej metody wykrywania wewnątrzkomórkowego IFN-γ za pomocą cytometrii przepływowej. Połączony bodziec rozpuszczalnych przeciwciał anty-CD3 i anty-CD28 zapewnia silną stymulację, zazwyczaj około 5% prawidłowych komórek T PBL CD8+ reaguje. Wykorzystując panel napromieniowanych linii komórek chłoniaka z limfocytów B jako stymulatory, wykazaliśmy, że średnio 1-2% tych komórek T jest zdolnych do uzyskania odpowiedzi w tym teście. Co zaskakujące, limfocyty T PBL CD8 + u kilku pacjentów z FL były bardziej wrażliwe na połączoną stymulację anty-CD3 i anty-CD28, jak również na allo-stymulację, odpowiednio 15 – 22% i 2 – 6%. Tej odpowiedzi towarzyszyła powierzchniowa ekspresja CD107, zastępczego markera degranulacji CTL, w tej samej populacji komórek, co wykazano za pomocą wielokolorowej cytometrii przepływowej. Zarówno odpowiedź IFN-γ, jak i CD107 były hamowane przez przeciwciało anty-klasy i, W6/32, co sugeruje odpowiedź zależną od receptora limfocytów T klasy I. Ponadto, w późniejszych punktach czasowych, te komórki T również regulują CD137 na swojej powierzchni. Ta aktywacyjna cząsteczka jest regulowana na limfocytach T CD8 w odpowiedzi na specyficzne rozpoznanie antygenu i dostarcza komórkom anty-apoptotyczny sygnał. Podsumowując, kompetencję immunologiczną limfocytów T CD8 wyizolowanych od pacjentów z FL można ocenić poprzez allo-stymulację przez Panel linii komórek chłoniaka z limfocytów B. Co ważniejsze, korelacja przez cytometrię przepływową 3 niezależnych wskaźników odpowiedzi (IFN-γ, CD107 i CD137) w obrębie pojedynczych populacji komórek zarówno do allo-stymulacji, jak i do konkretnego celu, może prowadzić do lepszego zrozumienia roli komórek T w odpowiedzi immunologicznej. Ostatecznie, te odpowiedzi będą musiały być potwierdzone wynikami pacjentów w badaniach klinicznych szczepionek w chłoniaku.