wortel (Daucus carota) is een in de winter gekruide tweejaarlijkse plant die wordt geteeld voor zijn eetbare tapproot. Het is een van de meest geconsumeerde en geproduceerde groenten vanwege zijn dieet verscheidenheid in kleur, smaak, vezels en vitamine A, evenals de consumptie in zowel rauwe als gekookte vormen. Elk jaar wordt er meer dan 20 miljoen ton van geproduceerd voor menselijke consumptie.

Weefselkweekpraktijken zijn zeer populair bij het klonen van planten. De eerste studie van wortelweefsel cultuur werd gemeld in 1939 door Gautheret en Nobecourt. Echter, Steward et al. en Reinert rapporteerde de eerste studie van “wortel embryogenese”; ze probeerden de wortels te kweken met behulp van celsuspensie en eeltculturen.

somatische embryogenese is een efficiënte methode om de biochemische, fysiologische en genetische aspecten van plantencelcultuur te begrijpen en te onderzoeken.

vele studies naar de wortelweefselcultuur hebben geleid tot de ontwikkeling van een eenvoudige embryogenese-methode in wortelen. Volgens de methode, kan de groei van wortelculturen worden veroorzaakt door alleen het verwijderen van het hormoon 2,4-D uit celsuspensie culturen. Nu, wordt de wortel vaak gebruikt als experimenteel model voor de analyse van somatische embryogenese in diverse laboratoria wereldwijd.

materiaal en uitrusting die nodig zijn voor de totstandbrenging van de cultuur

gesteriliseerde materialen

• 5 broze eeltcultuur van wortel, niet verontreinigd en op 25 ℃gehouden.
• 5 erlenmeyer kolven (250 ml), die kweekmedium bevatten met 5 x 10-8 g/ml 2, 4-D.
• 5 maatcilinders (100 ml) met foliedopjes.
• 2 spatels.
• 25 vellen aluminiumfolie (100 x 100 mm).
• 2 stuks zeven van nylon of roestvrij staal met een poreusheid van 250 µm, die in de opening van de meetcilinders kunnen worden ingebracht.
• 5 petrischaaltjes.

Niet-gesteriliseerde materialen

• Waterdichte markering pen
• Rotary schudden machine
• Bunsen-brander
• 1 erlenmeyer (150 ml) met 95 % ethanol
• Parafilm

Procedure voor de opstart en Inrichting van de Cultuur

1. Neem de buizen van eelt cultuur, steriel de mond van alle 5 de buizen en de overdracht van het eelt op de petrischaal afzonderlijk (5 calli in 5 petrischalen).
2. neem een canonieke kolf van 250 ml met de kweekmedia en 2, 4-D.Breng alle 5 calli van de petrischaal naar 5 canonieke kolven, afzonderlijk.
3. vlam / steriel de mond van de kolven en dek ze af met de dop. Zet de dop vast met parafilm.
4. plaats alle kolven met de kweek op de roterende schudmachine in donkere of lage lichtintensiteit bij 25 ℃.breng na 7 dagen de kolven van het schudapparaat naar een steriele ruimte.
5. verwijder de parafilm en de foliedop van elke erlenmeyer en vlam/steriel in de mond van de kolven.breng de suspensie van elke erlenmeyer afzonderlijk over in een steriele 100 ml-cilinder door een zeef.
6. laat de inhoud gedurende 10 minuten bezinken en gooi het supernatant weg.breng de in de maatcilinder achtergebleven celresten over in een maatkolf van 250 ml met 60 ml vers medium.
7. Herhaal stap 10 voor elke cultuurkolf.
8. plaats alle vijf kolven opnieuw op de shaker.
9. herhaal na 7 dagen de procedure die u eerder hebt uitgevoerd (vanaf stap 6-10). Neem deze keer echter slechts 1 / 5de van de resterende cellen als entmateriaal.
10. herhaal de procedure ongeveer 3-4 keer. Hierdoor blijven alleen enkele cellen of kleine aggregaten over in de wortelsuspensie.
11. voor wortelcelsuspensie ligt het aantal geschikte cellen tussen 105 en 3 x 105 cellen/ml of 100 en 300 mg (vers gewicht) entmateriaal in een volume van 60 ml vers medium met media en 5×10-8 g/ml, 2,4-D.
12. een overbrengingsperiode van 7 dagen is geschikt om de wortel in de suspensiecultuur afzonderlijke cellen te laten krijgen.

Approximate Schedule of the Culture

Event	Timing (approximate)
Initiation of cell suspension and determination of total cell number and PCV (packed cell volume)	Day 0
First transfer of cultures	Day 8
Fourth transfer of cultures	Day 29

Result

What should you observe while experimenting? Hier zijn een aantal punten om te onthouden, terwijl wijzend op uw resultaten.

• datum en duur van het experiment.
• het aantal gebruikte culturen en behandelingen.
• Registreer morfologie en aantal geïnfecteerde culturen met een interval van drie weken.
• Bepaal de PCV (packed cell volume) aan het begin en het einde van de overdracht van de kweek.
• schat het totale aantal cellen na 3 subculturen, op dag 1, 2, 4 en 7, en zet een grafiek af tegen de tijd.
• onderzoek de relatie tussen de dichtheid van entmateriaal en het groeipatroon.

De suspensiecultuur biedt een voordeel ten opzichte van andere culturen omdat het de beweging van het weefsel in de kweekmedia mogelijk maakt die de uitwisseling van gassen vergemakkelijkt. Bovendien verwijdert het om het even welke polariteit van het weefsel en de voedende gradiënt binnen en bij de media.

aanbrengen van weefselkweek voor wortel

1. om de tapproots te klonen.
2. om de mutantvorm van de wortelen te bestuderen.
3. om de fysiologische reacties van de wortel te bestuderen die ook een beter begrip van andere planten kunnen vergemakkelijken.
4. om de groei en ontwikkeling van de wortel uit een enkele cel te bestuderen.
5. om de stress-respons van de wortel te bestuderen die ook inzicht geeft in de reacties van andere planten.
6. om honderden transgene planten te genereren uit de suspensie van enkele cellen voor experimentele doeleinden.

1. Reinert J. and Yeoman M. M. (1982). Plantencel-en weefselkweek: een laboratoriumhandboek. Springer-Verlag, Berlin Heidelberg, Newyork.
2. Hardegger M., Shakya R. (2004) Transformation of Carrot. In: Curtis I. S. (eds) Transgenic Crops of the World. Springer, Dordrecht. https://doi.org/10.1007/978-1-4020-2333-0_22.
3. groei en deling van wortelcellen in suspensiecultuur. (1970). Planten-en celfysiologie. DOI: 10.1093 / oxfordjournals.pcp.a074564.
4. https://www.atzlabs.com/prodcut-info/C1955-Carrot -…