Streszczenie
Tło. Ekspresja ludzkiego CD133 (ludzkiej promininy-1) w komórkach nowotworowych została postulowana jako marker macierzystości i jest uważana za przypuszczalny marker komórek macierzystych raka (CSCS). Zaprojektowaliśmy badanie, aby opisać wzór ekspresji CD133 w skórze normalnej i w nabłonkowych nowotworach skóry. Metody. Porównano immunohistochemiczną ekspresję CD133 czterdziestu trzech nowotworów eksrynowych i apokrynowych z ekspresją obserwowaną w innych guzach nabłonkowych skóry. Ponadto, do wykrycia ekspresji CD133 użyto cytometrii przepływowej czterech nowotworów skóry nabłonka, w tym jednego porowakoraka. Wyniki. Obserwowano immunoreaktywność CD133 na wierzchołku lub na apicolateralnej powierzchni komórek tworzących struktury gruczołowe. Komórki z obszarów stałych nowotworów łagodnych lub złośliwych nie były wybarwione. Komórki hodowlane porokarcinoma wykazały 22% komórek cd133 dodatnich przy użyciu cytometrii przepływowej, podczas gdy hodowle raka płaskonabłonkowego zawierały mniej niż 0,1%. Wnioski. Obserwacje te wskazują, że CD133 jest specyficznym markerem różnicowania gruczołowego, który mógłby zostać włączony do panelu diagnostycznego nowotworów skóry z możliwym różnicowaniem ekkrynnym lub apokrynowym. Jednakże użycie ekspresji CD133 jako markera CSCs powinno być interpretowane z ostrożnością w doświadczeniach skóry.
1. Wprowadzenie
w ciągu ostatnich kilku lat odnotowano coraz więcej dowodów potwierdzających tezę, że zdolność do podtrzymywania powstawania i wzrostu nowotworu znajduje się wyłącznie w małej populacji komórek zwanych komórkami macierzystymi raka (CSCS). Poszukiwanie markery które demonstrują komórki macierzyste-jak fenotyp tych komórek inicjujących nowotworu jest aktywnym polem dochodzenie, i kilka komórki macierzyste markery zostały opisane niedawno w guzach skóry .
CD133 jest ludzkim homologem mysiej promininy-1, glikoproteiny powierzchniowej o pięciu domenach przezbłonowych, która otrzymała znaczną uwagę ze względu na jej ekspresję ograniczoną do różnych subpopulacji somatycznych komórek macierzystych . Ten antygen powierzchniowy został odkryty jako cel przeciwciała monoklonalnego zdefiniowanego jako Mab AC133, marker wyrażony przez subpopulację CD34 dodatnich hematopoetycznych komórek macierzystych pochodzących z wątroby i szpiku kostnego ludzkiego płodu . Następnie CD133 wykryto w różnych ludzkich prawidłowych tkankach, w tym nerkach, prostacie, mózgu i trzustce, i stwierdzono, że jest specyficznie związany z microvilli i innymi występami błon osoczowych . Co więcej, antygen ten został również zidentyfikowany w nowotworach hematologicznych i kilku stałych nowotworów ludzkich, w tym guzów glejowych, raka prostaty, raka nerki, raka wątroby, raka jelita grubego i czerniaka złośliwego . Celem wielu z tych badań było określenie istnienia CSCs, zdefiniowanej jako mała grupa komórek nowotworowych, które mają zdolność do samoodnawiania, inicjacji guza i utrzymania wzrostu guza. Przeciwciała rutynowo stosowane do oczyszczania komórek AC133-dodatnich celują w słabo scharakteryzowane glikozylowane epitopy o niepewnej swoistości. Chociaż aktywność funkcjonalna CD133 jest nadal kontrowersyjna, a jego fizjologiczna funkcja nie jest jeszcze określona, staje się jasne, że to białko powierzchniowe komórki jest unikalnym markerem zarówno wypukłości błony plazmatycznej, jak i mikrodomen błonowych . Zasugerowano, że w tej lokalizacji komórkowej CD133 może działać jako regulator składu lipidów błonowych lub może uczestniczyć w mechanizmach biegunowości i migracji komórek .
w poprzednich badaniach, które donoszą o IMMUNOHISTOCHEMICZNYM zabarwieniu cd133 ludzkiego nabłonka gruczołowego, takiego jak gruczoły ślinowe, gruczoły łzowe, kanały trzustkowe, gruczoły endokerwialne i gruczoły potowe, opisano specyficzny wzór ekspresji CD133 . W tych nabłonkach wykazano, że CD133 jest zlokalizowany w występach błony plazmatycznej w wierzchołkowych obszarach spolaryzowanych komórek. Podobny cd133 wierzchołkowy cytoplazmatyczny wzór barwienia komórek otaczających światło zaobserwowano również w rakach jajnika, okrężnicy lub trzustki .
odkrycie komórek gruczołu potowego barwiących przeciwciało CD133 skłoniło nas do zaprojektowania badania, które obecnie raportujemy, w celu oceny ekspresji CD133 w eksrynach skórnych i nowotworach apokrynowych.
2. Materiały i metody
2.1. Przypadki
retrospektywne wyszukiwanie pobrano 43 wcześniej zdiagnozowane eccrine skóry i apokrynowych guzów adnexal z plików wydziału patologii Szpitala Uniwersyteckiego w Albacete. Otrzymano szkiełka szklane, bloki parafinowe i raporty histopatologiczne ze wszystkich przypadków. Slides were reviewed and adnexal skin tumors were diagnosed according to the criteria of the World Health Organization (WHO) classification , including eccrine spiradenoma (), nodular hidradenoma (), eccrine hidrocystoma (), poroma (), porocarcinoma (), syringocystadenoma papilliferum (), chondroid syringoma (), syringoma (), cylindroma (), hidradenoma papilliferum (), apocrine hidrocystoma (), microcystic adnexal carcinoma (), and apocrine carcinoma (). W badaniu tym uwzględniono również przypadki raka podstawnokomórkowego () i raka płaskonabłonkowego () w celu porównania wyników uzyskanych w tych nowotworach z wynikami uzyskanymi w nowotworach gruczołów potowych. Aby ocenić ekspresję CD133 w skórze normalnej, przeanalizowaliśmy skórę z różnych obszarów uzyskanych z marginesów sześciu chirurgicznie wyciętych guzów skóry i z trzech autopsji.
do hodowli komórek raka skóry uzyskano siedem próbek z ludzkich guzów skóry, które odpowiadały jednemu eksrynowemu porowakowi i sześciu rakom płaskonabłonkowym. Świeżą tkankę z tych przypadków włączono do zmodyfikowanego ośrodka Eagle ’ a Dulbecco (Dmem), uzupełnionego penicyliną/streptomycyną i fungizonem, bezpośrednio po resekcji chirurgicznej.
2.2. Immunohistochemia
formalina stała, osadzona parafiną tkanka wycinano, deparaffinizowano w ksyleniei ponownie nawodniono w stopniowanej serii etanolu. Endogenna aktywność peroksydazy została zablokowana 3% H2O2 przez 5 minut. Szkiełka poddano działaniu indukowanego termicznie epitopu i poddano je immunosupresji trzema różnymi przeciwciałami monoklonalnymi anty-CD133: Przeciwciało monoklonalne AC133, przeciwciało monoklonalne 293c3 i przeciwciało monoklonalne AC141 (wszystkie z Miltenyi Biotec, Niemcy). Przeciwciała testowano w różnych rozcieńczeniach i czasach inkubacji. Wykrywanie CD133 przeprowadzono przy użyciu systemu EnVision-HRP (Dako, Glostrup, Dania) W platformie Autostainer DakoCytomation, zgodnie z instrukcjami producenta. Jako chromogen stosowano diaminobenzydynę (DAB, DAKO, Glostrup, Dania). Z trzech różnych badanych przeciwciał anty-CD133, tylko jedno, przeciwciało monoklonalne AC133, działało w parafinie. Pozostałe dwa badane przeciwciała nie powiodły się, ponieważ sekcje inkubowane z tymi przeciwciałami nie wykazywały zabarwienia lub ponieważ działanie immunosupresyjne obserwowane w przypadku zastosowania wysokich stężeń przeciwciał uznano za niespecyficzne (podobne zabarwienie obserwowano w kontroli ujemnej). Przeciwciało monoklonalne AC133 dało wiarygodne wyniki na badanych sekcjach osadzonych parafiną. Ustalamy dla tego przeciwciała rozcieńczenie 1 : 10 i 40 minut inkubacji w temperaturze pokojowej jako preferowane warunki pracy. Następnie wszystkie eksperymenty przeprowadzono w tych warunkach.
fragmenty skóry z prawidłowymi gruczołami potowymi zostały wykorzystane jako kontrola pozytywna. Ponadto, gdy występują w sekcjach, normalne gruczoły potowe ze skóry przylegającej do nowotworów były stosowane jako wewnętrzne kontrole pozytywne. Negatywne kontrole przeprowadzono przez pominięcie przeciwciał anty-CD133 podczas inkubacji pierwotnego przeciwciała.
immunohistochemiczne zabarwienie obszarów stałych i struktur acinarnych lub przewodowych z guzów oceniano oddzielnie. Barwienie CD133 oceniano za pomocą skali semiquantitative. Struktury acinarne lub kanałowe oceniano następująco: ( – ) brak zabarwienia; ( + ) zabarwienie materiału wydzielniczego w świetle izolowanych przewodów lub acini i/lub słabe zabarwienie wierzchołkowej lub luminalnej granicy kilku przewodów lub acini; ( ++ ) jasne zabarwienie wierzchołkowej lub luminalnej granicy większości przewodów lub acini obecnych w guzie; ( + + + ) zabarwienie wierzchołkowej lub luminalnej granicy wszystkich przewodów lub acini obecnych w guzie. Ekspresja CD133 została oceniona przez dwóch starszych patologów (EP i SYNC) w sposób zaślepiony, bez znajomości informacji klinicznych i patologicznych. W przypadku rozbieżnych ocen, szkiełka zostały ponownie ocenione przez obu patologów pod mikroskopem wielogłowicowym i uzyskano zgodę.
2.3. Posiew komórek nowotworowych z guzów skóry
fragmenty guza zostały mechanicznie i enzymatycznie zdezagregowane przez trawienie kolagenazą typu IA (2 mg / mL) (Gibco, Invitrogen) w zrównoważonym roztworze soli Hanka (HBSS) w temperaturze 37°C przez 2 godziny. Komórki filtrowano przez siatkę nylonową o średnicy 40 µm i następnie dysocjowano przez seryjne przejście przez pipety serologiczne. Trawioną tkankę odwirowywano w temperaturze 1000 ×g przez 10 minut, a osad przemyto kilka razy w celu uzyskania zawiesiny pojedynczej komórki. Wyizolowane komórki umieszczano w kolbach hodowlanych i hodowano w temperaturze 37°C w pożywce dmem/F12 zawierającej 10% płodowej surowicy bydlęcej i uzupełniano penicyliną / streptomycyną i fungizonem.
2.4. Analiza cytometrii przepływowej
wszystkie eksperymenty przeprowadzono na zawiesinach komórkowych przygotowanych przy pierwszym przejściu hodowli pierwotnej z guzów. Komórki odłączano stosując 0,02% EDTA w soli fizjologicznej buforowanej fosforanem (PBS) przez 15 minut w temperaturze 37°C i przemyto PBS przed barwieniem. Zawiesiny komórkowe dostosowano do komórek / mL i inkubowano z zalecanym rozcieńczeniem przeciwciała (1/10) przez 20 minut w ciemności (4°C). Próbki bez pierwotnego przeciwciała zostały wykorzystane jako negatywne kontrole. Zastosowano przeciwciało anty-CD133 / 1 (AC133)-APC (Miltenyi Biotec). Niezwiązane przeciwciała usunięto przez przemywanie PBS, A komórki ponownie zawieszono w odpowiedniej objętości buforu. Analizę przeprowadzono na cytometrze przepływowym LSRII (BD Biosciences). Dane analizowano przy użyciu Summit V5. 0.1. 5170 oprogramowanie (Dako).
3. Wyniki
3.1. Wyniki kliniczne
kohorta pacjentów składała się z 29 mężczyzn i 23 kobiet w wieku od 24 do 90 lat (mediana, 49 lat). Miejsce prezentacji było zmienne, większość z nich zlokalizowana była w okolicy głowy i szyi. Dane kliniczne przedstawiono w tabeli 1. Wszyscy pacjenci przeszli biopsję skóry wyciętej.
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| CD133 staining was graded using a semiquantitative scale. Acinar or ductal structures were evaluated as follows: (- ) brak zabarwienia; ( + ) zabarwienie materiału wydzielniczego w świetle izolowanych przewodów lub acini i/lub słabe zabarwienie wierzchołkowej lub luminalnej granicy kilku przewodów lub acini; ( ++ ) jasne zabarwienie wierzchołkowej lub luminalnej granicy większości przewodów lub acini obecnych w guzie; ( + + + ) zabarwienie wierzchołkowej lub luminalnej granicy wszystkich przewodów lub acini obecnych w guzie. | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
3.2. Wyniki immunohistochemiczne
z trzech różnych przeciwciał monoklonalnych badanych na tkankach utrwalonych formaliną i osadzonych parafiną, i zgodnie z wcześniejszymi doniesieniami, tylko AC133 dawało czułe i wiarygodne wyniki. Ogólny schemat barwienia immunohistochemicznego obserwowany z tym przeciwciałem był ściśle związany z architekturą tkanek. Barwienie było zlokalizowane głównie na powierzchni wierzchołkowej komórek, które tworzyły struktury kanałowe lub gruczołowe. Wyniki immunohistochemiczne obserwowane w tych strukturach przy użyciu przeciwciała anty-CD133 podsumowano w tabeli 1 i opisano poniżej. Stałe obszary z któregokolwiek z badanych nowotworów przydennych lub z badanego raka podstawnokomórkowego i płaskonabłonkowego nie wykazały pozytywności CD133.
3.2.1. Prawidłowa ekspresja CD133 w tkance
obserwowano na śródczaszkowej lub wierzchołkowej powierzchni komórek acini i końcowych przewodów prawidłowych gruczołów eksrynowych (Fig.1(A)). Kanaliki międzykomórkowe utworzone na błonie bocznej komórek eksrynowych zlokalizowanych w wydzielniczej części gruczołów potowych były wyraźnie zabarwione (Fig.1(b)), jak również wydzielina znajdująca się w świetle kanałów eksrynowych. Barwienie normalnych gruczołów apokrynowych w końcowych przewodach obserwowano na wierzchołkowej granicy komórek, chociaż z niejednolitym rozkładem. W obszarach żołędziowych tych gruczołów, gdzie apokrynowe wydzielanie dekapitacji było oczywiste, CD133 wykazywał jedynie słabe lub negatywne zabarwienie.
(a)
(b)
(a)
(b)
3.2.2. Nowotwory
CD133 nie ulegały ekspresji w żadnym z badanych raków płaskonabłonkowych ani podstawnokomórkowych. Przy użyciu przeciwciała AC133 guzy adnexal analizowane w tej pracy wykazały następujący wzór barwienia (podsumowany w tabeli 1).
nowotwory łagodne z różnicowaniem Ekkrynnym lub Apokrynowym. Wszystkie przypadki eccrine spiradenoma wykazywały immunoreaktywność CD133 na błonie wierzchołkowej struktur kanałopodobnych obecnych w guzkach nowotworowych. Pozytywna była również powierzchnia luminalna komórek nabłonkowych tworzących torbiele unilokularne wszystkich analizowanych przypadków hidrocystomy eccrine. Przewody i małe torbiele obecne w trzech z sześciu przypadków eccrine poroma wykazały intensywne zabarwienie wewnętrznej warstwy komórkowej z proliferacji kanalików, i to zabarwienie znajdowało się na granicy śródczaszkowej komórek. Pozostałe trzy analizowane przypadki poroma wykazały ten sam wzór barwienia w większości kanalików, ale z ( ++ ) lub ( + ) wzorcem barwienia pozytywności CD133. Struktury kanałopodobne, obecne w czterech przypadkach cylindroma, wykazały również immunoreaktywność na błonie wierzchołkowej komórek nabłonkowych. Barwienie czterech syringomów chondroidalnych było wyraźne, a wszystkie obecne kanały, które tworzyły sporadycznie rozgałęziające się struktury, wykazywały intensywną dodatniość na błonie wierzchołkowej (ryc. 2). Rozszerzone i kręte przewody, które prowadzą do przestrzeni torbielowych wszystkich przypadków syringocystoadenoma papilliferum, wykazywały aktywność immunologiczną w wierzchołkowej części komórek nabłonka lub na luminalnej powierzchni torbieli, z intensywnością od ( ++ ) do ( + + + ) (ryc. 3). Pięć przypadków zdiagnozowanych jako guzkowy hidradenoma wykazało izolowane struktury podobne do kanałów, które były dodatnie dla CD133 z barwieniem wierzchołkowym komórek tworzących kanaliki (Fig. 4) o intensywności od ( ++ ) do (+++). Dwa przypadki hidradenoma papilliferum wykazały również ekspresję CD133 w wierzchołkowej części struktur gruczołowych. Tylko dwa z sześciu badanych przypadków syringoma wykazały spójne zabarwienie na powierzchni luminalnej małych przewodów, które tworzyły guzy, które były wyłożone Zwykle dwiema warstwami sześciennych komórek nabłonkowych. Przypadki apokrynowego hidrocystoma nie wykazały żadnej dodatniej immunoreaktywności.
liniowe zabarwienie komórek kolumnowych wyściełających kanaliki przypadku hidradenoma. Zabarwione są tylko komórki, które znajdują się na wewnętrznej powierzchni kanalików.
nowotwory złośliwe o zróżnicowaniu Ekrynowym lub Apokrynowym. Nie wykazano immunoreaktywności na luminalnej powierzchni torbieli przypadku rozpoznanego jako rak apokrynowy. Dwa mikrocystyczne raki przydenkowe analizowane w tym badaniu wykazały silną pozytywność CD133 na wierzchołkowej powierzchni komórek, które tworzyły małe i duże Luminy struktur rurowych. Odporność CD133 można wykazać na bardzo nietypowych komórkach, które otaczały struktury rurkowe w przypadku porowakoraka (Fig.5).
(a)
(b)
(a)
(b)
Ductal structures of porocarcinoma seen in H&E sections (a) are CD133 positive (b).
3.3. Charakterystyka hodowli pierwotnych z guzów skóry ludzkiej i analiza cytometrii przepływowej
siedem próbek pobranych z guzów skóry ludzkiej poddano obróbce w celu uzyskania zawiesin pojedynczych komórek. Ze względu na niewystarczającą liczbę komórek uzyskanych z nowotworów lub z powodu zanieczyszczenia grzybami lub bakteriami, tylko cztery próbki zostały pomyślnie wyhodowane i przeanalizowane pod kątem ekspresji epitopu CD133/1 na powierzchni komórki. Te pomyślnie hodowane biopsje obejmują jeden eccrine porocarcinoma i trzy raki płaskonabłonkowe komórki. Badanie mikroskopowe hodowanych komórek wykazało różne morfologie, które różniły się konsekwentnie do typu histologicznego guza. Komórki raka płaskonabłonkowego wykazywały wygląd komórek nabłonkowych lub wrzecionowatych, podczas gdy komórki eccrine porocarcinoma miały bardziej zaokrąglony kształt i zgrupowane razem w wysepki małych i atypowych komórek. Obecność komórek nabłonkowych w tych kulturach potwierdzono za pomocą e-cadherin i pozytywnej ekspresji EpCam jako markerów nabłonkowych.
aby ustalić, czy hodowle komórek nowotworowych skóry zawierały populację komórek cd133 dodatnich, użyliśmy cytometrii przepływowej do zbadania ekspresji markera powierzchniowego CD133 / 1 z przeciwciałem AC133. Wszystkie próbki raka płaskonabłonkowego zawierały mniej niż 0,1% komórek dodatnich, podczas gdy prawie 22% komórek dodatnich wykryto w eccrine porocarcinoma. Rysunek 6 przedstawia reprezentatywne histogramy dwóch ocenianych typów nowotworów skóry.
(a)
(b)
(a)
(b)
CD133 expression profiles in human skin primary tumour cells. Analysis of CD133/1 expression in samples from eccrine porocarcinoma (b) and from squamous cell carcinoma (a). Flow cytometry of porocarcinoma derived cell cultures show a 22% of CD133/1 epitope positive cells and CD133 immunostaining. Rak płaskonabłonkowy wykazuje ujemne zabarwienie komórek CD133 i 0% dodatnich komórek CD133 na cytometrii przepływowej.
4. Dyskusja
postęp w biologii skórnych komórek macierzystych i w rozumieniu karcynogenezy zależy w dużym stopniu od dostępności markerów specyficznych dla charakterystycznych populacji komórek macierzystych . Znane markery komórek macierzystych skóry lub komórek macierzystych, które zostały zidentyfikowane w innych narządach lub guzach mogą być stosowane do wykrywania skórnych CSCs. Jednym z tych markerów, które można przetestować w skórze, jest białko CD133 (prominina-1). Pierwsze dane opisujące ekspresję CD133 przy użyciu przeciwciała monoklonalnego AC133, wytwarzanego przeciwko nowemu antygenowi glikoproteiny z komórek macierzystych, wykazały, że CD133 był selektywnie wyrażany na macierzystych i progenitorowych komórkach macierzystych CD34 pochodzących z wątroby i szpiku kostnego ludzkiego płodu, a także z krwi . Od tego czasu kilka raportów wykazało, że prominina-1 może być używana do identyfikacji i izolowania ludzkich komórek macierzystych z różnych źródeł , w tym układu krwiotwórczego , prostaty , trzustki lub nerki . Ponadto, przeciwciała monoklonalne przeciwko CD133 zostały wykorzystane do identyfikacji i izolacji przypuszczalnej populacji komórek inicjujących nowotwór lub CSCs w wielu ludzkich rakach i czerniaku złośliwym . W glejaku jako istotny czynnik prognostyczny, niezależny od innych czynników, takich jak stopień guza, zaproponowano zwiększenie liczby komórek nowotworowych CD133 dodatnich, a także obecność klastrów tych komórek . Jednakże inne badania, wykorzystujące różne i nowatorskie klony anty-CD133, sugerują, że ekspresja CD133 nie ogranicza się do komórek macierzystych i progenitorowych i wydaje się być wyrażona w dorosłych komórkach nabłonkowych tkanek mysich i ludzkich . Na przykład, używając klonu CD133, zwanego 13A4, pochodzącego z promininy-1 myszy, Weigmann et al. wykazano ekspresję promininy – 1 na powierzchni wierzchołkowej komórek neuroepitelialnych i dorosłych kanalików proksymalnych nerki oraz Karbanová i in. , stosując przeciwciało monoklonalne (80b258) wytworzone przeciwko ludzkiemu polipeptydowi promininy-1, obserwowano immunoreaktywność w tkankach dorosłych ludzi, szczególnie w nabłonku gruczołowym. Wyniki te wskazują na potrzebę dalszych badań w celu wyjaśnienia, czy antygen AC133, wcześniej stwierdzony w cytometrii przepływowej, ograniczony do dodatnich komórek progenitorowych CD34, ulega ekspresji w dorosłych komórkach nabłonkowych . Zasugerowano, że obserwowana zmienna ekspresja CD133 jest związana z różniczkowym powinowactwem różnych przeciwciał do różnych glikozylowanych form CD133 . Przeciwciało monoklonalne AC133 rozpoznaje glikozylowany epitop promininy – 1 i, co ciekawe, glikozylacja tego białka może ulec zmianie w zależności od stanu różnicowania komórkowego lub może zostać zmieniona podczas procesu transformacji złośliwej . W naszych badaniach nad guzami skóry ludzkiej zaobserwowaliśmy, że ekspresja CD133 jest w dużym stopniu zależna od tworzenia się kanałów gruczołów potowych i wydzielania gruczołów potowych. Immunoreaktywność CD133 obserwowano głównie na wierzchołkowej / śródczaszkowej powierzchni struktur kanałopodobnych lub torbieli najbardziej łagodnych i złośliwych nowotworów eksrynowych. Żaden z badanych nowotworów, ani łagodny, ani złośliwy, nie prezentował izolowanych lub małych skupisk cd133 dodatnich komórek nowotworowych w obszarach stałych. Podobny wzór barwienia cd133 błony komórkowej wierzchołkowej komórek wydzielniczych odnotowano wcześniej w normalnych strukturach kanalikowych, takich jak kanaliki proksymalne nerek lub w gruczołach nowotworowych raka jelita grubego . Barwienie CD133 stwierdzono również na wierzchołkowej / śródczaszkowej powierzchni komórek tworzących światło w raku jajnika . W tych przypadkach umiejscowienie wierzchołkowe CD133 było związane z możliwą funkcją wydzielniczą tej cząsteczki. Rozkład morfologiczny barwienia CD133 wykazuje korelację z dobrze rozpoznanymi strukturami wydzielniczymi prawidłowych tkanek i gruczołów, sugerując funkcjonalny związek CD133 z wydzielaniem. W rzeczywistości w naszym badaniu guzy podejrzewane o powstawanie w obszarach przewodowych gruczołów potowych, takich jak syringomas, wykazały mniej intensywny wzór barwienia niż te pochodzące z części zębowych.
ekspresja CD133 na powierzchni komórek zróżnicowanych komórek nowotworowych jest argumentem przeciwko CD133 jako specyficznemu markerowi komórek macierzystych raka w skórze. Jednakże nie można całkowicie wykluczyć istnienia małej populacji CD133 + CSC, ponieważ wykazano ją w innych narządach, gdzie CD133 ulega ekspresji na powierzchni komórek zarówno CSCs, jak i zróżnicowanych komórek nowotworowych .
łącznie, nasze wyniki wykazują swoistą immunohistochemiczną ekspresję przeciwciała AC133 na powierzchni wydzielniczej zróżnicowanych normalnych i nowotworowych komórek gruczołów eksrynowych. Eksperymenty, które wykorzystują to przeciwciało jako marker CSCs w skórze, powinny być interpretowane z ostrożnością. Przeciwciało AC133 jest czułym i specyficznym markerem różnicowania gruczołów skórnych, przydatnym w diagnostyce nowotworów z możliwym różnicowaniem eksrynowym lub apokrynowym.
podziękowania
autorzy są wdzięczni Pedro Javier Benito Castellanos i Laurze Abendaño za wsparcie techniczne.
