Abstract
de toenemende druk van het moderne sociale leven versterkt de impact van stress op de ontwikkeling van hart-en vaatziekten, waaronder diepveneuze trombose (DVT). De nier sympathische denervatie is toegepast als één van de klinische benaderingen voor de behandeling van drug-resistente hypertensie. Bovendien is de nauwe relatie tussen oxidatieve stress en hart-en vaatziekten goed gedocumenteerd. Deze studie is bedoeld om het mechanisme te onderzoeken waardoor het renale sympathische zenuwstelsel en de oxidatieve stress het bloedstollingssysteem beïnvloeden bij de ontwikkeling van DVT. Het chronische voetschok-model bij ratten werd toegepast om een staat van fysiologische stress na te bootsen die op mensen lijkt. Onze resultaten toonden aan dat de chronische procedure van de voetschok DVT zou kunnen bevorderen die door de activering van bloedplaatjesaggregatie kan zijn. De verergering van DVT en activering van bloedplaatjes werden verlicht door renale sympathische denervatie of behandeling met antioxidanten (Tempol). Tegelijkertijd kan de denervatiebehandeling ook de niveaus van circulerende oxidatiefactoren bij ratten verminderen. Deze resultaten tonen aan dat zowel het renale sympathische zenuwstelsel als de oxidatieve stress bijdragen aan de ontwikkeling van DVT als reactie op chronische stress, wat een nieuwe strategie kan bieden voor de behandeling van DVT-patiënten in de kliniek.
1. Inleiding
diepveneuze trombose (DVT) is een veel voorkomende cardiovasculaire ziekte gerelateerde sequelae, longembolie, de derde meest voorkomende doodsoorzaak aan cardiovasculaire aandoeningen na een hartaanval en beroerte. Een langzame bloedstroom, schade aan de aderwand en een hypercoaguleerbare toestand zijn de drie belangrijkste risicofactoren voor de ontwikkeling van DVT. Daarom zijn anticoagulantia en trombolytica de twee belangrijkste behandelingen voor klinische DVT-patiënten. De triade van risicofactoren die predisponeren voor trombusvorming, gepostuleerd door Virchow, omvat veranderingen in de verhouding tussen bloedbestanddelen, de integriteit van de vaatwand en de bloedstroomsnelheid. Het bloedstollingssysteem speelt een belangrijke rol bij de bescherming van zoogdieren tegen dodelijke bloedingen. In alle vormen van trombose, coagulatie en ontsteking zijn de twee belangrijkste wegen die samenwerken om de reacties van het lichaam op letsel te coördineren .
de afgelopen decennia zijn psychologische factoren, zoals stress en depressie, erkend als belangrijke factoren die van invloed zijn op de menselijke gezondheid . Lange periodes van angst zullen de ontwikkeling van hart-en vaatziekten veroorzaken. Bovendien, door gelijktijdig te voorkomen, zullen depressie en angst de ontwikkeling van hart-en vaatziekten nog verder verergeren. Bovendien is aangetoond dat stress en andere psychologische factoren nauw verband houden met het optreden van een beroerte en een myocardinfarct . Talrijke studies hebben ook aangetoond dat stress langdurige structurele schade aan weefsels en organen kan veroorzaken . De chronische elektrische voetschok procedure is gekarakteriseerd als een model van oncontroleerbare en onvoorspelbare psychologische stress , waarvan is aangetoond dat het kan leiden tot verhoging van de systolische bloeddruk . Er is echter nog steeds geen verslag over de effecten van chronische shock op de ontwikkeling van DVT.
de rol van sympathische nierzenuw in de ontwikkeling van hypertensie is aangetoond in zowel experimentele als klinische observaties . Er zijn twee soorten sympathische nierzenuw: renale afferente zenuwen en renale efferente zenuw. De afferente sympathische vezels komen uit de nieren, en door het moduleren van de centrale sympathische uitstroom ze direct wijzigen neurogene hypertensie. Tegelijkertijd, verbetert de efferent zenuw natrium en waterbehoud, bevordert renineversie, en verandert nierbloedstroom . Op deze manier, zowel korte termijn en lange termijn bloeddruk kan worden beïnvloed door renale sympathische zenuw . Klinische studies hebben de gunstige effecten van renale sympathische denervatie gemeld bij patiënten met refractaire hypertensie . Naast het verlagende effect van denervatie op de bloeddruk zijn ook bijkomende voordelen gemeld bij hart-en vaatziekten, diabetes, nierdisfunctie , harthypertrofie, hartfalen en aritmieën . Hypertensie, een belangrijke risicofactor voor veel ziekten, kan endotheliale dysfunctie verhogen en trombose bevorderen en is ook nauw gerelateerd aan de incidentie van cardiocerebrale vaatziekten . Daarom kan renale sympathische denervatie een nieuwe strategie bieden in preventie en behandeling van hart-en vaatziekten onder hoge stressconditie.
onlangs hebben experimenten aangetoond dat oxidatieve stress verantwoordelijk kan zijn voor de verandering in endotheliale functie . De verhoogde reactieve zuurstofsoorten geproduceerd door vasculair endotheel en circulerende bloedcellen zullen de vasomotorische en endotheliale barrièrefuncties aantasten en trombusvorming bevorderen . Oxidatieve stress werd ook gevonden om een determinant van plaatjesactivering te zijn, die de risicofactor voor atherotrombose was. Of chronische stress het stollingssysteem kan beïnvloeden door oxidatieve stress te verhogen, is echter nog niet bekend.
momenteel zijn er geen meldingen die een direct verband leggen met psychologische stress met het stollingssysteem en cardiocerebrale vaatziekten. Gezien het feit dat de activering van het stollingssysteem een belangrijke invloed heeft op zowel fysiologische hemostase als pathologische trombose , hebben we voetschok stress model toegepast bij ratten om te onderzoeken of chronisch de ontwikkeling van DVT en de mogelijke betrokken mechanismen kan beïnvloeden.
2. Materialen en methoden
2.1. In dit onderzoek werd gebruik gemaakt van dierpreparaat
tien weken oude mannelijke Sprague-Dawley-ratten, verkregen uit het Shanghai Laboratory Animal Center. De dieren werden in een temperatuurgecontroleerde omgeving van 25°C gehouden met een licht-donkercyclus van 12 : 12 uur. Ratten blootgesteld aan de stress protocol werden individueel geplaatst in een foot shock stress box, waar ze een 4-uurs sessie van elektrische voet schok door een geëlektrificeerde rastervloer leveren een 5-seconde lange 0,15 mA shock elke 30 seconden. De nier sympathische zenuw van de rat werd chirurgisch doorgesneden terwijl de dieren onder een 10% chloraal hydraat-geïnduceerde anesthesie waren. Na een herstelperiode van één week werd het voetschok-protocol gestart. Tempol (10 mg/kg/dag) werd toegediend via Intraperitoneale injectie na aanvang van het stressprotocol . Veneuze trombose werd geïnduceerd onder verdoving met 10% chloraalhydraat, zoals eerder beschreven door Leung . Kort, de buik werd geopend, en de inferieure vena cava (IVC), na zorgvuldig te zijn gescheiden van de omliggende weefsels, werd strak gelig net onder de linker nierader met behulp van een katoenen draad. Vervolgens werd de buik gesloten met een dubbele laag hechtingen, waarbij eerst het buikvlies met spieren en vervolgens de huid afzonderlijk werd gesloten. Na twaalf uur werden de dieren opnieuw verdoofd, werd de buik heropend en werden het plasma en de trombus verzameld voor verdere analyse . Dit onderzoek is uitgevoerd overeenkomstig de Europese Overeenkomst inzake de bescherming van gewervelde dieren die voor experimentele en andere wetenschappelijke doeleinden worden gebruikt (nummer 123 van de Raad van Europa, Straatsburg, 1985). Alle chirurgische ingrepen werden goedgekeurd door de Soochow University en uitgevoerd in overeenstemming met de richtlijnen voor de verzorging en het gebruik van dieren vastgesteld door de Soochow University.
2.2. Plasma Corticosteronspiegels metingen
Plasma corticosteronspiegels werden gemeten met behulp van een in de handel verkrijgbare enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) kit (TSZ Elisa, USA).
2.3. Trombusgewichtmetingen
uit de heropende buikholte werd het ligated segment van de vena cava verwijderd en in de lengterichting geopend om de gevormde trombus te verwijderen, die werd gespoeld en gewogen op filtreerpapier.
2.4. Analyse van de Bloedstollingsparameters
protrombinetijd (PT), geactiveerde partiële tromboplastinetijd (APPT) en trombinetijd (TT) werden gemeten met behulp van een geautomatiseerde bloedstollingsanalysator (Sysmex Corporation CA-50, Japan). Uit de heropende buikholte werd bloed (4,5 mL) verzameld uit de inferieure vena cava met behulp van een wegwerpspuit, die 0,5 mL van een 3,8% natriumcitraatoplossing bevat, en overgebracht in geautoclaveerde centrifugebuizen. De helft van het bloed werd gecentrifugeerd bij 3000 toeren per minuut gedurende 10 minuten en het serum werd verzameld. Een 0,1 mL serum aliquot werd gecombineerd tot 0.1 mL PT-reagens. Na 20 minuten voorverwarmen werd de PT gemeten met behulp van een geautomatiseerde bloedstollingsanalysator, zoals hierboven vermeld. De APPT en de TT werden gemeten met dezelfde methode als de PT.
bloedplaatjesaggregatie werd gemeten met behulp van een bloedplaatjesaggregatie analyzer (Chrono-Log 560 Ca, Duitsland). Nadat de holte werd heropend, werd 4,5 mL bloed verzameld uit de inferieure vena cava met behulp van een wegwerpspuit met 0,5 mL natriumcitraat (3,8%) en vervolgens overgebracht naar een centrifugebuis. De tweede helft van het bloed werd gecentrifugeerd bij 1000 toeren per minuut gedurende 10 minuten om het bloedplaatjesrijke plasma te verkrijgen. Het bloed dat in de buis achterbleef, werd gedurende 10 minuten bij 3000 toeren per minuut gecentrifugeerd om het bloedplaatjesarme plasma te bereiden. Vervolgens werd de coagulatie van de plasmamonsters gestimuleerd door gebruik te maken van collageeneiwit en adenosinedifosfaatdinatrium (ADP) (1 mM, 10 mL) als bloedplaatjesagonisten.
2.5. Bepaling van Plasma Noradrenaline (NA) concentratie
Plasma noradrenaline (NA) spiegels werden gemeten met behulp van een in de handel verkrijgbare enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) kit (TSZ Elisa, USA).
2.6. Meting van Lipideperoxidatieniveaus en Plasmasuperoxide Dismutase (SOD) en glutathionperoxidase (GSH-Px) activiteit
Plasma SOD en GSH-Px activiteit en lipideperoxidatieniveaus (thiobarbituurzuur reactieve stoffen, TBARS) werden gemeten met behulp van in de handel verkrijgbare enzyme-linked immunosorbent assay (Elisa) kits (TSZ Elisa, USA).
2.7. Statistische Analyses
alle gegevens werden gepresenteerd als het gemiddelde ± SEM. De statistische significantie van de vergelijkingen tussen meer dan twee groepen werd getest met behulp van een tweerichtingsanova gevolgd door de Newman-Keuls test of met behulp van een ongepaarde tweestaart Student-test. waarden < 0,05 werden statistisch significant geacht.
3. Resultaten
3.1. Effect van Shock -, denervatie-en Tempolbehandeling op de plasma Corticosteronconcentraties
Plasma corticosteronspiegels (de marker van stress) waren aanzienlijk verhoogd in de voetschok-groep vergeleken met de controlegroep (, figuur 1) en werden duidelijk onderdrukt in zowel de denervatie plus shock-als de Tempol plus shock-groep vergeleken met de voetschok alleen-groep (, figuur 1). Dit resultaat wees erop dat chronische voet shock significant verhoogd plasma corticosterone toen het lichaam onder stress, en zowel van denervatie en Tempol behandeling kon verlichten de stress staat.
3.2. Effect van Shock -, denervatie-en Tempolbehandeling op het gewicht van IVC-ligatie-geïnduceerde trombi
trombi werden 12 uur na IVC-ligatie verzameld en gewogen. In de voetschok-groep was het trombusgewicht significant verhoogd in vergelijking met dat van de controlegroep (, Figuur 2). Het trombusgewicht van de denervatie plus shock-en Tempol plus shock-groepen bleef echter onveranderd in vergelijking met de controlegroep trombi, maar was significant afgenomen in vergelijking met de voetschok-groep trombi (, Figuur 2). Deze resultaten suggereren dat chronische shock de vorming van DVT zou kunnen vergemakkelijken, terwijl zowel denervatie als Tempol behandeling stress-geïnduceerde toename van DVT-vorming zou kunnen remmen.
(a)
b)
(a)
b)
3.3. Effect van Shock -, denervatie-en Tempolbehandeling op Bloedstollingsparameters
na bloedinzameling van de IVC werden bloedparameters (PT, APPT, TT en bloedplaatjesaggregatie) gemeten. Er was een significant verschil in de PT -, TT-en bloedplaatjesaggregatieparameters tussen de controlegroep en de voetschok-groep. De PT van de voetschok-groep was lager dan die van de controlegroep; de TT-en bloedplaatjesaggregatieparameters waren echter hoger in de voetschok-groep in vergelijking met de controlegroep. Tegelijkertijd werd een significante afname waargenomen in de TT-en bloedplaatjesaggregatieparameters van de denervatie plus shock-en Tempol plus shock-groepen vergeleken met de voetschok-groep (, Tabel 1 en Figuur 3). Deze resultaten tonen aan dat chronische shock coagulatie systeem kan verbeteren door activering van bloedplaatjesaggregatie.
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||
| PT, prothrombin time; APPT, activated partial thromboplastin time; TT, trombine tijd; versus controlegroep; versus shock groep. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||
(a)
(b)
(c)
(d)
(a)
(b)
(c)
(d)
3.4. Effect van Shock -, denervatie-en Tempolbehandeling op de plasmaconcentraties Noradrenaline (NA)
voetschok verhoogde significant de plasmaspiegels noradrenaline (na) vergeleken met de controlegroep (, Figuur 4). De plasma NA-spiegels in de denervatie plus shock-en Tempol plus shock-groep waren significant onderdrukt in vergelijking met de voetschok-groep (, Figuur 4). Deze resultaten bevestigen het succes van de renale denervatie chirurgische procedure.
3.5. Effect van Shock -, denervatie-en Tempolbehandeling op de plasma SOD-en GSH-Px-Activiteit en op Tbars-Spiegels
De plasma Sod-activiteit in de stressgroep was aanzienlijk verminderd in vergelijking met de controlegroep (, Figuur 5(a)). De plasma Sod activiteit in de denervatie plus shock en Tempol plus shock groepen was duidelijk verhoogd in vergelijking met de voet shock groep (, Figuur 5(a)).
(a)
(b)
(c)
(a)
(b)
(c)
De plasma-GSH-Px-activiteit in de voetschok-groep was ook aanzienlijk hoger dan die in de controlegroep (, Figuur 5(b)). De plasma-GSH-Px-activiteit in de denervatie plus shock-en Tempol plus shock-groepen was duidelijk verhoogd in vergelijking met de voetschok-groep (, Figuur 5(b)).
voetschok leidde tot een duidelijke stijging van de plasmaspiegels van thiobarbituurzuurreactieve stoffen (TBARS) in vergelijking met de controlegroep (, Figuur 5(c)). De plasma TBARS niveaus in de denervatie plus shock en Tempol plus shock groepen waren duidelijk onderdrukt in vergelijking met de voet shock groep (, Figuur 5(c)).
4. Discussie
In deze studie hebben we vastgesteld dat DVT-vorming wordt vergemakkelijkt onder stressomstandigheden en dat veranderingen in het bloedstollingssysteem worden veroorzaakt door stress. Het verzamelen van gegevens heeft aangetoond dat chronische psychologische stress twee systemen activeerde: een is hypothalamus-slijmachtige – bijnierschors (hPa) systeem dat hoofdzakelijk door versie van catecholamine, cortisol, vasopressin, endorfines, en aldosterone werd bemiddeld ; de andere is door activering van sympathisch-bijnier medullar systeem . Zoals uit de gegevens blijkt, waren de corticosteronspiegels van de chronische shock groep significant verhoogd, wat erop wijst dat HPA geactiveerd was. Wat is de rol van sympathische zenuwstelsel in reactie op stress? Aangezien is aangetoond dat de activering van het niersympatisch systeem sterk gerelateerd is aan de ontwikkeling van hypertensie, en nierdenervatie een nieuwe behandeling is in klinisch voor patiënten met refractaire hypertensie , moet het niersympatisch systeem een belangrijke rol spelen bij hart-en vaatziekten. Bovendien tonen recente waarnemingen aan dat hoge stressconditie sterk gerelateerd is aan hart-en vaatziekten, vooral hart-en herseninfarct; daarom speculeren we of chronische stress het coagulatiesysteem zal activeren door activering van het renale sympathische zenuwstelsel. In de huidige studie hebben we in de eerste plaats vastgesteld dat chronische stress de DVT-vorming kan aggregeren, wat suggereert dat stress het risico op hart-en vaatziekten zal verhogen. Daarnaast hebben we parameters gemeten die de activiteit van het bloedstollingssysteem bepalen, waaronder PT, APPT, TT en bloedplaatjesaggregatie. Onze gegevens toonden aan dat er een significante verandering in bloedplaatjesaggregatie was geïnduceerd door zowel ADP als collageen, wat suggereert dat het verzwarende effect van stress op DVT-vorming werd gemedieerd door activering van bloedplaatjes. Onze resultaten onthullen in de eerste plaats het mechanisme dat de hoge stress voorwaarde en hart-en vaatziekten verbindt. Hoewel onze huidige gegevens duidelijk de rol van renale sympathische zenuwsysteem in de chronische shock geïnduceerde ontwikkeling van DVT hebben aangetoond, is het moeilijk om vast te stellen of afferente of efferente zenuw een belangrijke rol speelt als gevolg van de beperking van de chirurgische procedure. We speculeren dat beide betrokken zijn bij; de reden is dat afferente zenuw neurogene controle van de bloeddruk kan beïnvloeden, wat kan bijdragen aan de ontwikkeling van DVT; en efferent zenuw kan de renale secretie van noradrenaline reguleren, wat ook kan bijdragen aan de ontwikkeling van DVT.
de aanwezigheid van beschadigd endotheel en geactiveerde stollingsfactoren of bloedplaatjes vergemakkelijkt de ontwikkeling en progressie van DVT . Bloedplaatjesaggregatie (d.w.z., wanneer bloedplaatjes zich aan elkaar hechten) optreden op plaatsen van vasculaire schade is al lang erkend als cruciaal voor trombose ontwikkeling . In dit onderzoek hebben we ons voornamelijk gericht op de functie van bloedplaatjes in DVT. De verschijnselen van bloedplaatjes adhesie, versie, of aggregatie zijn ook bekend als bloedplaatjes activering . Geactiveerde bloedplaatjes spelen een belangrijke rol in het tromboseproces. Uit onze gegevens blijkt dat de bloedplaatjesaggregatie na stressbehandeling is toegenomen, samen met de verhoging van de DVT-vorming. Het aantal bloedplaatjes werd gebruikt om de meting van de bloedplaatjesactiviteit te normaliseren; er werden echter geen statistieken over het aantal bloedplaatjes in elke groep uitgevoerd.uit onze analyses van de GSH-Px-en SOD-activiteit in het plasma, evenals de plasma-TBARS, bleek dat het lichaam in een staat van oxidatieve stress verkeert, geïnduceerd door chronische voetschok behandeling, die werd geremd door nierdenervatie. Verschillende rapporten hebben aangetoond dat nad (P)H oxidase activiteit direct kan worden verhoogd door de α1 – en β2-receptoren via de catecholamines (CA) afgegeven door de nier sympathische zenuw. Bovendien bleken β1-receptorantagonisten de vasculaire oxidatieve stress veroorzaakt door nad(P)H oxidase activering te verminderen . Daarom kunnen we zeggen dat de renale sympathische innervatie direct oxidatieve stressniveaus verhoogt. Er is gemeld dat bloedplaatjesaggregatie, een extra risicofactor voor trombus, geassocieerd is met oxidatieve stress . Oxidatieve stress kan de bloedplaatjesaggregatie direct verhogen door zuurstof – vrije radicalen op het oppervlak van de bloedplaatjes . Solide bewijs heeft aangetoond dat oxidatieve stress direct bloedplaatjes kan activeren door middel van een verscheidenheid van manieren. Aangezien het product van oxidatieve stress O2-kan reageren met bloedplaatjes of endotheel, dan geen afgeleid van ONOO-, die van bijzonder belang is voor vasculaire trombose, heeft ook dergelijke effecten. Verscheidene studies hebben aangetoond dat O2− de drempel voor bloedplaatjesactivering aan trombine, collageen, of ADP en O2 zou kunnen verminderen− kan zelfs spontane aggregatie veroorzaken . De geactiveerde bloedplaatjes konden zelfs ROS produceren; de rol van deze endogene ROS is gelijkaardig aan exogene ROS in bloedplaatjesactivering. Over het algemeen bestaan er verschillende scenario ‘ s die leiden tot stress-geïnduceerde bloedplaatjesaggregatie. In de eerste wordt de renale sympathische zenuw geactiveerd door stress, wat leidt tot een verhoogde oxidatieve stress door het hele lichaam, die vervolgens wordt gevolgd door een toename van de bloedplaatjesaggregatie. In het andere scenario, veroorzaakt de spanning direct de productie van de lichaamsoxidatieve spanning, die de plaatjesaggregatie direct verhoogt. Nier sympathische zenuw denervatie kan invloed hebben op de bloedplaatjes activering direct, echter, het mechanisme waarvan nog moet worden onderzocht.
onze gegevens toonden aan dat chronische stressbehandeling geen significant effect heeft op APPT of PT, wat suggereert dat de door stress gefaciliteerde DVT mogelijk niet geassocieerd is met het extrinsieke of intrinsieke stollingssysteem. Niettemin kon chronische stressbehandeling de TT aanzienlijk verhogen, wat erop wijst dat de omzettingstijd van fibrinogeen in fibrine verlengd was vanwege een hyperfibrinolyse. Daarom speculeren we dat fibrinolytische hyperfibrinolyse te wijten was aan een verhoogde bloedstolling onder de voorwaarde van chronische stress. Gelijktijdig, konden de nier denervatie en antioxidant behandeling bloedplaatjesaggregatie verminderen, die op zijn beurt bloedstolling onderdrukte. Op basis van onze gegevens, konden we vaststellen dat de TT neigde naar een normale snelheid in deze twee omstandigheden in vergelijking met de shock groep.
Opgemerkt dient te worden dat we in onze huidige observatie hebben vastgesteld dat Tempolbehandeling de chronische stress-geïnduceerde toename van corticosteronspiegels kan verminderen, wat wijst op de betrokkenheid van oxidatieve stress bij de hPa-activering geïnduceerde hormoonafgifte, wat erop wijst dat antioxidantbehandeling een aantal gunstige effecten kan bieden bij HAP-activering geïnduceerde orgaanletsel. We vonden echter geen verschil tussen denervatie en antioxidant Behandelingen in alle parameters, wat erop wijst dat sympathische zenuw en oxidatieve stress onafhankelijk kunnen bijdragen aan de ontwikkeling van DVT veroorzaakt door chronische shock.
concluderend kan chronische stress de bloedplaatjesaggregatie direct verhogen via de activering van de renale sympathische zenuw en de oxidatieve stress verhogen. Dan, DVT komt te worden vergemakkelijkt door de toename van bloedplaatjesaggregatie. Een aantal studies hebben aangetoond dat atherosclerose en andere hart-en vaatziekten nauw verbonden zijn met oxidatieve stress en dat patiënten vaak met lage bloed antioxidant niveaus en verhoogde niveaus van oxidatieve stress markers . Dus, met het oog op de cardiocerebrale vaatziekten en DVT, kunnen we deze ziekten voorkomen en behandelen door de therapie te richten op de hormonale en antioxidant niveaus. Daarnaast is het een nieuwe manier van therapie via renale sympathische zenuw.
belangenconflict
De auteurs verklaren geen concurrerende financiële belangen.
bijdrage van de auteurs
Guo-Xing Zhang ontwierp en ontwierp de experimenten. Tao Dong, Yu-Wen Cheng, Pei-Wen Sun en Chen-Jie Zhu voerden de experimenten uit. Fei Yang hielp met bloedplaatjesaggregatie. Guo-Xing Zhang droeg reagentia/materialen bij en analyseerde gegevens. Guo-Xing Zhang, Tao Dong en Yu-Wen Cheng schreven de krant.Dankbetuigingen de auteurs zijn Professor Li Zhu en andere leden van het Zhu laboratorium dankbaar voor experimenteel advies en bijstand. Dit werk werd ondersteund door de National Natural Science Foundation of China (81270316, 814170563) en het Onderzoeksprogramma van Soochow University (Q413400111).
