komórki krążące
techniki wymagane do uzyskania wyizolowanych komórek różnią się w zależności od wymaganego typu komórki. Krążące komórki, takie jak komórki krwi lub niektóre komórki nowotworowe, można wyizolować poprzez pobranie próbki krwi. Ponieważ próbki krwi zawierają mieszaninę wielu różnych typów komórek, należy zastosować metodę rozdzielania komórek na różne typy. Najczęściej stosowaną metodą jest cytometria przepływowa, podczas której automatyczny analizator kontroluje wąski strumień komórek. W jednej z wersji tej techniki światło świeci na strumień komórek, a analizator wykrywa odbite światło lub fluorescencję przed użyciem tej informacji do szybkiego manewrowania interesującymi komórkami do komory zbierania.
tkanki Stałeedytuj
w przypadku tkanek stałych uzyskanie tkanki do izolacji komórkowej może być trudniejsze. Nadmiar tkanki ludzkiej można czasami uzyskać w czasie planowanego zabiegu, na przykład próbki prawego wyrostka przedsionkowego są często wycinane i odrzucane podczas operacji na otwartym sercu, takich jak operacja pomostowania tętnic wieńcowych. Inne tkanki, takie jak próbki trzustki lub pęcherza moczowego mogą być pobierane jako biopsja. Alternatywnie, tkanki ze zwierząt często uzyskuje się przez ofiarowanie zwierzęcia.
Po pobraniu próbki tkankowej musi ona być otoczona lub perfuzowana roztworem w odpowiedniej temperaturze zawierającym Sole i składniki odżywcze niezbędne do utrzymania komórek przy życiu. Można to wykonać po prostu zanurzając tkankę w roztworze, lub może obejmować bardziej złożone układy, takie jak perfuzja Langendorffa. Powszechnie stosowane roztwory obejmowały modyfikacje roztworu Tyrode ’ a lub Krebsa i roztworu Henseleita roztwory te zawierają precyzyjne stężenia elektrolitów, w tym sodu, potasu, wapnia, magnezu, fosforanów, chlorków i glukozy. Stężenia tych elektrolitów muszą być starannie zrównoważone, zwracając uwagę na ciśnienie osmotyczne. Kwasowość roztworu musi być regulowana, często przy użyciu bufora pH, takiego jak HEPES. Izolację komórek z niektórych tkanek można poprawić poprzez dotlenienie roztworu. W początkowych stadiach perfuzja tkanki roztworem, który nie zawiera wapnia, jest przydatna szczególnie podczas izolowania miocytów serca, ponieważ brak wapnia powoduje oddzielenie międzykalowanych dysków.
enzymy proteolityczne można następnie dodać do roztworu. Enzymy trawiące kolagen (kolagenazy) są często stosowane podczas izolowania komórek z serca lub pęcherza moczowego. Można również stosować enzymy ogólnego przeznaczenia, które trawią wiele rodzajów białka (proteazy). Podczas izolowania komórek z tkanki mózgowej mogą być wymagane inne enzymy, które rozkładają DNA (Dnaazy).
enzymy te, oprócz trawienia macierzy zewnątrzkomórkowej, mogą również trawić inne ważne białka niezbędne do funkcjonowania komórek. Jeśli komórki są narażone na działanie tych enzymów zbyt długo, to wyniki śmierci komórek, ale jeśli nie są narażone na działanie enzymów wystarczająco długo, to trawienie macierzy zewnątrzkomórkowej nie zostanie zakończone. Po usunięciu enzymów z tkanki przez perfuzję drugiego roztworu, który nie zawiera enzymów, komórki mogą być mechanicznie oddzielone lub dysocjowane. Prosta technika dysocjacji komórek polega na cięciu tkanki na małe kawałki przed mieszaniem kawałków w roztworze za pomocą pipety.
