Coxsackievirus B3 (CVB3) is een enterovirus uit de familie Picornaviridae. Na het binden aan de coxsackievirus en adenovirus receptor (6, 64), gaat het virale RNA het cytoplasma in, waar het in één enkel polyprotein door de gastheervertalende machines wordt vertaald. Polyprotein wordt dan proteolytically verwerkt door virale proteasen om alle virale structurele en nietstructurele proteã nen te produceren. De virus-gecodeerde RNA-afhankelijke polymerase van RNA transcribeert negatieve-bundel virale RNAs, die als malplaatjes voor de synthese van veelvoudige nageslacht genomen dienen. Na de virusverpakking komt het virus vrij, mogelijk onder invloed van het virus-gecodeerde 2B-eiwit (67). Tijdens het replicatieve proces en de virale versie van het nageslacht, treedt het cytopathische effect (CPE) op en wordt de gastheercel verwond, met uiteindelijk verlies van levensvatbaarheid.

meerdere cellulaire hostprocessen worden gewijzigd tijdens picornavirus parasitisatie. Viruseiwit 2apro splijt direct eukaryotische initiatiefactor 4 gamma (eIF4G). De splitsing van deze translatieinitiatiefactor maakt niet alleen een einde aan de cap-afhankelijke mRNA-vertaling (19); men gelooft dat de splitsingsproducten de vertaling van ongecapped mRNA stimuleren, zoals het niet-cellulaire picornavirus-genoom (43), dat een nieuw intern ribosoom-ingangsmechanisme gebruikt om met de eiwitvertaling te beginnen (31,76). De proteã nen 2Apro van het Poliovirus en 3cpro zijn getoond om de Tata-bindende proteã ne te splijten, met 3cpro die ook transcriptie van de polymerasen I, II, en III van RNA afsluiten (11, 72, 74). De transcriptiefactoren TFIIIC( 10), CREB (73), en Oct-1 (75) worden ook gespleten door 3Cpro tijdens picornavirusinfectie. Van CVB3-eiwit 2B is aangetoond dat het de permeabiliteit van het endoplasmatisch reticulum en het plasmamembraan wijzigt (14), wat een verhoging van de cytosolische vrije calciumconcentratie (28, 67) en membraanlaesies veroorzaakt, wat de afgifte van de virusdeeltjes bij de nakomelingen kan vergemakkelijken. Ionische gradiënten instorten (40, 52) en de fosfolipase-activiteit is veranderd (24, 29). CVB3 infectie van HeLa cellen resulteert in tyrosine fosforylering van twee cellulaire eiwitten 4 uur na infectie, en remming van deze fosforylaties vermindert significant de productie van virale Nakomelingen (27). Het is duidelijk dat de besmetting een dynamisch cellulair proces is waarin de tijdige interactie tussen virale en gastheerproteã nen het resultaat voor zowel het virus als de gastheercellen bepalen.

Het is nu duidelijk dat cysteïneproteasen in de caspasefamilie van enzymen de belangrijkste effectormoleculen zijn bij apoptotische celdood. Eenmaal geactiveerd splitsen caspasen specifieke substraten, waaronder poly (ADP-ribose) polymerase (PARP) (35), DNA-fragmentatiefactor (dff) (37), gelsolin (34), lamin A (58), sterol regulatory element-binding proteins (68), α-fodrin (12, 66), focale adhesiekinase (71) en mdm2 (18), onder vele anderen. Dergelijke splitsingen resulteren in belangrijke veranderingen in normale homeostatische cellulaire processen en overeenkomstige celmorfologisch-structurele veranderingen.

veel virussen beschikken over biochemische mechanismen om apoptose te vermijden en/of te induceren in cellen waarin zij zich bevinden (zie referenties 49 en 60). Verschillende virussen interageren in verschillende stadia van de apoptotische doodweg. Virussen hebben strategieën ontwikkeld gericht op het FAS ligand-Fas of tumor necrosis factor Alfa (TNF-α)–TNF receptor signalisatie complex, De Bcl-2 familie van regulators, of de caspase familie van beulen (49, 60). De mechanismen van overlijden van met CVB3 geïnfecteerde cellen moeten nog worden bepaald; er is echter beperkt morfologisch bewijs met betrekking tot de inductie van apoptose in met picornavirus geïnfecteerde cellen. Uit met theilers muriene encefalitisvirus (32, 65) en poliovirus (63) verkregen gegevens is gebleken dat met het picornavirus geïnfecteerde cellen apoptose ondergaan op basis van morfologische criteria, waaronder nucleaire condensatie en DNA-fragmentatie.

om te bepalen of caspasen zijn geactiveerd en verantwoordelijk zijn voor de CPE waargenomen na CVB3-infectie, HeLa-cellen (American Type Culture Collection, Rockville, MD.) waren ofwel geïnfecteerd, bij een multipliciteit van infectie (MOI) van 5, met CVB3 (royaal verstrekt door Charles Gauntt, University of Texas Health Sciences Center, San Antonio) of sham behandeld met minimum essential medium (MEM) ontbreekt foetaal bovine serum (FBS) gedurende 45 minuten. Cellen werden gewassen met fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS), en complete MEM met 10% FBS werd vervolgens vervangen. Een positieve apoptosecontrole bestond uit HeLa-cellen die gedurende 1 uur werden behandeld met de fotosensitizer benzoporfyrinederivaat monozuurring A (BPD-MA) en vervolgens werden blootgesteld aan zichtbaar licht zoals eerder beschreven (22, 23). Culturen werden onderzocht en geoogst op 0, 1, 3, 5, 6, 7, 8, 9, 10, en 12 uur na de infectie. De cellen werden tweemaal gewassen in koude PBS en gelyseerd in 1 ml lysisbuffer (20 mM Tris , 137 mM NaCl, 10% glycerol, 1% Nonidet P-40, 1 mM fenylmethylsulfonylfluoride, 0,15 U aprotinine per ml) per cultuurgebied van 75 cm2. Na een incubatie van 20 minuten op ijs werden supernatanten verzameld na centrifugeren bij 10.000 ×g en opgeslagen bij -20°C voor verdere biochemische analyses.

het temporele productiepatroon van cvb3 virale eiwitten, Nakomelingen virus, en de evolutie van Hela cel degeneratieve morfologische veranderingen werden overwogen in combinatie met een onderzoek van gastheercel dood eiwitten. Cellysaatmonsters werden gescheiden door natriumdodecylsulfaat-polyacrylamidegelelektroforese. Eiwitten werden overgebracht naar nitrocellulose (Hybond ECL nitrocellulose membranen; Amersham). De membranen werden gedurende 1 uur bij kamertemperatuur in blokkerende buffer geïncubeerd (PBS met 0,1% Tween 20 en 5% vetvrije poedermelk). Na twee wasbeurten in wasbuffer (PBS met 0.1% Tween 20), werden de membranen geïncubeerd met antilichaam tegen CVB3 (polyclonal anti-CVB3 konijn, 1:1.000; nauwkeurige chemicaliën). De membranen werden drie keer gewassen in wash buffer en geïncubeerd met een ezel anti-konijn immunoglobuline secundaire antilichaam (Amersham). De membranen werden drie keer gewassen en de mierikswortelperoxidase geconjugeerde secundaire immunoglobulinen werden gedetecteerd door de enhanced chemiluminescence method (ECL, Amersham) en blootgesteld aan Hyperfilm (Amersham) autoradiografische film. Significante verhogingen van virale eiwitsynthese konden tussen 3 en 5 uur na de infectie worden gedetecteerd (Fig.1 ter). De virale proteasen splitsen virale evenals gastheerproteã nen vroeg na besmetting. Door immunoblotanalyse met muis monoklonaal anti-eIF4G( 1: 1.000; Transductielaboratoria) werd vastgesteld dat eif4g wordt gesplitst door virale protease 2A te beginnen binnen 1 uur na infectie, met verder verlies van detectie van het 220-kDa eiwit door 5 uur na infectie (Fig. 1C). De hoeveelheid CVB3 in de cel supernatant (vrijgegeven virus) werd bepaald op monolagen van HeLa-cellen met de agar overlay plaque assay methode zoals eerder beschreven (3). In het kort werd het supernatans van het monster tienvoudig verdund, werden de verdunningen bedekt met 90 tot 95% monolagen van HeLa-cellen in zes-putplaten (Costar) en werden de overlappende cellen gedurende 1 uur (5% CO2, 37°C) geïncubeerd. Medium met niet-gebonden virus werd verwijderd, en warme complete MEM met 0,75% agar werd bedekt in elk putje. De platen werden geïncubeerd 36 tot 48 uur (5% CO2, 37°C ), gefixeerd met Carnoy ‘ s fixeermiddel (95% ethanol–azijnzuur), en gekleurd met 1% kristalviolet. Na 6 uur na de infectie was er een waarneembare toename van het supernatant virus, en de exponentiële productie van het virus begon op 9 uur na de infectie, zoals bepaald door plaque assays (Fig. 1 bis). HeLa-cellen vertoonden duidelijke veranderingen in morfologie, met inbegrip van cellulaire condensatie, afronding, en versie van de cultuur monolaag, tussen 6 en 7 H na infectie, zoals opgemerkt door contrastmicroscopie (Fig. 1D).

om te bepalen of de gastheerceldoodmachine wordt geactiveerd na een CVB3-infectie, werd een immunoblotanalyse van lysaat uitgevoerd die op specifieke tijdstippen werd verzameld. Caspase 3, dat aanwezig is in cellen als een voorloper-eiwit met een molecuulmassa van 32 kDa, is een primaire molecule betrokken bij de uitvoering van celdood. Met behulp van muis monoklonale anti-caspase 3 (1: 1.000; Transductielaboratoria), werd vastgesteld dat niet-geïnfecteerde cellen het 32-kDa precursor eiwit bevatten. Na CVB3-infectie begon het niveau van het 32-kDa-precursor-eiwit te verminderen tussen 7 en 8 uur na infectie, en het was bijna volledig ondetecteerbaar door 12 uur na infectie (Fig.2). Om te bepalen of de verarmde pro-caspase 3 proteolytisch was verwerkt van een enkelketenzymogen tot zijn actieve tweeketenenzym, werden HeLa-cellysaten geïncubeerd met caspase 3-fluorescerende substraten zoals eerder beschreven (23). Kort, cellulaire lysaten werden geïncubeerd met reactiebuffer (20 mM Tris , 137 mM NaCl, 1% Nonidet P-40, 10% glycerol) die 100 µM caspase 3 substraat acetyl-Asp-Glu-Val-Asp–7-amino-4-methylcumarine (Ac-DEVD-AMC) (Calbiochem, Cambridge, Mass.) of Z-Asp-Glu-Val-Asp–7-amino-4-trifluormethylcumarine (Z-DEVD-AFC) (Enzyme Systems Products, Livermore, Calif.). Het reactiemengsel werd geïncubeerd bij 37°C gedurende 2 uur, en fluorescentie-excitatie van AMC of AFC bij 380 of 400 nm, respectievelijk, werd gemeten bij 460 of 505 nm, respectievelijk, met een CytoFluor 2350 cytofluormeter (Perseptive Biosystems, Burlington, Ontario, Canada). Bij gebruik van deze benadering was de caspase 3-activiteit 5 uur na de infectie duidelijk. De toename van de caspase 3-activiteit van 7 tot 10 uur na de infectie, wanneer het maximale activeringsniveau werd bereikt, werd gehandhaafd tot 12 uur na de infectie (Fig. 2). Deze protease-test toonde aan dat caspase 3 actief was in geïnfecteerde cellen en dat het in staat was andere caspasen en substraten proteolytisch te verwerken.

Caspase 3 splijt specifieke substraten bij asparaginezuur-residuen (42). PARP, een kerneiwit dat betrokken is bij DNA-herstel (13, 69), is een substraat gebleken voor geactiveerde caspase 3 en andere caspasen (35). In apoptotische cellen wordt PARP gesplitst uit een 116-kDa-eiwit, wat fragmenten oplevert van 85 en 25 kDa, bepaald met antilichamen voor respectievelijk de amino-en carboxyltermini van het eiwit. In met CVB3 geïnfecteerde HeLa-cellen was de afbraak van PARP, met het verschijnen van een fragment van 85 kDa, 9 uur na infectie detecteerbaar, met een verdere verlaging van de niveaus van het 116-kDa-peptide 10 en 12 uur na infectie, zoals bepaald door immunoblot analyse met muis monoklonaal anti-PARP (1:2.000; Biomol) (Fig. 3).

DFF is een cytosolisch eiwit dat door caspase 3 (37) kan worden gesplitst. Zodra gespleten, geeft deze proteã Ne een endonuclease vrij die aan de kern migreert, waar het DNA bij internucleosomal plaatsen kan splijten, resulterend in de fragmentatie van DNA (16). Eerder is aangetoond dat de afbraak van INTERNUCLEOSOMAAL DNA een cellulair kenmerk is van picornavirus-infectie (32). Zoals bepaald door konijn polyclonal anti-DFF (royaal verstrekt door Xiaodong Wang, University of Texas Southwestern Medical School, Dallas) te gebruiken, wordt DFF gespleten van een 45-kDa eiwit, het produceren van een 30-kDa fragment beginnend bij 9 h na infectie, met voortdurende verwerking en verlies van de 45-kDa eiwit tussen 10 en 12 h postinfection (Fig. 3).

om te bepalen of caspasen direct het karakteristieke CPE produceren dat optreedt na picornavirus-infectie of geactiveerd worden na morfologische veranderingen, werden cellen behandeld met de Algemene caspaseremmer benzyloxycarbonyl-Val-Ala-ASP-fluoromethylketon (ZVAD.fmk). Een stamoplossing (100 mM in dimethylsulfoxide) van ZVAD.fmk (Bachem) werd in volledige MEM verdund tot concentraties variërend van 0 tot 200 µM, en de verdunningen werden gedurende 30 minuten met cellen geïncubeerd voorafgaand aan infectie of lichte behandeling. Na CVB3-infectie werden de cellen gewassen met PBS, en complete MEM met 10% FBS en verse ZVAD.fmk (0 tot 200 µM) werd vervolgens vervangen. Dit peptide is getoond om de inductie van morfologische veranderingen door veelvoudige apoptotische stimuli te remmen (46, 54). ZVAD.fmk bij concentraties van 50, 100 en 200 µM blokkeerde zowel de caspase-activiteit als de splitsing van PARP en DFF in BPD-MA – en lichtbehandelde HeLa-cellen (positieve controle voor apoptose) (Fig. 4). In met CVB3 geïnfecteerde HeLa-cellen werd de splitsing van PARP en DFF gedeeltelijk voorkomen door de inhibitor bij concentraties van 50 en 100 µM (Fig. 4). Bij de hoogste concentratie van de remmer (200 µM) was er geen bewijs van PARP-of DFF-splitsingsfragmenten in met CVB3 behandelde cellen 10 uur na infectie. Caspase splitsing van structurele eiwitten zoals actine, gelsolin, Lamine B, en focale adhesiekinase is verantwoordelijk voor de morfologische veranderingen waargenomen na de inductie van apoptose (42, 45). Om 2 uur na fotoactivatie van BPD-MA werden de HeLa-cellen gecondenseerd, hadden ze uitgebreide membraanbling en kwamen ze vrij uit de monolaag (Fig.5). Bij toenemende concentraties van ZVAD.fmk, dit apoptotische fenotype was niet duidelijk, met de cellen handhaven van een morfologie vergelijkbaar met die van de controlecellen (Fig . 5). CVB3-geïnfecteerde HeLa-cellen werden gecondenseerd en kwamen vrij uit de monolaag, maar vertoonden geen membraan blebbing op 10 uur na infectie (Fig. 5). Blokkade van caspase-activiteit door ZVAD.fmk bij concentraties tot 200 µM veranderde het cytopathische fenotype niet, hoewel de splitsing van substraten (DFF en PARP) werd geremd.

een klassiek kenmerk van virussen van de familie Picornaviridae is de cellulaire CPE na infectie. Sinds de ontdekking van een extraneural celcultuurtechniek voor de vermenigvuldiging van poliovirus (17), zijn degeneratieve veranderingen in celmorfologie opgemerkt. Voor het eerst beschreven door Robbins et al. (48) in 1950 omvatten deze cytopathische veranderingen nucleaire krimp, condensatie van chromatine, cel afronding, en versie van de monolaag, met uiteindelijke progressie tot acidofiele cytoplasma, nucleaire pyknosis, en fragmentatie van het nucleaire chromatine (karyorrhexis) (47).

de recente kennis van celdoodmechanismen zet het stadium in voor onderzoek van gastheerceldoodeiwitten en hun mogelijke rol in de CPE van CVB3-infectie. Vele virussen remmen of activeren celdood, strategieën die onderscheidende aspecten van celverwonding, ontstekingsreacties, of virale persistentie overbrengen. Zoals hierboven opgemerkt, hebben de vorige picornavirusstudies de morfologische eigenschappen van apoptotic celdood, met inbegrip van celkrimp, de fragmentatie van DNA, en nucleaire condensatie (21, 32, 47) geopenbaard.

Caspase 3, een cysteïneprotease met homologie van het ceenorhabditis elegans-eiwit Ced-3 (77), wordt beschouwd als een van de belangrijkste eiwitten die betrokken zijn bij het uitvoeringsstadium van celdood. Apoptose geïnduceerd door meerdere stimuli, waaronder Fas, TNF, etoposide, staurosporine, fotodynamische therapie, ioniserende straling en terugtrekking van de groeifactor, omvat Pro-caspase 3-verwerking en daaropvolgende activering (15, 23, 30, 33, 51). Vanaf 7 tot 8 uur na de infectie met CVB3 is pro-caspase 3 uitgeput en de caspase-activeringsanalyses hebben aangetoond dat dit eiwit in zijn actieve vorm wordt gespleten. Verschillende eiwitten kunnen caspase 3 activeren, waaronder caspase 8 (via signalering via TNF-of Fas-receptoren) (55), granzyme B uit cytotoxische lymfocyten (62) en caspase 9 (via afgifte van mitochondriaal cytochroom c en assemblage van apoptotische protease-activeringsfactoren) (36). Eenmaal geactiveerd, kan caspase 3 specifieke substraten degraderen, wat op zijn beurt resulteert in structurele veranderingen en verlies van homeostatische regulatie van cellulaire processen. Talrijke proteã nen zijn getoond om door geactiveerde caspases worden gespleten. In overeenstemming met de activering van caspase 3 worden zowel PARP als DFF gesplitst na een CVB3-infectie. De activering van Caspase en de fragmentatie van DNA worden direct verbonden door de splitsing van DFF (37). DFF is een menselijke cytosolische factor die uit twee subeenheden van 45 en 40 kDa bestaat, waarvan de grootste door caspase 3 wordt afgebroken tot kleinere polypeptiden. In recente studies door enari et al. (16) gebruikend muislymfoomcellen, werd een endonuclease, caspase-geactiveerde DNase (CAD), geà soleerd. Het muriene equivalent van dff-eiwit werd geïsoleerd en genoemd inhibitor van CAD (50). Caspase 3 de splitsing van inhibitor van CAD (DFF) staat CAD nucleaire translocatie en degradatie van DNA toe. DFF wordt gesplitst vanaf 9 uur na de infectie, wat resulteert in een 30-kDa fragment (Fig. 3) die verder kan worden verwerkt tot een 11-kDa fragment (37). PARP bevindt zich in de kern en is betrokken bij DNA-reparatie. De splitsing van PARP begint bij 9 h na besmetting, die voorstelt dat zodra caspases in cytosol worden geactiveerd, zij kunnen tot kern-gelokaliseerde substraten toegang hebben.

opmerking: caspase-remming met de Algemene caspaseremmer ZVAD.fmk voorkwam de CPE veroorzaakt door CVB3 na infectie niet. Tussen 6 en 7 uur na de infectie werd de CPE duidelijk door contrastmicroscopie in ons CVB3 infectiemodel. De tijd tussen infectie en het verschijnen van de CPE, zoals waargenomen door contrastmicroscopie, was consistent bij ZVAD.fmk-concentraties van 50 tot 200 µM. Naast het niet beïnvloeden van de tijd tot CPE, ZVAD.fmk behandeling resulteerde in cellen met een morfologisch uiterlijk vergelijkbaar met dat van onbehandelde, geïnfecteerde cellen (Fig. 5). We gebruikten behandeling met BPD-MA en light als een alternatieve methode om apoptose in Helacellen te induceren (22, 23). Remming van caspase-activering met de remmer ZVAD.fmk voorkwam het apoptotische fenotype (Fig. 5). Uit deze resultaten concluderen we dat caspase activiteit en splitsing van substraten niet verantwoordelijk zijn voor de karakteristieke CPE geassocieerd met picornavirus infectie, maar in plaats daarvan worden geactiveerd na de morfologische veranderingen.

het snijpunt van de virale replicatieve cyclus en de activering van de gastheerceldoodroute moet nog worden bepaald. Picornavirusinfectie leidt al snel tot remming van cellulaire RNA-en eiwitsynthese (19, 74). Vroege studies naar relaties tussen door picornavirus geïnduceerde metabole veranderingen en door het virus geïnduceerde CPE toonden aan dat de remming van de proteïne-en RNA-synthese niet direct gerelateerd was aan celmorfologische veranderingen (4). Proteïne-en RNA-syntheseremmers vertraagde de celdood, maar de cellen vertoonden minder morfologische veranderingen dan met picornavirus geïnfecteerde cellen (5). De remming van proteã ne en RNA-synthese met één van meerdere agenten, zoals actinomycine D, puromycine, en difterietoxine, resulteert in apoptose (39). De vroege studies die in de systemen van de poliovirusbesmetting worden gedaan toonden aan dat puromycine, een inhibitor van de vertaling van virale evenals gastheerproteã nen, het begin van cytopathische veranderingen vertraagt, die suggereren dat bepaalde virale proteã nen direct cytotoxic (4) kunnen zijn. Het verhogen van de MOI leidt tot een snellere aanvang van CPE (ongepubliceerde waarnemingen), hoewel bijna alle gastheereiwitvertaling binnen 3 uur wordt uitgeschakeld bij een relatief lage MOI (25) zoals die in deze studie wordt gebruikt (MOI = 5). Onlangs is aangetoond dat het 2B-eiwit gecodeerd door coxsackievirus en poliovirus associeert met cellulaire membraanfracties, met inbegrip van het plasmalemma en endoplasmatisch reticulum, en verstoort ionenbeweging, met inbegrip van de beweging van Ca2+ aan cytosol (1, 67). Ca2 + – instroom treedt op bij apoptose (7, 44), maar het is niet duidelijk of de instroom plaatsvindt vóór of na caspase-activering. Door onderzoek van de Ionische behoeften van caspasen is vastgesteld dat de calciumionenconcentratie weinig effect heeft op de caspaseactiviteit (56). Een vroege calciuminflux na coxsackievirus-infectie kan het gevolg zijn van de invloed van het 2B-eiwit op de membraanpermeabiliteit, en de grote late calciuminflux (>6 uur na infectie) (67) kan een stroomafwaarts effect zijn van caspase-activering.

tijdens de vroege fasen van de infectie zou het voor het virus voordelig zijn om de dood van de gastheercel te remmen, waardoor een maximale productie van virale Nakomelingen mogelijk is. In de late stadia van de virale levenscyclus, zou het voor het virus ook voordelig zijn om apoptosis eerder dan necrose te veroorzaken. Een dergelijk mechanisme van dood is een potentieel middel van gastheerimmuunsysteem ontduiking door het virus tijdens zijn versie aan het omringende weefsel. Apoptose wordt gekenmerkt door de snelle fagocytose van aangetaste cellen zonder de afgifte van pro-inflammatoire cytokines (53).er is aangetoond dat

virussen interageren op verschillende niveaus van de apoptotische route. Verscheidene gammaherpesvirussen (met inbegrip van Kaposi ‘ s sarcoom-geassocieerd humaan herpesvirus 8) evenals het tumorigene molluscum contagiosum virus bevatten FLICE-inhibitory proteã nen die met het FAS-adapterproteã ne FADD in wisselwerking staan en concurreren om caspase 8 rekrutering en daaropvolgende activering te remmen (61). Expressie van het koepokkenvirus serpin CrmA blokkeert de caspase 8-gemedieerde activering van downstream caspasen zoals caspase 1 en caspase 3 (55). De IAP (voor remmers van apoptose) eiwitten vormen een familie van eiwitten, uitgedrukt door baculovirussen, die apoptose geïnduceerd door virale infectie of door caspase 1 blokkeren (78). Verder zijn verscheidene virale homologen van de Bcl-2 familie van proteã NEN ontdekt (2, 8, 20, 70). Adenovirus (9, 20, 57), het Afrikaanse varkenspest virus (41) en het Epstein-Barr virus (26, 41, 59) coderen eiwitten (respectievelijk E1B-19K, lmws-HL en BHRF1) die sequentiehomologie vertonen met pro-overlevingsgenen van de Bcl-2-familie.

de identificatie van virale eiwitten die direct apoptose induceren is niet zo uitgebreid gedocumenteerd als die van virale eiwitten die celdood remmen. Het lentiviruses menselijke immunodeficiency virus en het menselijke type 1 van het T-celleukemievirus coderen de TAT en de belasting van de transcriptieregulators, die getoond zijn om uitdrukking van FAS ligand te verhogen terwijl het verminderen van de uitdrukking van Bcl-2 familieleden (79, 80). De menselijke adenovirus-gecodeerde E1A, E3, en E4 genproducten veroorzaken celdood na uitdrukking in celcultuur. De adenovirus dood-veroorzakende genen worden uitgedrukt laat in de besmettingscyclus en overweldigen uiteindelijk de virus-gecodeerde dood-remmende genen (38).

onze gegevens tonen aan dat caspase 3-activering eerder volgt op, dan voorafgaat, door CVB3 geïnduceerde degeneratieve morfologische veranderingen in geïnfecteerde HeLa-cellen. Geactiveerde caspasen verwerken specifieke substraten, waaronder PARP en DFF. Remming van caspase-activiteit elimineert echter niet het morfologische uiterlijk (CPE) van met virus geïnfecteerde cellen, zoals bepaald door contrastmicroscopie. Caspase verwerking en splitsing van substraten kan belangrijk zijn bij de uiteindelijke verandering van normale homeostatische processen in geïnfecteerde cellen en kan de definitieve klaring van met het virus geïnfecteerde cellen vergemakkelijken. De virale proteasen 2A, 3C en 3CD kunnen specifieke structurele eiwitten splijten, resulterend in morfologische veranderingen consistent met CPE, op een manier analoog aan de actie van caspasen, die afzonderlijke substraten splitsen om een verschillend apoptotisch fenotype te bereiken.

• Copyright © 1998 American Society for Microbiology