Abstract

de ontwikkeling van een continu tweefasige centrifugering voor de verwijdering van hybridomacellen en celresten uit kweekbouillon wordt gerapporteerd. Het doel was om supernatant te produceren, die direct kan worden gebruikt voor ultrafiltratie of chromatografie zonder filtratiestappen.

de eerste centrifugatiestap voor het verwijderen van hybridomacellen uit herhaalde batchfermentatie op een schaal van 100 L werd uitgevoerd door een verbeterde schijfstapelscheider. De centrifuge was uitgerust met een hydrohermetisch toevoersysteem, dat een schadevrije scheiding van de cellen door middel van matige centrifugale kracht mogelijk maakte.

de verduidelijking voor zoogdiercellen in deze stap lag in het bereik van 99 tot 99,9 %. De hoeveelheid subcellulaire deeltjes in de geklaarde vloeibare fase werd verminderd tot 50 % van het deeltjesgehalte in de voedingsstroom.

in een tweede centrifugatiestap werd de resterende hoeveelheid celresten en andere kleine deeltjes verwijderd. Het werd uitgevoerd met centrifugale krachten tot 18000 * g in een hoge snelheid centrifuge uitgerust met een continu debiet systeem.

de monoklonale antilichamen in het resulterende supernatant werden direct geconcentreerd door ultrafiltratie en chromatografische methoden. Bij dit proces werd geen vervuiling van de UF-membranen of chromatografische membranen waargenomen.

kosten voor membraanvervanging kunnen drastisch worden verminderd door gebruik te maken van het tweetraps centrifugatieproces.