tekst

een aantal vormen van kanker bij de mens zijn gevoelig voor mitotische stress, wat een defecte controlepost impliceert. Vele proteã nen die forkhead-geassocieerde domeinen (FHA) bevatten zijn de controlepunten van de celcyclus. Om nieuwe mitotische checkpointgenen te isoleren, zochten Scolnick en Halazonetis (2000) in een Est-database naar cDNAs die FHA-domeinen bevatten. Zij identificeerden cDNA zij chfr voor ‘controlepost met forkhead en ringsvinger domeinen’ noemden die een 664-aminozuurproteã ne met FHA en ringsvinger domeinen binnen zijn n eindpunt codeert. Binnen zijn c-Eindpunt, bevat CHFR een cysteine-rijk gebied dat geen significante gelijkenis met om het even welke proteã ne in de Genbankdatabase vertoonde, maar hoogst bewaard tussen mensen en muizen wordt bewaard. Door Noordelijke vlek analyse, is de uitdrukking chfr alomtegenwoordig in normale menselijke weefsels; nochtans, bevatten 3 van 8 onderzochte menselijke kankercellijnen geen chfr mRNA. Deze zelfde cellijnen brachten geen chfr-eiwit tot expressie, bepaald door immunoblot assay. Scolnick en Halazonetis (2000) toonden aan dat het chfr-gen geïnactiveerd werd wegens gebrek aan expressie of door mutatie in 4 van de 8 onderzochte menselijke kankercellijnen. Normale primaire cellen en tumorcellijnen die wildtype CHFR uitdrukken vertoonden vertraagde ingang in metafase wanneer centrosoomscheiding werd geremd door mitotische stress. In tegenstelling, gingen de lijnen van de tumorcel die de functie van CHFR hadden verloren metafase zonder vertraging in. Ectopische uitdrukking van wildtype CHFR herstelde de vertraging van de celcyclus en verhoogde het vermogen van de cellen om mitotische stress te overleven. Zo concludeerden Scolnick en Halazonetis (2000) dat CHFR een controlepunt definieert dat de toegang tot de metafase vertraagt als reactie op mitotische stress.

Toyota et al. (2003) analyseerde het patroon van chfr uitdrukking in een aantal menselijke lijnen van de kankercel en primaire tumors. Zij vonden CPG methylation-afhankelijke het tot zwijgen brengen van chfr uitdrukking in 45% van de lijnen van de kankercel, 40% van primaire colorectal kanker, 53% van colorectal adenomas,en 30% van primaire hoofd en halskanker. De expressie van CHFR was precies gecorreleerd met zowel CPG methylering als deacetylering van histonen H3 en H4 in het CpG-rijke regulerende gebied. Cellen met chfr methylering hadden een intrinsiek hoge mitotische index wanneer behandeld met microtubule inhibitor. Dit betekent dat cellen waarin chfr epigenetisch geïnactiveerd was, verlies-van-functie allelen vormden voor mitotische controlepuntcontrole. Samen genomen, werpen deze bevindingen licht op de weg waardoor het mitotische controlepunt in kankercellen wordt omzeild en suggereren dat de inactivering van controlepointgenen veel wijdverbreid is dan eerder vermoed.

Ahel et al. (2008) identificeerde een nieuw Poly (ADP-ribose)-bindende zinkvinger (PBZ) motief in een aantal eukaryotic proteã NEN betrokken bij de reactie van de schade van DNA en controlepostregulatie. Het PBZ-motief is ook vereist voor posttranslationele poly (ADP-ribosyl)ation. Ahel et al. (2008) toonde interactie aan van poly (ADP-ribose) met dit motief in 2 representatieve menselijke eiwitten, APLF(611035) en CHFR, en toonde aan dat de acties van CHFR in de antefase checkpoint worden ingetrokken door mutaties in PBZ of door remming van poly (ADP-ribose) synthese.

expressie van het mitotische checkpoint-eiwit CHFR gaat verloren in 20 tot 50% van de primaire tumoren en tumorcellijnen. Om te onderzoeken of downregulatie van CHFR direct bijdraagt aan tumorigenese, Yu et al. (2005) genereerde chfr knockout muizen. Chfr-deficiënte muizen werden gevonden om kanker-naar voren gebogen te zijn, spontane tumors te ontwikkelen, en de incidentie van de huidtumor na behandeling met dimethylbenz(alpha)antraceen hebben verhoogd. De deficiëntie van Chfr leidde tot chromosomale instabiliteit in embryonale fibroblasten en regelde het mitotic kinase aurora A (603072), die vaak upregulated in een verscheidenheid van tumors is. Chfr fysisch interactie met aurora A en ubiquitinated aurora a zowel in vitro als in vivo. Yu et al. (2005) concludeerde dat CHFR een tumorsuppressor is en dat het zorgt voor chromosomale stabiliteit door de expressieniveaus van belangrijke mitotische eiwitten zoals aurora A.