klonowanie cDNA

odwrotna transkrypcja RNA do komplementarnego DNA (cDNA) jest pierwszym krokiem w wielu biologicznych procesach molekularnych, w tym badaniach ekspresji genów z wykorzystaniem PCR w czasie rzeczywistym, klonowania genów i tworzenia bibliotek cDNA.

biblioteka cDNA jest zbiorem sklonowanych sekwencji DNA, które są komplementarne do mRNA, który został wyekstrahowany z danej komórki lub tkanki. Biblioteka reprezentuje tylko transkrybowane sekwencje w określonej próbce i może dostarczyć wielu informacji na temat tożsamości i funkcjonalności określonych genów. biblioteki cDNA dostarczają również wglądu w obfitość RNA wytwarzanego w próbce, ponieważ im więcej mRNA jest wyrażane, tym więcej cDNA będzie wytwarzane.

przy konstruowaniu bibliotek cDNA istotne jest, aby klony cDNA były reprezentatywne dla pierwotnej populacji RNA, zarówno pod względem ich pełnej długości, jak i względnej obfitości. Oznacza to, że wybór odwrotnej transkryptazy zastosowanej w tym etapie ma kluczowe znaczenie. Podczas klonowania cDNA i tworzenia bibliotek cDNA polecamy nasze produkty UltraScript i UltraScript 2.0. Te wysoce aktywne i termostabilne enzymy są zdolne do syntezy produktu cDNA o większej długości, nawet z ograniczonymi ilościami RNA, RNA wyrażonymi w niskich poziomach lub zawierającymi wysoki stopień struktury wtórnej.