circulerende cellsEdit
de technieken die nodig zijn om geïsoleerde cellen te verkrijgen variëren afhankelijk van het vereiste celtype. Circulerende cellen zoals bloedcellen of sommige tumorcellen kunnen worden geïsoleerd door het nemen van een bloedmonster. Aangezien de bloedmonsters een mengsel van vele verschillende celtypes bevatten, moet een methode om cellen in verschillende types te scheiden worden gebruikt. De meest meestal gebruikte methode voor dit is cytometry stroom, waarbij een geautomatiseerde analysator een smalle stroom van cellen inspecteert. In één versie van deze techniek, wordt een licht op de stroom van cellen geschenen, en de analysator ontdekt het gereflecteerde licht of fluorescentie alvorens deze informatie te gebruiken om snel de cellen van belang in een inzamelingskamer te manoeuvreren.
vast weefseledit
bij de behandeling van vast weefsel kan het verkrijgen van weefsel voor celisolatie moeilijker zijn. Overtollig menselijk weefsel kan soms worden verkregen op het moment van de geplande operatie, bijvoorbeeld specimens van de rechter atriale aanhangsel worden vaak uitgesneden en weggegooid tijdens open hart chirurgie, zoals coronaire bypass chirurgie. Andere weefsels zoals monsters van alvleesklier of blaas kan worden genomen als een biopsie. Als alternatief wordt vaak weefsel van dieren verkregen door het dier te offeren.
nadat een weefselmonster is verkregen, moet het worden omgeven of geperforeerd door een oplossing bij een geschikte temperatuur die de zouten en nutriënten bevat die nodig zijn om de cellen in leven te houden. Dit kan worden uitgevoerd door simpelweg het weefsel onder te dompelen in de oplossing, of kan complexere regelingen zoals Langendorff perfusie. Veelgebruikte oplossingen omvatten modificaties van Tyrode ’s oplossing of Krebs en henseleit’ s Oplossing deze oplossingen bevatten nauwkeurige concentraties van elektrolyten, waaronder natrium, kalium, calcium, magnesium, fosfaat, chloride en glucose. De concentraties van deze elektrolyten moeten zorgvuldig worden uitgebalanceerd, met aandacht voor osmotische druk. De zuurgraad van de oplossing moet geregeld worden, vaak met behulp van een pH-buffer zoals HEPES. De isolatie van cellen uit sommige weefsels kan worden verbeterd door de oplossing van zuurstof te voorzien. In de beginfase is perfusing van het weefsel met een oplossing die geen calcium bevat nuttig, met name bij het isoleren van cardiale myocyten, omdat de afwezigheid van calcium scheiding van de tussenliggende schijven veroorzaakt.
proteolytische enzymen kunnen vervolgens aan de oplossing worden toegevoegd. Enzymen die collageen verteren (collagenases) worden vaak gebruikt bij het isoleren van cellen van het hart of de blaas. Enzymen voor algemeen gebruik die vele soorten eiwitten (proteasen) verteren, kunnen ook worden gebruikt. Bij het isoleren van cellen van hersenweefsel, kunnen andere enzymen die DNA (DNAases) afbreken nodig zijn.
deze enzymen verteren niet alleen de extracellulaire matrix, maar kunnen ook andere belangrijke eiwitten verteren die essentieel zijn voor de werking van de cellen. Als cellen te lang aan deze enzymen worden blootgesteld dan resulteert celdood, maar als ze niet lang genoeg aan de enzymen worden blootgesteld dan zal de vertering van de extracellulaire matrix niet volledig zijn. Nadat de enzymen uit het weefsel zijn verwijderd door het te perfuseren met een tweede oplossing die geen enzymen bevat, kunnen cellen mechanisch worden gescheiden of gescheiden. Een eenvoudige techniek voor het scheiden van cellen impliceert het snijden van het weefsel in kleine brok alvorens de brokken in een oplossing te roeren gebruikend een pipet.
