Introduction

hepatocellulair carcinoom (HCC) dat het grootste histologische subtype van primaire leverkanker vertegenwoordigt, wereldwijd de vijfde meest voorkomende kanker is en de derde belangrijkste oorzaak van kankersterfte (1,2). De hoogste leverkankercijfers worden gevonden in ontwikkelingslanden, met name in Oost-/Zuidoost-Azië en Midden – /West-Afrika,terwijl de percentages laag zijn in Zuid-Centraal, West-Azië, Noord-en Oost-Europa (3). Genetische veranderingen en epigenetischefactoren met een hoog risico,zoals chronische infectie met HBV of HCV, levercirrose, alcoholische leverziekte en aflatoxinen, zijn verantwoordelijk voor de hoge morbiditeit van HCC (4-6).Nochtans, is het moleculaire mechanisme vergezeld vanhepatocarcinogenese en progressie nog grotendeels onduidelijk.Zo is het van cruciaal belang voor ons om de etiologie te verduidelijken en de vitale moleculaire wijziging te onderzoeken die ten grondslag ligt aan hepatocellularcarcinoma initiatie en progressie, en uiteindelijk onze huidige concepten voor het diagnosticeren, screenen en behandelen van deze ziekte te verbeteren.

Tijdens het proces van hepatocarcinogenesis, theabrogation van de cel-cyclus checkpoints is een belangrijk kenmerk thatmay bevorderen kanker vorming (2).Als één van de toezichthouders van de cel cyclus checkpoint, celldivision cyclus 20 (CDC20) lijkt te fungeren als een regulerende proteininteracting met de anafase-promoting complex/cyclosome (APC/C)in de cel cyclus, die nodig is voor de anafase initiatie andlate mitose afslag (7,8). Twee regelgevende factoren, cdc20 en Cdh1 binden direct aan APC en activeren zijn cyclin ubiquitinationactiviteit tijdens mitose en G1 fase (9,10).Er is gemeld dat de receptor-associated protein 80(RAP80), die BRCA1 rekruteert aan de plaatsen van DNA-schade in de ubiquitinsignalingweg die door DNA-schade wordt veroorzaakt, door de anafase-bevorderende complex (APC/C-Cdc20) of (APC/C-Cdh1) door polyubiquitination tijdens mitose aan de G1-fase kan worden gedegradeerd (11). De depletie van RAP80 toonde adefect controle van G2-M fase checkpoint en bevorderde mitoticcell cyclus progressie.

CDC20 expressie kan Opmerkelijk onderdrukt worden door p53proteïne, dat maligne transformatie remt door regulatie van de celcyclus, cellulaire senescentie en apoptose gerelateerde genen(12). Hoge expressie van Cdc20 is gemeld in verschillende kwaadaardige tumoren, waaronder pancreas-ductaal adenocarcinoom (13), oralsquamous celcarcinoom, maagkanker (14), baarmoederhalskanker (15) en diverse kankercellen (14,16).Het expressiepatroon van CDC20 en de klinische significantie ervan in humaan hepatocellulair carcinoom zijn echter niet geconsolideerd.

in deze studie, door het analyseren van de microarray dataset(toetreding nr. GSE14520) uit de genexpressie omnibus (GEO)database (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/), vonden we dat Cdc20 de belangrijkste knoop was in HCC moleculaire interactienetwerken. Weexamined het expressieniveau van CDC20 in primaire HCC en adjacentniet-tumorweefsels, en evalueerde zijn clinicopathologic significance in 132 gearchiveerde HCC steekproeven. Het effect van het neerhalen van Cdc20 door siRNA op de groei en de celcyclus van leverkankercellen werd ook onderzocht. Onze bevindingen suggereren dat CDC20 een belangrijke rol kan spelen in de ontwikkeling van HCC.

materialen en methoden

Bioinformatica analyse

Microarray dataset GSE14520 (17) werd gedownload van GEO. Een totaal van183 HCC en 179 overeenkomstige para-carcinoom weefsels die wereassayed met Affymetrix U133a GeneChips van cohort 2 Chineespatiënten werden gebruikt in deze studie. Genexpressie profilering datawas opnieuw samengevat met behulp van de RMA-methode (18) en Entrez gen-centric CDF-bestanden (19) (in plaats van originalAffymetrix CDF-bestanden), die gefilterd niet-specifieke sondes op theGeneChips en samengevoegd meerdere sonde sets die de sameentrez gen in een sonde set. De significantieanalyse van microarray (SAM) (20) werd uitgevoerd om verschillend tot uitdrukking gebrachte genen tussen HCC en overeenstemmende weefsels van het paracarcinoom te identificeren. Delta werd ingesteld op 2,25, en de drempel ofFDR werd ingesteld op 0,001. Genen overexpressie in HCC die in meer dan 50 HCC-weefsels werden uitgedrukt maar minder dan 10 overeenkomstige para-carcinoomweefsels werden onderzocht. De genen werden verder geanalyseerd met GenCLiP software (21) (http://ci.smu.edu.cn) om genfuncties te annoteren en moleculaire interactienetwerken te construeren.

ethische verklaring

de klinische monsters werden alleen voor onderzoeksdoeleinden gebruikt. Goedkeuring werd verkregen van de ethische commissie van ChinesePLA General Hospital (LREC 2012/40). Alle monsters werden verzameld onder de voorwaarde van een voorafgaande schriftelijke geïnformeerde toestemming van de patiënten.

patiënten en weefselmonsters

zestien paren verse HCC en aangrenzende niet-tumortissues die werden gebruikt voor real-time PCR-en western blot-analyses werden verzameld tijdens chirurgie in het Chinese PLA General Hospital(Beijing, China) van November 2012 tot februari 2013. Tissueswere snap-bevroren in vloeibare stikstof tot gebruik. In paraffine ingebed, gearchiveerd HCC en aangrenzende niet-tumorweefsels gebruikt voor immunohistochemie (IHC) werden verkregen van 132 HCC patiënten die tussen januari 2006 en December 2007 een gedeeltelijke leverresectie ondergingen in hetzelfde ziekenhuis. De mediane leeftijd van de patiëntenwas 52 jaar (bereik 24-80 jaar).

celcultuur

een normale levercellijn (LO2) en drie HCC-celllijnen (HepG2, SMMC7721, Huh7) werden aangekocht bij de American TypeCulture Collection (ATCC, Manassas, VA) of de Chinese Academy ofscience Cell Bank en werden onderhouden in het Institute of biotechnology, Academy of Military Medical Sciences. Alle cellen werden bewaard in Dulbecco ’s modified Eagle’ s medium (DMEM, Invitrogen,CA) aangevuld met 10% foetaal runderserum (FBS, Gibco, Carlsbad,CA) en 2 mM L-glutamine, 100 U/ml penicilline, 100 µg/mlstreptomycine bij 37°C met 5% CO2.

RNA-extractie, cDNA-synthese en PCR-analyse

totaal RNA werd geëxtraheerd uit cellijnen en weefselmonsters met behulp van Trizol-reagens (Invitrogen) volgens de instructies van de fabrikant. Een totaal van 2 µg RNA werd reversetranscribed gebruikend TransScript en cDNA synthese Kit van transgen Biotech (Beijing, China). Real-time PCR was performed toexamine CDC20 mRNA level in cell lines and tissue samples by usinga Bio-Rad iQ5 Multicolor Real-Time PCR Detection System (Bio-Rad,Hercules, CA). β-actin was used as an internal control fornormalization. PCR primers were designed using the Primer Premier 5software and the sequences were: CDC20 forward,5′-TCGCATCTGGAATGTGTGCT-3′; and reverse,5′-CCCGGGATGTGTGACCTTTG-3′; β-actin forward,5′-TGACGTGGACATCCGCAAAG-3′; and reverse, 5′-CTGGAAGGTGGACAGCGAGG-3′. De expressiegegevens werden genormaliseerd naar het geometrisch gemiddelde van het huishoudgen β-actine en berekend met ΔΔCt (22) en de resultaten werden uitgedrukt met 2 ΔΔCt.

Western blot analysis

Western blot analysis werd uitgevoerd onder het standaardprotocol. SDS-polyacrylamidegelelektroforese (10%) werd gebruikt om het eiwit te scheiden dat vervolgens elektrotransferred werd van de gel naar een polyvinylideenfluoride (PVDF) membraan. Na het blokkeren van 5% gedroogde magere melk gedurende 1 uur, werd het membraan bedekt met anti-humaan CDC20 polyclonal antilichaam van het konijn (1: 1.000, Bioworld technologie, St. Louis Park, MN) voor 1 uur bij kamertemperatuur. Het muis anti-humaan α-tubuline monoklonaal antilichaam (1: 5.000; Santa Cruz Biotechnologie, Santa Cruz, CA) werd gebruikt als een interne controle. Na drie keer wassen met Tris-gebufferde zoutoplossing met tween-20 (TBST), werd het membraan geïncubeerd met secundaire mierikswortelperoxidase-geconjugeerd antilichaam tegen rabbitor muis (verdunning 1:5.000). Chemiluminescente detectie werd uitgevoerd met de Immobon Western Chemiluminescente HRP Substratekit (Millipore Corporation, Billerica, MA).

immunohistochemie (IHC) en scoring

immunohistochemie voor CDC20-expressie in HCC en aangrenzende niet-tumormonsters werd uitgevoerd met behulp van standaardmethoden.Kort, weefselsecties werden geïncubeerd met konijn anti-Cdc20 verdund 1: 200 (Bioworld technologie) overnight bij 4°C. boviene serumalbumine (1%; BSA) zonder primair antilichaam werd gebruikt als negativecontrol. Het secundaire poly-mierikswortelperoxidase (HRP) anti-konijn IgG antilichaam (ZSGB-Bio, Beijing, China) werd geïncubeerd bij kamertemperatuur gedurende 20 minuten.

alle immunoonderdelen werden onafhankelijk beoordeeld en beoordeeld door twee pathologen op een geblindeerde manier zonder kennis van de clinicopathologische informatie, op basis van de H-score methode, die de kleuringintensiteit samen met het percentage cellen kleuring positief beschouwt (23,24).Voor de H-score methode werden 10 velden willekeurig gekozen bij × 400magnificatie. De kleuringsintensiteit in de cellen werd gescoord als 0,1, 2 en 3, overeenkomend met respectievelijk de negatieve, zwakke, tussenliggende en sterke kleuring. In elk veld werd het totale aantal cellen en cellen die bij elke intensiteit gekleurd waren, geteld. De H-score werd berekend aan de hand van de formule: (% cellen gekleurd bij intensiteit categorie 1×1) + (% cellen gekleurd bij intensiteit categorie 2×2) + (% cellen gekleurd bij intensiteit categorie 3×3). H-scores varieerden van 0 tot 300, waarbij 300 100% van de cellen sterk vertegenwoordigde (3+) (24). Hoge Cdc20expressie werd gedefinieerd als kleuring h-scores van cellen ≥200.

onderdrukking van CDC20 door small interferingRNA (siRNA)

Double-stranded, small interferingrna (siRNA) wassynthesized and purified by GenePharma (Shanghai, China). De gevolgen die overeenkomen met het codeergebied van menselijke Cdc20 waren: sense, 5′-GGAGCUCAUCUCAGGCCA UUU-3′; antisense,5′-AUGGCCUGAUGAGCUCCUU-3′. Een niet-gerichte siRNA werd gebruikt voor de negatieve controle. Deze siRNAs waren opgelost indiethylpyrocarbonaat (DEPC) water om een concentratie van 20µM te bereiken. Leverkanker HepG2-cellen werden behandeld met CDC20 siRNA ornegatieve controle siRNA in 20 nM met behulp van het INTERFERin invitro siRNA-transfectiereagens (Polyplus Transfection, NewYork, NY).

kwantitatieve real-time PCR-en western blot-analyseswerden gebruikt om het interferentieeffect van siCDC20 te detecteren. Cellen die onbehandeld of behandeld werden met negatieve controle sirnaoligonucleotiden waren de controlegroepen.

cellulaire proliferatietest

twee plastic kolven van 25 cm2 werden elkinoculeerd met 2×105 leverkankercellen (HepG2), die vervolgens werden getransfecteerd met respectievelijk 20 nM negatieve controle siRNA en CDC20siRNA voor 48-h incubatie. Vervolgens werden cellen verteerd en gezaaid in 6-Wells platen met 2 ml medium per putje.Daarna werden de cellen uit een put verteerd en geteld door de geautomeerde celteller (Invitrogen) elke 24 uur tot dag vijf.

Fluorescence-activated cell sorting(FACS) test van de cel cyclus

siRNA voor CDC20 en negatieve controle siRNAoligonucleotides waren de getransfecteerde in HepG2 cellen met theINTERFERin in vitro siRNA transfection reagens voor 48 uur.Na behandeling met 2 µg/ml thymidine (Sigma-Aldrich, St. Louis,MO) gedurende 24 uur werden de cellen geoogst op 0, 3, 6, 9, 12-h afterremoving thymidine van het medium vast met 70% alcohol.Voorafgaand aan de analyses werden de cellen gewassen met PBS, behandeld met 1 mg/mlRNase A bij 37°C gedurende 30 min en vervolgens gekleurd met propidium jodide(PI). Analyses werden uitgevoerd door BD FACSCalibur (Becton-Dickinson,Franklin Lakes, NJ) en resultaten werden geanalyseerd door WinMDI Versie 2.9 software.

statistische analyses

alle statistische analyses werden uitgevoerd met behulp van het statistische softwarepakket IBMSPSS 20.0. Eenmansanalyse van variantie (ANOVA) werd gebruikt om de uitdrukking van CDC20 mRNAnormalized aan β-actin in cellijnen te vergelijken. De zelfde methode werd ookoperformed in het vergelijken van de histologische differentiatie in tumortissues genormaliseerd aan normale leversteekproeven. Gegevens vergelijkingen in twee groepen werden uitgevoerd door Student t-test. De χ2-test werd gebruikt om de relatie tussen CDC20-expressie en clinicopathologische kenmerken te analyseren. Bivariate correlaties tussen variables werden berekend door de correlatiecoëfficiënten van Spearman.Het niveau van statistische significantie werd vastgesteld op P<0,05 voor alle tests.

resultaten

CDC20 is de belangrijkste knoop in HCC-moleculaire interactienetwerken

Sam-analyse identificeerde 4.358 genen die overexpresseerden incc, waarbij 137 genen werden uitgedrukt in meer dan 50 HCC-weefsels,maar in minder dan 10 para-carcinoomweefsels. GenCLiP-analyse toonde aan dat van de 137 genen 72 genen gerelateerd waren aan de celcyclus(p=1.238 e-15, door χ2-test), 19 genen gerelateerd waren aan pindle assemblage (P=2.172 e-55, door χ2-test), en 26 genes gerelateerd waren aan chromosoomsegregatie (P=5.472 e-55, door X2-test). Onder de moleculaire netwerken die met 137 genen zijn geconstrueerd, was CDC20 de belangrijkste knoop die niet eerder is gemeld om te worden gerelateerd aan HCC. Van negen genen (NEK2,E2F1, BUB1, BUB1B, AURKB, CCNB1, CCNB2, UBE2C en CDKN2A) is bekend dat ze samenwerken met CDC20, waarbij 7 genen gerelateerd waren aan spindleassembly checkpoint (SAC) (Fig.1). Het doel van de SAC is CDC20 (25). Aldus, concludeerden wij dat in HCC, overexpressie van CDC20 tot afwezigheid van SAC leidt, en cellen snel aneuploid worden.

CDC20 is overexpressie in HCC

kwantitatieve real-time PCR werd gebruikt om het transscript-niveau van CDC20 te onderzoeken in drie HCC-cellijnen (HepG2, SMMC-7721 en Huh7) en één normale levercellijn (LO2). CDC20 mRNA-niveau was hoger in alle drie de HCC-cellijnen dan in de normale cellijn (Fig. 2).

om te bepalen of de opregulatie van ccc20 in HCC-cellijnen vergelijkbaar is bij HCC-patiënten, voerden we kwantitatieve real-time PCR uit op 16 paren van overeenkomende HCC-en adjacentnormale leverweefsels. Zoals in Fig.3A, CDC20 bleek differentieel overexpressie te hebben in 14 van alle onderzochte humane primaire HCC-monsters vergeleken met niet-kankermonsters van dezelfde patiënten. Bovendien was de tumor/non-tumor(t/NT) ratio van CDC20 mRNA expressie minstens >2-voudig in al deze 14 upregulated monsters, en de hoogste ratio was zelfs tot ongeveer 40-voudig. Het eiwitniveau van CDC20 werd bevestigd in alle 16 gepaarde weefselmonsters door western blot analyse. Image J1. 47v software werd gebruikt om het grijze niveau van elke band te kwantiseren en de verhouding CDC20 T/NT te berekenen van elke patiënt die normaliseert met A-tubuline. Uit de resultaten bleek dat alle onderzochte HCC-monsters een hoger expressieniveau van CDC20-eiwit vertoonden, behalve monster 1 en monster 4, dat consistent was met het mRNA-niveau (Fig. 3B). Deze bevindingen duidden erop dat ccc20 gewoonlijk werd verhoogd in HCC-weefsels of cellen.

immunohistochemie kleuring van Cdc20proteïne

immunohistochemie (IHC) werd uitgevoerd om de eiwitexpressie en lokalisatie van CDC20 te analyseren in 132paraffine ingebed gearchiveerde HCC weefselmonsters, waaronder 14 gevallen van goed gedifferentieerde, 78 gevallen van matig gedifferentieerde en 40 gevallen van slechte gedifferentieerde tumoren. CDC20-eiwit was upregulated (h-score ≥200) in 90 (68,18%) van 132 HCC-weefsels. Zoals getoond inFig. 4A, waren hoge niveaus van CDC20 aanwezig in primaire HCC-letsels en het positieve bevlekken hoofdzakelijk gelokaliseerd in cytoplasma en kernen. In tegenstelling, was CDC20 aanvankelijk of zwak gekleurd in overeenkomstige niet-tumorweefsels. Door de scores van CDC20-kleuring kwantitatief te vergelijken tussen 132archief HCC en aangrenzende niet-tumorweefsels (voornamelijk met inbegrip vanpatocirrhose en hepatitis), waren de scores van CDC20-kleuring aanzienlijk verhoogd in HCC-monsters vergeleken met peritumorale monsters (Fig. 4B). Bovendien werden de scores van CDC20-kleuring significant verhoogd, samen met de progressie van tumor histologische differentiatie van goed naar boven gedifferentieerd weefsels (Fig.5).

correlatie tussen verhoogde Cdc20expressie en clinicopathologische parameters van HCC

De relatie tussen CDC20-eiwitexpressie en de clinicopathologische kenmerken van 132 patiënten met HCC werd verder geanalyseerd. Zoals samengevat in tabel I, was CDC20-expressie significant geassocieerd met geslacht (p=0,013), tumordifferentiatie (P=0,000), TNM-Stadium (P=0,012), P53 en Ki-67expressie (p=0,023 en P=0,007, respectievelijk). Echter, nostatistisch significante associatie werd gevonden tussen hoge Cdc20expressie en andere clinicopathologische kenmerken met inbegrip van leeftijd, tumorgrootte, HBV-infectie, serum AFP-niveau, levercirrose,vasculaire invasie en intra/extra hepatische metastase. Spearmancorrelatieanalyse toonde aan dat hoge expressie van CDC20 nauw gerelateerd was aan geslacht (R=0,215, P=0,013), slechtere tumordifferentiatie (R=0,421, P<0,001), geavanceerde TNM staging(R=0,218, P=0,012), hogere expressieniveau van p53 (R=0,212,P=0,014) en Ki-67 (R=0,235, p=0,007) (tabel II). Al met al toonden deze resultaten aan dat CDC20 in hoge mate tot uiting kwam in HCC-weefsels en dat de expressie ervan nauw samenhing met de differentiatie enprogressie van HCC.

onderdrukking van CDC20-expressie door siRNA

de kwantitatieve real-time PCR onthulde 90% onderdrukking van het transcriptieniveau van CDC20 bij 48 uur na overdracht met siCDC20, vergeleken met onbehandelde cellen of cellstransfect met negatieve controle siRNA (fig. 6A) (P<0,0001). De westerse blotanalyse toonde ook een duidelijke onderdrukking van CDC20 eiwit levelat 48 h na transfectie met siCDC20 (Fig. 6B). De veranderde expressie van cyclin-dependent kinase inhibitor 1A (P21) proteïne werd ook onderzocht door western blot analyse, en de resultaten toonden aan dat p21proteïneniveau Opmerkelijk werd verhoogd vanwege de onderdrukking van CDC20 (Fig. 6B).

Effect van cdc20 suppressie op de celproliferatie en de celcyclus

celproliferatietest toonde aan dat de celgroei van cdc20 siRNA getransfecteerde cellen Opmerkelijk geremd was in vergelijking met de getransfecteerde cellen met negatieve controle siRNA(Fig. 6C). De remming van de celproliferatie door siCDC20 zou naar verwachting gepaard gaan met de meest nabije metafase van de celcyclus. Door stroom cytometry test, werd an increased aantal cellen in de G2 / M fase waargenomen in siCDC20transfected cellen vergeleken met cellen transfected met negativecontrol siRNA (Fig. 6D). Deze gegevens gaven aan dat de afschaffing van CDC20 de celgroei remde door de fasestop van G2/M te verminderen.

discussie

door middel van Bioinformatica analyse van een microarraydataset uit GEO database, identificeerden we CDC20 die de majornode was in HCC moleculaire interactienetwerken, het was gerelateerd aan spindle assembly checkpoint (SAC) in de celcyclus. Tijdens de oorspronkelijke ontwikkeling werden defecten of storingen in het controlepunt van de spindelassemblage verondersteld verantwoordelijk te zijn voor de verhoogde snelheid van aneuploïdisatie (26). Mondalet al heeft gemeld dat CDC20 in primaire hoofd-en halstumoren en verscheidene mondelinge plaveiselcelcarcinoom(OSCC) cellijnen overexpresseert. Het hoge uitdrukkingsniveau van CDC20 in OSCC cellen wordt geassocieerd met voortijdige anaphase bevordering, die tot mitoticabnormaliteiten Leiden (27). Studies hebben ook aangetoond dat hoge CDC20 expressie wordt gedetecteerd in oralsquamous celcarcinoom en colorectale kanker weefsels en de overexpressie ervan kan een slechte prognose voor patiënten voorspellen (28,29).

CDC20 is ook vereist voor laat-anafasecellen die aan mitose ontsnappen (30). Doelstellingcdc20 resulteert in het blokkeren van de uitgang van de mitose, wat een betere therapeutische strategie voor het doden van kankercellen effectiever kan zijn dan spindel-verstorende geneesmiddelen (31). Wang E. A. meldden dat cdc20, dat kan functioneren als een oncoproteïne ter bevordering van deprogressie en ontwikkeling van kanker bij de mens, een veelbelovend therapeutisch doel vormt (32). Hoewel de rol van CDC20 in tumorgenese en prognose van verschillende mensen diepgaand is onderzocht en bevestigd, hebben beperkte studies de potentiële functie van CDC20 in de initiatie en progressie van hepatocellulair carcinoom onderzocht.

in deze studie hebben we het expressieniveau van cdc20 beoordeeld in 16 gepaarde vers ingevroren HCC-weefsels en overeenkomstige niet-tumormonsters. De resultaten toonden aan dat het gemiddelde mRNA andproteïneniveau van CDC20 in HCC-weefsels veel hoger was dan in gematchte niet-tumorweefsels. Immunohistochemie werd gebruikt voor het onderzoeken van de subcellulaire locatie van CDC20 en zijn relatie met klinische pathologische parameters van HCC patients.By met behulp van χ2-test, vonden we dat het hogere CDC20 proteïne-expressieniveau geassocieerd werd met geslacht,tumordifferentiatie, TNM-Stadium, P53 en Ki-67-expressie. Om de potentiaalbiologische functie en het moleculaire mechanisme van CDC20 in HCC te onderzoeken, ontwierpen we een double-stranded, small interfering RNA (siRNA) targetingCDC20 om te interfereren met zijn expressieniveau in de HepG2 cellline. Door cellulaire proliferatieanalyse en FACS-test, vonden wij dat cellen getransfecteerd met sicdc20 oligonucleotiden verminderde groeisnelheid en verhoogd aandeel cellen in het stadium G2/M toonden.

de specifieke knockdown van CDC20 door siRNA toonde een onderdrukt effect tegen leverkankercelproliferatie invitro, wat erop wees dat de overexpressie van CDC20 naar verwachting de celproliferatie zal versnellen en tumorinitiatie en progressie van HCC zal bevorderen. De leverkankercellen met onderdrukte CDC20 expressie werden geïnduceerd om inG2 / M-fase te accumuleren, wat verantwoordelijk kan zijn voor de remming van de celgroei. Cyclin-afhankelijke kinaseinhibitor 1A (p21) die gekend is om aan de G2/M controlepost (33) deel te nemen, werd bewezen om te worden upregulated wanneer de cdc20 uitdrukking specifiek in leverkankercellen werd onderdrukt. P21 kan de activiteit van CDKs remmen die tot de ccumulation van unphosphorylated RB-proteã ne van het tumorontstoringsapparaat leiden, die de transcriptional activering van E2F en subsequentlypreventsingang van de cellen in S-fase van de celcyclus verhindert(34).

concluderend is dit de eerste studie die gericht is op het onderzoeken van CDC20-expressie in HCC-weefsels en-cellijnen, waarbij nieuwe aandacht wordt geschonken aan het feit dat CDC20 een klinisch relevante indicator kan zijn en een therapeutisch doelwit van HCC kan zijn. Niettemin zijn verdere studies nodig die gericht zijn op de moleculaire mechanismen van CDC20 bij de initiatie en progressie van HCC en onderzoek naar de prognostische significantie van cdc20.

Dankbetuigingen

De auteurs danken hun collega ‘ s van het Instituut voor Biotechnologie van de Academie voor militaire Geneeskundewetenschappen voor hun technische ondersteuning.

	Parkin DM: Global cancer statistics in theyear 2000. Lancet Oncol. 2:533–543. 2001.PubMed/NCBI
	El-Serag HB and Rudolph KL: Hepatocellularcarcinoma: epidemiology and molecular carcinogenesis.Gastroenterology. 132:2557–2576. 2007. View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Jemal a, Bray F, Center MM, Ferlay J, WardE and Forman D: Global cancer statistics. CA Cancer J Clin.61:69–90. 2011. Bekijk artikel: Google Scholar
	Severi t, van Malenstein H, Verslype C andvan Pelt JF: tumor initiation and progression in hepatocellularcarcinoma: risk factors, classification, and therapeutic targets.Acta Pharmacol Sin. 31:1409–1420. 2010. Bekijk Artikel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Michielsen P en e: virale hepatitis Band hepatocellulair carcinoom. Acta Gastroenterol Belg. 74:4–8.2011.
	McGivern DR en Lemon SM: virusspecifieke mechanismen van carcinogenese bij leverkanker met hepatitis C-virus. Oncogene. 30:1969–1983. 2011. Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Fung Tk and Poon RY: Een achtbaan met de mitotische cyclinen. Semin Cell Dev Biol. 16:335–342. 2005.Bekijk artikel : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Weinstein J, Jacobsen FW, Hsu-Chen J, Wu Tand Baum LG: a novel mammalian protein, p55CDC, present in dividingcells is associated with protein kinase activity and has homologyto the Saccharomyces cerevisiae celdeling cyclus eiwitten CDC20 en cdc4. Mol Cell Biol. 14:3350–3363. 1994.
	Peters JM: Celbiologie: de controlepuntrem is afgelost. Natuur. 446:868–869. 2007. Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Fang G, Yu H en Kirschner MW: Directbinding of CDC20 protein family members activates theanaphase-promoting complex in mitosis and G1. Mol Cell. 2:163–171.1998. Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Cho HJ, Lee EH, Han Sh, et al: Degradatie van menselijke RAP80 is celcyclus geregeld door cdc20 en cdh1 ubiquitinligases. Mol Cancer Res. 10: 615-625. 2012. Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Kidokoro T, Tanikawa C, Furukawa Y,Katagiri T, Nakamura Y en Matsuda K: CDC20, een potentieel kankertherapeutisch doel, wordt negatief gereguleerd door p53. Oncogene.27:1562–1571. 2008. Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Chang DZ, Ma Y, Ji B, et al: IncreasedCDC20 expressie wordt geassocieerd met pancreatische ductaladenocarcinoom differentiatie en progressie. J Hematol Oncol.5:152012. Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Kim JM, Sohn HY, Yoon SY, et al:Identification of gastric cancer-related genes using a cDNAmicroarray containing novel expressed sequence tags expressed ingastric cancer cells. Clin Cancer Res. 11: 473-482. 2005.PubMed/NCBI
	Espinosa AM, Alfaro A, Roman-Basaure E, etal: Mitose is een bron van potentiële markers voor screening en overleving en therapeutische doelen bij baarmoederhalskanker. PloS ÉÉN.8:.PubMed/NCBI
	Ouellet V, Guyot MC, Le Page C, et al:Tissue array analysis of expression microarray candidatesidentificates markers associated with tumorgrade and outcome inserous epithelial ovarial cancer. Int J Kanker. 119:599–607. 2006.Bekijk artikel: Google Scholar
	Roessler s, Jia HL, Budhu A, et al: Aunique metastasis gen signature maakt voorspelling van tumorrelapse in vroege fase hepatocellulair carcinoom patiënten. Kankercellen. 70:10202–10212. 2010. Bekijk artikel: Google Scholar
	Irizarry RA, Hobbs B, Collin F, et al:Exploration, normalization, and summaries of high densityoligonucleotide array probe level data. Biostatistiek. 4:249–264.2003. Bekijk artikel: Google Scholar
	Dai m, Wang P, Boyd AD, et al: Evolvinggene/transcript definitions significantly being the interpretation of GeneChip data. Nucleïnezuren res. 33: e1752005. Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Tusher VG, Tibshirani R and Chu G:Significance analysis of microarrays applied to the ionizingstration response. Proc Natl Acad Sci USA. 98:5116–5121. 2001.Bekijk Artikel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Huang ZX, Tian HY, Hu ZF, Zhou YB, Zhao Jand Yao KT: GenCLiP: a software program for clustering gen listsdoor literatuur profilering and construing gen co-occurrencenetworks related to custom keywords. BMC Bioinformatica. 9:3082008.Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Adhikary s and Eilers M: Transcriptionalregulation and transformation by Myc proteins. Nat Rev Mol CellBiol. 6:635–645. 2005. Kijkartikel : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Detre S, Saclani Jotti G and Dowsett M: A’quickscore’ method for immunohistochemical semiquantitation:validation for oestrogen receptor in breast carcinomas. J ClinPathol. 48:876–878. 1995.
	Früh MPM: EGFR IHC score for selection ofcetuximab treatment: Ready for clinical practice? Transl LungCancer Res. 1:145–146. 2012.
	Hwang LH, Lau LF, Smith DL, et al: Buddingyeast Cdc20: een doel van het spindelcontrolepunt. Wetenschap.279:1041–1044. 1998. Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Kops GJ, Weaver BA and Cleveland DW: on the road to cancer: aneuploidy and the mitotic checkpoint. Nat RevCancer. 5:773–785. 2005. Bekijk Artikel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Mondal G, Sengupta S, Panda CK, Gollin SM,Saunders WS en Roychoudhury s: overexpressie van Cdc20 leidt tot beschadiging van het controlepunt van de spindelassemblage en aneuploidizatie bij orale kanker. Carcinogenese. 28:81–92. 2007. Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Moura IM, Delgado ML, Silva PM, et al:hoge CDC20-expressie wordt geassocieerd met een slechte prognose bij oralsquamous cell carcinoma. J Orale Pathol Med. 43:225–231. 2013.Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Wu WJ, Hu KS, Wang DS, et al: Cdc20overexpressie voorspelt een slechte prognose voor patiënten met colorectale kanker. J Transl Med. 11:1422013. Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Yeong FM, Lim HH, Padmashree CG and SuranaU: Exit from mitosis in budding gist: bifasic inactivation of theCdc28-Clb2 mitotic kinase and the role of Cdc20. Mol Cell.5:501–511. 2000. Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Huang HC, Shi J, Orth JD en Mitchison TJ:bewijs dat mitotische exit een beter kanker therapeutisch doel is dan spindel assemblage. kankercel. 16:347–358. 2009. Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
Wang Z, Wan L, Zhong J, et al: Cdc20: apotential novel therapeutic target for cancer treatment. Curr PharmDes. 19:3210–3214. 2013. Bekijk Artikel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Bunz F, Dutriaux A, Lengauer C, et al:Requirement for p53 and p21 to sustain G2 arrest after DNA damage.Wetenschap. 282:1497–1501. 1998. Bekijk artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Wells J, Boyd KE, Fry CJ, Bartley SM andFarnham PJ: Target gen specificity of E2F and pocket proteinfamily members in living cells. Mol Cell Biol. 20:5797–5807. 2000.Bekijk Het Artikel : Google Scholar