TEKST

en rekke humane kreftformer er følsomme for mitotisk stress, noe som innebærer kontrollpunktsfeil. Mange proteiner som inneholder forkhead-associated (FHA) domener er celle syklus sjekkpunkter. For å isolere nye mitotiske kontrollpunktsgener søkte Scunnick og Halazonetis (2000) EN EST-database for cdnaer som inneholder FHA-domener. De identifiserte en cDNA de kalte CHFR for ‘checkpoint med forkhead og ringfingerdomener’ som koder for et 664-aminosyreprotein med FHA og ringfingerdomener innenfor Sin n-ende. INNENFOR sin c-ende inneholder CHFR en cysteinrik region som ikke viste signifikant likhet med noe protein I GenBank-databasen, men er sterkt bevart mellom mennesker og mus. Ved Northern blot-analyse er CHFR-uttrykk allestedsnærværende i normalt humant vev; imidlertid inneholdt 3 av 8 undersøkte humane kreftcellelinjer IKKE CHFR mRNA. Disse samme cellelinjene uttrykte IKKE CHFR-protein, bestemt ved immunoblotanalyse. Scannick Og Halazonetis (2000) viste at CHFR-genet var inaktivert på grunn av manglende ekspresjon eller ved mutasjon i 4 av 8 undersøkte humane kreftcellelinjer. Normale primære celler og tumorcellelinjer som uttrykte villtype CHFR viste forsinket inntreden i metafase når sentrosom separasjon ble hemmet av mitotisk stress. I motsetning til dette kom tumorcellelinjene som hadde mistet CHFR-funksjonen, inn i metafase uten forsinkelse. Ektopisk uttrykk for wildtype CHFR gjenopprettet cellesyklusforsinkelsen og økte cellens evne til å overleve mitotisk stress. Således konkluderte Scelnick Og Halazonetis (2000) AT CHFR definerer et kontrollpunkt som forsinker inntreden i metafase som svar på mitotisk stress.

Toyota et al. (2003) analyserte mønsteret AV CHFR-uttrykk i en rekke humane kreftcellelinjer og primære svulster. De fant CpG-metyleringsavhengig silencing AV CHFR-uttrykk i 45% av kreftcellelinjer, 40% av primære kolorektale kreftformer, 53% av kolorektale adenomer og 30% av primære hode-og nakkekreft. Ekspresjon AV CHFR var nøyaktig korrelert med Både CpG-metylering og deacetylering av histoner H3 Og H4 i Den CpG-rike reguleringsregionen. Celler med CHFR-metylering hadde en iboende høy mitotisk indeks når de ble behandlet med mikrotubuleinhibitor. Dette betyr at celler der CHFR var epigenetisk inaktivert, utgjorde tap av funksjon alleler for mitotisk kontrollpunkt. Samlet sett kaster disse funnene lys på veien der det mitotiske kontrollpunktet blir omgått i kreftceller og antyder at inaktivering av kontrollpunktsgener er mye mer utbredt enn tidligere mistenkt.

Ahel et al. (2008) identifisert en roman poly (ADP-ribose) – bindende sink finger (PBZ) motiv i en rekke eukaryote proteiner involvert I DNA skade respons og sjekkpunkt regulering. PBZ-motivet er også nødvendig for posttranslational poly (ADP-ribosyl)ation. Ahel et al. (2008) demonstrert interaksjon av poly (ADP-ribose) med dette motivet i 2 representative humane proteiner, aplf (611035) OG CHFR, og viste at HANDLINGENE TIL CHFR i antephase sjekkpunkt er opphevet av mutasjoner I PBZ eller ved hemming av poly (ADP-ribose) syntese.

Ekspresjon av det mitotiske kontrollpunktproteinet CHFR går tapt i 20 til 50% av primære svulster og tumorcellelinjer. For å undersøke om nedregulering AV CHFR bidrar direkte til tumorigenese, yu et al. (2005) genererte Chfr knockout mus. Chfr-mangelfulle mus ble funnet å være kreftutsatte, utvikle spontane svulster og ha økt hudtumorforekomst etter behandling med dimetylbenz (alfa)antracen. Chfr-mangel førte til kromosomal ustabilitet i embryonale fibroblaster og regulerte den mitotiske kinasen aurora A (603072), som ofte oppreguleres i en rekke svulster. Chfr fysisk interaksjon med aurora a og ubiquitinated aurora a både in vitro og in vivo. Yu et al. (2005) konkluderte med AT CHFR er en tumor suppressor og at den sikrer kromosomal stabilitet ved å kontrollere uttrykksnivåene av viktige mitotiske proteiner som aurora A.