Introduksjon

Hepatocellulært karsinom (Hcc) som representerer den største histologiske subtypen av primær leverkreft, er den femtedste kreft over hele verden og den tredje ledende årsaken til kreftdødelighet (1,2). De høyeste leverkreftene er funnet i utviklingsland, spesielt I Øst / Sørøst-Asiaog Midt/Vest-Afrika, mens prisene er lave I Sør-Sentral, Vest-Asia, Nord-Og Øst-Europa (3). Genetisk endring og epigenetiskhøyrisikofaktorer som kronisk infeksjon MED HBV eller HCV, levercirrhose, alkoholisk leversykdom og aflatoksiner står for høy sykelighet AV HCC (4-6).Imidlertid er den molekylære mekanismen ledsaget avhepatokarsinogenese og progresjon fortsatt stort sett uklart.Derfor er det viktig for oss å avklare etiologien og undersøke den vitalt molekylære endringen som ligger til grunn for hepatocellularcarcinoma initiering og progresjon, og til slutt forbedre våre nåværende konsepter for diagnostisering, screening og behandling av denne sykdommen.

under prosessen med hepatokarsinogenese erabrogering av cellesykluskontrollpunkter et viktig kjennetegn somkan fremme kreftdannelse (2).som en av regulatorene til cellesykluspunktet ser celldivision syklus 20 (CDC20) ut til å fungere som et regulatorisk proteinsamspill med anafasefremmende kompleks/syklosom (APC/C)i cellesyklusen, som kreves for anafaseinitiering ogsen mitoseutgang (7,8). TO regulatoriske faktorer, CDC20 Og CDH1directly binde TIL APC og aktivere sin cyclin ubiquitinationactivity under mitose og G1 fase (9,10).Det har blitt rapportert at reseptorassosiert protein 80 (RAP80), som rekrutterer BRCA1 TIL DNA-skadesteder i ubiquitinsignalveien indusert AV DNA-skade, kan nedbrytes av anafasefremmende kompleks (APC/C-Cdc20) eller (APC/C-Cdh1) gjennompolyubiquitinering under mitose til g1-fasen (11). Uttømming AV RAP80 viste adefektiv kontroll Av G2-m fase sjekkpunkt og fremmet mitoticcell syklus progresjon.CDC20-ekspresjon kan påfallende undertrykkes av p53protein som hemmer malign transformasjon gjennom regulering av cellesyklusen, cellulær senescens og apoptoserelaterte gener (12). Høy ekspresjon Av Cdc20 Er rapportert ved ulike maligne tumorer, inkludert pankreatikduktal adenokarsinom (13), oralsquamouscellekarsinom, magekreft (14), livmorhalskreft (15) og ulike kreftceller (14,16).MEN UTTRYKKET mønster AV CDC20 og dets kliniskebetydning i human leverkreft har ikke blitt avklart.

i denne studien, ved å analysere microarray datasettet(tiltredelse nr. GSE14520) Fra Genuttrykk Omnibus (GEO)database (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/) fant Vi At Cdc20 Var den viktigste noden I hcc molekylære interaksjonsnettverk. Weexamined uttrykket NIVÅET AV CDC20 i primære HCC og adjacentnon-tumor vev, og evaluert sin clinicopathologic significancei 132 arkiverte hcc prøver. Effekten Av knockdown Av Cdc20av siRNA på vekst og celle syklus av leverkreftceller varogså undersøkt. Våre funn tyder på AT CDC20 kan spille en betydelig rolle i utviklingen av HCC.

Materialer og metoder

Bioinformatikk analyse

Microarray datasett GSE14520 (17) ble lastet ned FRA GEO. Totalt 183 HCC og 179 tilsvarende parakarsinomvev som ble analysert Med Affymetrix U133A GeneChips fra kohort 2 Kinesepasienter ble brukt i denne studien. Genuttrykk profilering data ble re-oppsummert VED HJELP AV rma-metoden (18) og Entrez gen-sentriske CDF-filer (19) (i stedet for originalAffymetrix CDF-filer), som filtrerte ikke-spesifikke prober på theGeneChips og fusjonerte flere probe sett som representerer sameEntrez genet i ett probe sett. Signifikansanalyse av microarray (SAM) (20) ble utført tilidentifisere forskjellig uttrykte gener mellom HCC og tilsvarendepara-karsinomvev. Delta ble satt til 2,25, og terskelen ofFDR ble satt til 0,001. Gener overexpressed I HCC som varuttrykt i mer enn 50 HCC vev, men mindre enn 10corresponding para-carcinoma vev ble studert. Genene ble videre analysert Med GenCLiP-programvare (21) (http://ci.smu.edu.cn) for å annotere genfunksjoner og konstruere molekylære interaksjonsnettverk.

etikkerklæring

de kliniske prøvene ble brukt til forskningsformålbare. Godkjenning ble innhentet fra ethics committee Of ChinesePLA General Hospital (LREC 2012/40). Alle prøver ble samletunder betingelse av et skriftlig informert samtykke frapasienter.

Pasienter og vevsprøver

Seksten par ferske HCC og tilstøtende ikke-tumorvev som ble brukt til sanntids PCR-og western blot-analyser ble samlet under kirurgi fra Det Kinesiske PLA General Hospital(Beijing, Kina) fra November 2012 til februar 2013. Vev ble snap-frosset i flytende nitrogen til bruk. Parafin-innebygd, arkivert HCC og tilstøtende ikke-tumorvev brukt tilimmunohistokjemi (IHC) ble oppnådd fra 132 hcc-pasienter som gikk delvis leverreseksjon på samme sykehus mellom januar 2006 og desember 2007. Median alder av pasientenevar 52 år (rekkevidde 24-80 år).

Cellekultur

en normal levercellelinje (LO2) og tre hcc-cellelinjer (HepG2, SMMC7721, Huh7) ble kjøpt Fra American TypeCulture Collection (Atcc, Manassas, VA) eller Chinese Academy Ofscience Cell Bank og ble opprettholdt I Institute ofBiotechnology, Academy Of Military Medical Sciences. Alle celler ble vedlikeholdt I Dulbeccos modifiserte Eagle-medium (DMEM, Invitrogen,CA) supplert med 10% føtalt bovint serum (FBS, Gibco, Carlsbad,CA) og 2 mM l-glutamin, 100 e/ml penicillin, 100 µ/mlstreptomycin ved 37°C med 5% CO2.

rna-ekstraksjon, cDNA-syntese ogekte pcr-analyse

Totalt RNA ble ekstrahert fra cellelinjer og vevsprøver ved Bruk Av TRIzol-reagens (Invitrogen) i henhold til produsentens instruksjoner. Totalt 2 µ RNA ble reversert ved bruk Av TransScript-Og cDNA-Syntesesettet fra transgen Biotech (Beijing, Kina). Real-time PCR was performed toexamine CDC20 mRNA level in cell lines and tissue samples by usinga Bio-Rad iQ5 Multicolor Real-Time PCR Detection System (Bio-Rad,Hercules, CA). β-actin was used as an internal control fornormalization. PCR primers were designed using the Primer Premier 5software and the sequences were: CDC20 forward,5′-TCGCATCTGGAATGTGTGCT-3′; and reverse,5′-CCCGGGATGTGTGACCTTTG-3′; β-actin forward,5′-TGACGTGGACATCCGCAAAG-3′; and reverse, 5′-CTGGAAGGTGGACAGCGAGG-3′. Uttrykksdataene ble normalisert til detgeometriske gjennomsnittet av husholdnings-genet β-actin og beregnet med Δδ (22) og resultatene ble uttrykt med 2−δδ.

Western blot analyse

Western blot analyse ble utført under standard protokoll. Sds-polyakrylamidgelelektroforese (10%) ble brukt til å skille proteinet som deretter ble elektrotransferrert fra gelen til en polyvinylidenfluorid (PVDF) membran. Etter blokkering med 5% tørket skummet melk i 1 time, ble membranen inkorporert med kanin anti-human CDC20 polyclonal antistoff (1: 1000, Bioworld Technology, St. Louis Park, MN) i 1 time ved roomtemperatur. Mus anti-human α-tubulin monoklonalt antistoff (1:5000; Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) ble brukt som intern kontroll. Etter vask Med Tris-bufret saltvann medmellom-20 (TBST) tre ganger ble membranen inkubert medsekundært pepperrot peroxidase-konjugert antistoff mot rabbitor mouse (fortynning 1:5000). Kjemiluminescerende deteksjon ble utført med Immobilon Western Kjemiluminescerende HRP Substratekit (Millipore Corporation, Billerica, MA).

Immunhistokjemi (IHC) andscoring

Immunhistokjemi FOR CDC20-uttrykk I HCC og tilstøtende ikke-tumorprøver ble utført ved hjelp av standardmetoder.Kort fortalt ble vevsseksjoner inkubert med anti-Cdc20 Fortynnet 1: 200 (Bioworld-Teknologi) over natten ved 4°C. Bovint serumalbumin (1%; BSA) uten primært antistoff ble brukt som negativkontroll. Den sekundære poly-pepperrot peroxidase (HRP)anti-kanin IgG antistoff (ZSGB-Bio, Beijing, Kina) ble inkuberti romtemperatur i 20 min.

Alle de immunostained seksjonene ble gjennomgått ogscored uavhengig av to patologer på en blindet måte uten kjennskap til klinisk informasjon, basert På H-score-metoden, som vurderer fargeintensiteten sammen med prosentandelen av celler som farger positivt (23,24).For H-score-metoden ble 10 felt valgt tilfeldig ved ×400magnification. Fargeintensiteten i cellene ble scoret som 0,1, 2 og 3 tilsvarende henholdsvis negativ, svak, mellomliggende ogsterk farging. I hvert felt er det totale antallceller og celler farget ved hver intensitet ble talt. H-scoreble beregnet etter formelen: (%av celler farget ved intensitetskategori 1×1) + (%av celler farget ved intensitetskategori 2×2) + (%av celler farget ved intensitet kategori 3×3). H-scoresvariert fra 0 til 300 hvor 300 representerte 100% av cellene sterktfarget (3+) (24). Høy CDC20expression ble definert som farging H-score av celler ≥200.

Undertrykkelse AV CDC20 ved liten interferingRNA (siRNA)

Dobbeltstrenget, lite interfererende RNA (siRNA) var synthesized Og renset Av GenePharma (Shanghai, Kina). Resultatene som svarer til kodingsområdet for menneskelig CDC20were: sense, 5 ‘- GGAGCUCAUCUCAGGCCA UUU-3’; antisense, 5 ‘- AUGGCCUGAGAUGAGCUCCUU-3’. En kryptert ikke-målretting siRNA varbrukes til negativ kontroll. Disse sirnaene ble oppløst indietylpyrocarbonat (DEPC) vann for å nå en konsentrasjon på 20µ. Leverkreft HepG2 celler ble behandlet MED CDC20 siRNA ornegative kontroll siRNA i 20 nM ved Hjelp Av INTERFERin invitro siRNA transfeksjon reagens (Polyplus Transfeksjon, NewYork, NY).

Kvantitative sanntids PCR-og western blot-analyserble brukt til å oppdage interferenseffekten av siCDC20. Celler som ble ubehandlet eller behandlet med negativ kontroll sirnaoligonukleotider var kontrollgruppene.

cellulær proliferasjonsanalyse

To 25 cm2 plastflasker ble hver inokulert med 2×105 leverkreftceller (HepG2), som deretter ble transfisert med henholdsvis 20 nM negativ kontroll siRNA og CDC20siRNA for 48-timers inkubasjon. Deretter ble celler fordøydog frøet i 6-brønnplater som inneholdt 2 ml medium per brønn.Etterpå ble cellene fra en brønn fordøyd og talt avautomatisert celleteller (Invitrogen) hver 24 h til dag fem.

Fluorescensaktivert cellesortering(FACS) test av cellesyklusen

siRNA FOR CDC20 og negative kontroll sirnaoligonukleotider ble transfisert til HepG2-celler medinterferin in vitro siRNA transfeksjonsreagens i 48 timer. etter behandling med 2 µ/ml tymidin (Sigma-Aldrich, St. Louis,MO) i 24 timer ble celler høstet ved 0, 3, 6, 9, 12-h etterfjerner tymidin fra mediet og festes med 70% alkohol.Før analyser ble cellene vasket MED PBS, behandlet med 1 mg / mlRNase A ved 37°C i 30 min og deretter farget med propidiumjodid (PI). Analyser ble utført AV Bd FACSCalibur (Becton-Dickinson, Franklin Lakes, NJ) og resultatene ble analysert Av WinMDI Versjon 2.9 programvare.

Statistiske analyser

alle statistiske analyser ble gjort ved HJELP AV ibmspss 20.0 statistisk programvarepakke. Enveisanalyse av variasjon (ANOVA) ble brukt til å sammenligne UTTRYKKET FOR CDC20 mrnanormalisert TIL β-actin i cellelinjer. Den samme metoden ble også utført ved å sammenligne histologisk differensiering i tumorvev normalisert til normale leverprøver. Data sammenligninger i to grupper ble utført Av Studentens t-test. Den χ 2-testen ble brukt til å analysere forholdet MELLOM CDC20-uttrykk ogkliniskpatologiske egenskaper. Bivariate korrelasjoner mellomvariabler ble beregnet av Spearmans korrelasjonskoeffisienter.Nivået på statistisk signifikans ble satt Til P < 0,05 for alltests.

Resultater

CDC20 er hovednoden i HCC-molekylærinteraksjonsnettverk

SAM-analyse identifiserte 4358 gener overuttrykt inHCC, hvor 137 gener ble uttrykt i mer enn 50 HCC-vev, men i mindre enn 10 para-karsinomvev. GenCLiP-analyser viste at blant de 137 genene var 72 gener relatert til cellesyklusen(P=1,238 e-15, ved χ 2 test), 19 gener var relatert til spindelsammensetning (P=2,172 e-55, ved χ 2 test) og 26 gener var relatert til kromosomsegregering (P=5,472 e-55, byx2 test). BLANT de molekylære nettverk konstruert withthe 137 gener, CDC20 var den store node som ikke har beentidligere rapportert å være relatert MED HCC. Ni gener (NEK2, E2F1,BUB1, BUB1B, AURKB, CCNB1, CCNB2, UBE2C OG CDKN2A) er kjentsamhandle MED CDC20, hvor 7 gener var relatert til spindleassembly checkpoint (Sac) (Fig.1). Målet FOR SAC ER CDC20 (25). Dermed utledes vi at I HCC, overuttrykk AV CDC20 fører til fravær AV SAC, og celler rapidlybecome aneuploid.

CDC20 er overuttrykt I HCC

Kvantitativ sanntid PCR ble brukt til å undersøketranscript nivå AV CDC20 i tre hcc cellelinjer (HepG2, SMMC-7721and Huh7), og en normal lever celle linje (LO2). CDC20 mRNA-nivåvar høyere i alle de tre hcc-cellelinjene enn i normalcell-linjen (Fig. 2).

for å avgjøre om oppreguleringen avcdc20 i hcc-cellelinjer er lik HOS hcc-pasienter, utførte viquantitative real-time PCR på 16 par matchet HCC og adjacentnormalt levervev. Som vist I Fig.3A, CDC20 ble funnet å være differensielt overuttrykt i 14 av alle undersøkte humane primære hcc-prøver sammenlignet med ikke-kreftprøver fra de samme pasientene. I tillegg var tumor/ikke-tumor(t / NT) forholdet MELLOM CDC20 mRNA-uttrykk minst > 2 ganger i alle disse 14 oppregulerte prøvene, og det høyeste forholdet var til og med opp til 40 ganger. Proteinnivået AV CDC20 ble bekreftet i altde 16 parrede vevsprøver ved western blot analyse. Bilde j1.47v-programvare ble brukt til å kvantisere det grå nivået av hvert bånd og beregne CDC20 T / NT-forholdet for hver pasient som normaliserte witha-tubulin. Resultatene viste at alle undersøkte hcc-prøver viste ahøyere uttrykksnivå FOR CDC20-protein unntatt prøve 1 og prøve4, som var i samsvar med mRNA-nivået (Fig. 3B). Disse funnene indikerte atcdc20 ble vanligvis oppregulert i ENTEN HCC vev eller cellelinjer.

immunhistokjemi farging Av CDC20protein

Immunhistokjemi (IHC) ble utført for å analysereproteinuttrykk og lokalisering AV CDC20 i 132paraffin-innebygde arkiverte hcc-vevsprøver, inkludert 14 tilfeller av godt differensiert, 78 tilfeller av moderat differensiert og 40 tilfeller av dårlig differensierte svulster. CDC20-protein ble oppregulert (h-score ≥200) i 90 (68,18%) av 132 HCC-vev. Som vist inFig. 4A, høye NIVÅER AV CDC20 var tilstede i primære hcc lesjoner og positiv farging mainlylocalized i cytoplasma og kjerner. I kontrast VAR CDC20NEGATIVT eller svakt farget i tilsvarende ikke-tumorvev. Vedkvantitativt å sammenligne scorene TIL CDC20-farging mellom 132archived HCC og tilstøtende ikke-tumorvev (hovedsakelig inkluderthepatocirrhosis og hepatitt), var scorene TIL CDC20-farging signifikant økt i hcc-prøver sammenlignet med peritumoralprøver (Fig . 4B). I tillegg ble resultatene AV CDC20-farging betydelig økt sammen medprogresjonen av tumorhistologisk differensiering fra godt tildårlig differensiert vev(Fig.5).

Korrelasjon mellom økt CDC20expression og klinikopatologiske parametere FOR HCC

forholdet MELLOM CDC20 proteinekspressionog de klinikopatoligiske egenskapene til 132 hcc-pasienter varvidere analysert. Som oppsummert I Tabell i var CDC20-uttrykket signifikant assosiert med kjønn (P=0,013), tumordifferensiering (P=0,000), TNM-stadium (P=0,012), P53 og Ki-67uttrykk (p=0,023 og p=0,007). Det ble imidlertid funnet en nostatistisk signifikant sammenheng mellom Høy Cdc20-Ekspresjon og andre kliniske patologi, inkludert alder, tumorstørrelse, hbv-infeksjon, SERUM AFP-nivå,levercirrhose, vaskulær invasjon og intra/ekstra levermetastase. Spearmancorrelasjonsanalyse viste at høyt uttrykk FOR CDC20 var nært relatert til kjønn (R=0,215, P=0,013), dårligere tumordifferensiering (R=0,421, P<0,001), avansert tnm-staging(R=0,218, P=0,012), høyere ekspresjonsnivå for p53 (R=0,212,p=0,014) og ki-67 (R=0,235, p=0,007) (Tabell Ii). Samlet sett viste disse resultateneindikerte AT CDC20 var sterkt uttrykt I HCC-vev og dets uttrykk nært korrelert med differensiering ogprogresjon AV HCC.

Undertrykkelse AV CDC20 uttrykk bysiRNA

den kvantitative pcr i sanntid avslørte 90% transkripsjonsnivå undertrykkelse AV CDC20 ved 48 timer ettertransfeksjon med siCDC20, sammenligning med ubehandlet celler eller cellertransfected med negativ kontroll sirna (fig. 6A) (P <0,0001). Western blotanalysen viste også en åpenbar suppresjon AV CDC20 protein nivå 48 h etter transfeksjon med siCDC20 (Fig. 6B). Endret ekspresjon av cyklinavhengig kinasehemmer 1a (p21) protein ble også undersøkt ved western blot-analyse, og resultatene viste at p21proteinnivået var bemerkelsesverdig oppregulert på GRUNN AV SUPPRESJON AV CDC20(Fig . 6B).

EFFEKT AV cdc20-undertrykkelse på cellespredning og cellesyklusen

celleproliferasjonsanalyse viste at celleveksten AV CDC20 siRNA-transfiserte celler var bemerkelsesverdig hemmetsammenlignet med cellene transfisert med negativ kontroll siRNA(Fig. 6C). Hemming av cellespredning ved siCDC20 var forventet å være ledsaget av arrest ved metafase i cellesyklusen. Ved flowcytometri-test ble det observert et økt antall celler I g2/m-fasen i sicdc20-transformerte celler sammenlignet med celler transfisert med negativecontrol siRNA (Fig. 6D). Disse dataene indikerte at undertrykkelse AV CDC20 hemmet cellevekst ved å indusere g2 / m fasestans.

Diskusjon

gjennom bioinformatikk analyse av en microarraydataset FRA GEO database, identifiserte VI CDC20 som var majornode I hcc molekylære interaksjonsnettverk, det var relatert medspindel assembly checkpoint (SAC) i celle syklus. Under tumorgenese, defekter eller forstyrrelser i spindelmonteringencheckpoint ble antatt å være ansvarlig for den økte frekvensen avaneuploidisering (26). Mondalet al har rapportert AT CDC20 er overuttrykt i primære hode-og nakkesvulster og flere orale plateepitelkarsinom (OSCC) cellelinjer. Høyt uttrykksnivå FOR CDC20 i OSCC-celler erforbundet med for tidlig anafasefremmende, noe som fører til mitotiskabnormaliteter (27). Studier har også vist at HØYT CDC20-uttrykk oppdages i oralsquamous cellekarsinom og kolorektal kreftvev, og dets overuttrykk kan forutsi en dårlig prognose for pasienter (28,29).

CDC20 er også nødvendig for sen anafaseceller for å gå ut av mitose (30). Målrettingcdc20 resulterer i blokkering av mitoseutgang, noe som kan være en bedre kreftterapeutisk strategi for å drepe kreftceller mer effektivt enn spindelforstyrrende stoffer (31). Wang et al rapporterte atcdc20, som kan fungere som et onkoprotein for å fremme utvikling og utvikling av humane kreftformer, representerer et lovende terapeutisk mål (32). Thoughthe rolle CDC20 i tumorigenesis og prognose av flere humanancancers har blitt dypt undersøkt og bekreftet, begrenset studieshave undersøkt potensiell funksjon AV CDC20 i initiationand progresjon av leverkreft.

i denne studien vurderte vi ekspresjonsnivået forcdc20 i 16 parede friske frosne HCC-vev og tilsvarendeikke-tumorprøver. Resultatene indikerte at gjennomsnittlig mRNA ogproteinnivå AV CDC20 i hcc-vev var mye høyere enn inmatched ikke-tumorvev. Immunhistokjemi ble brukt tilundersøkelse av DEN subcellulære plasseringen AV CDC20 og densforhold til kliniske patologiske parametere AV HCC patients.By ved bruk av χ 2-test fant vi at høyere CDC20-proteinekspresjonsnivå var assosiert med kjønn, tumordifferensiering, TNM-stadium, P53 og Ki-67-uttrykk. For å undersøke potensialbiologisk funksjon OG molekylær mekanisme AV CDC20 I HCC, wedesignet en dobbeltstrenget, liten forstyrrende RNA (siRNA) targetingCDC20 for å forstyrre sitt uttrykksnivå i HepG2 cellline. Ved celleproliferasjonsanalyse og FACS-test fant vi at celler transfisert med siCDC20 oligonukleotider viste redusert veksthastighet og økt andel celler I G2/M stadium.

den spesifikke knockdown AV CDC20 av siRNA viste asuppressert effekt mot leverkreftcelleproliferasjon invitro, noe som indikerte at OVERUTTRYKK AV CDC20 kan forventes å akselerere celleproliferasjon og fremme tumorinitiering og progresjon AV HCC. Leverkreftceller med nedsatt CDC20-ekspresjon ble indusert til å akkumulere inG2 / m-fase, noe som kan være ansvarlig for hemming av cellevekst. Syklinavhengig kinasehemmer 1A (p21) som er kjent for å delta I g2/M-kontrollpunktet (33), ble vist å være oppregulert når CDC20-uttrykket ble spesifikt undertrykt i leverkreftceller. P21 kan hemme Aktiviteten Til CDKs som fører tilakkumulering av ikke-fosforylert rb-tumorsuppressorprotein, somhindrer transkripsjonell aktivering AV E2F og senerehindrer innføring av cellene I s-fasen av cellesyklusen (34).som konklusjon er dette den første studien rettet mot å undersøke CDC20-uttrykk i HCC-vev og cellelinjer, noe som gir et nytt fokus på AT CDC20 kan være en klinisk relevant indikator og apromising terapeutisk mål FOR HCC. Likevel, videre studier fokusert PÅ MOLEKYLÆRE mekanismer AV CDC20 i initiering ogprogresjon AV HCC og forskning på prognostisk betydning avcdc20 er nødvendig.

Bekreftelser

forfatterne takker sine kolleger frainstitutt For Bioteknologi Ved Academy Of Military MedicineSciences for deres tekniske støtte.

	Parkin DM: Global cancer statistics in theyear 2000. Lancet Oncol. 2:533–543. 2001.PubMed/NCBI
	El-Serag HB and Rudolph KL: Hepatocellularcarcinoma: epidemiology and molecular carcinogenesis.Gastroenterology. 132:2557–2576. 2007. View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Jemal A, Bray F, Senter MM, Ferlay J, WardE Og Forman D: Global kreftstatistikk. CA Kreft J Clin.61:69–90. 2011. View Article : Google Scholar
	Severi T, van Malenstein H, Verslype C andvan Pelt JF: Tumorinitiering og progresjon i hepatocellulærkarsinom: risikofaktorer, klassifisering og terapeutiske mål.Acta Pharmacol Sin. 31:1409–1420. 2010. Vis Artikkel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Michielsen P Og Ho E: Viral hepatitt Band hepatocellulært karsinom. Acta Gastroenterol Belg. 74:4–8.2011.
	McGivern DR Og Sitron Sm: virusspesifikke mekanismer for karsinogenese i hepatitt c-virus assosiert leverkreft. Onkogen. 30:1969–1983. 2011. Vis Artikkel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Fung tk og Poon RY: En berg-og dalbane ridewith mitotic cyclins. Semin Celle Dev Biol. 16:335–342. 2005.View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Weinstein J, Jacobsen FW, Hsu-Chen J, Wu Tand Baum LG: et nytt pattedyrprotein, p55CDC, som er tilstede i dividingcells er assosiert med proteinkinaseaktivitet og har homologitil saccharomyces Cerevisiae CELLEDELING syklus proteiner cdc20og cdc4. Mol Celle Biol. 14:3350–3363. 1994.
	Peters JM: Cellebiologi: sjekkpunktbremsen lettet. Natur. 446:868–869. 2007. View Article : Google Scholar: PubMed/NCBI
	Fang G, Yu H og Kirschner MW: Directbinding AV CDC20-proteinfamiliemedlemmer aktiverer anafasefremmende kompleks i mitose og G1. Mol Cell. 2:163–171.1998. Vis Artikkel: Google Scholar : PubMed/NCBI		Cho HJ, Lee EH, Han SH, et al: Nedbryting av human RAP80 er cellesyklus regulert Av Cdc20 Og Cdh1 ubiquitinligaser. Mol Kreft Res. 10: 615-625. 2012. View Article : Google Scholar: PubMed/NCBI		Kidokoro T, Tanikawa C, Furukawa Y,Katagiri T, Nakamura Y Og Matsuda K: CDC20, et potensielt kreftterapeutisk mål, er negativt regulert av p53. Onkogen.27:1562–1571. 2008. Vis Artikkel: Google Scholar : PubMed/NCBI		Chang DZ, Ma Y, Ji B, et al: Øktcdc20-uttrykk er assosiert med pankreatisk ductaladenokarsinom differensiering og progresjon. J Hematol Oncol.5:152012. View Article : Google Scholar: PubMed/NCBI		Kim JM, Sohn HY, Yoon SY, Et al.: Identifisering av gastrisk kreftrelaterte gener ved hjelp av en cDNAmicroarray som inneholder nye uttrykte sekvensmerker uttrykt ingastriske kreftceller. Clin Kreft Res. 11: 473-482. 2005.PubMed/NCBI
	Espinosa AM, Alfaro A, Roman-Basaure E, etal: Mitose er en kilde til potensielle markører for screening ogoverlevelse og terapeutiske mål i livmorhalskreft. PloS One.8:.PubMed/NCBI
	Ouellet V, Guyot MC, Le Page C, et al.: Vev array analyse av uttrykk microarray kandidateridentifiserer markører assosiert med tumor klasse og utfall inserous epitelial eggstokkreft. Int J Kreft. 119:599–607. 2006.View Article : Google Scholar
	Roessler S, Jia HL, Budhu A, et al. Aunique metastase gen signatur muliggjør prediksjon av tumorrelapse hos pasienter med tidlig stadium hepatocellulært karsinom. Kreft. 70:10202–10212. 2010. Vis Artikkel: Google Scholar
	Irizarry RA, Hobbs B, Collin F, et al.: Utforskning, normalisering og sammendrag av høy densityoligonukleotid array sonde nivå data. Biostatistikk. 4:249–264.2003. Vis Artikkel: Google Scholar
	Dai M, Wang P, Boyd AD, et al. Nukleinsyrer Res. 33: e1752005. Vis Artikkel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Tusher VG, Tibshirani R Og Chu G:Signifikansanalyse av mikroarrays anvendt på ioniseringstrålingsresponsen. Proc Natl Acad Sci usa. 98:5116–5121. 2001.Vis Artikkel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Huang ZX, Tian HY, Hu ZF, Zhou YB, Zhao Jand Yao KT: GenCLiP: et program for gruppering av genlisterav litteratur profilering og konstruksjon av genforekomstnettverk relatert til tilpassede søkeord. BMC Bioinformatikk. 9:3082008.Vis Artikkel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Adhikary s og Eilers M: Transcriptionalregulering og transformasjon av Myc-proteiner. Nat Rev Mol CellBiol. 6:635–645. 2005. ViewArticle : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Detre S, Saclani Jotti G and Dowsett M: A’quickscore’ method for immunohistochemical semiquantitation:validation for oestrogen receptor in breast carcinomas. J ClinPathol. 48:876–878. 1995.
	Früh MPM: EGFR IHC score for selection ofcetuximab treatment: Ready for clinical practice? Transl LungCancer Res. 1:145–146. 2012.
	Hwang LH, Lau LF, Smith DL, Et al.: Buddingyeast Cdc20: et mål for spindelkontrollpunktet. Science.279:1041–1044. 1998. View Article: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Kops GJ, Weaver BA og Cleveland DW: veien til kreft: aneuploidy og det mitotiske kontrollpunktet. Nat RevCancer. 5:773–785. 2005. ViewArticle: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Mondal G, Sengupta S, Panda Ck, Gollin SM,Saunders WS Og Roychoudhury S: Overuttrykk Av Cdc20 fører tilimpairment av spindelmonteringscheckpunktet og aneuploidiseringi oral kreft. Karsinogenese. 28:81–92. 2007. Vis Artikkel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Moura IM, Delgado ML, Silva PM, et al.: HØYT CDC20-uttrykk er forbundet med dårlig prognose ved oralsquamous cellekarsinom. Oral Pathol Med. 43:225–231. 2013.Se Artikkel: Google Scholar: PubMed/NCBI		Wu WJ, Hu KS, Wang DS, Et al.: CDC20overexpression forutsier en dårlig prognose for pasienter medcolorektal kreft. J Transl Med. 11:1422013. View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI		Yeong FM, Lim HH, Padmashree CG og SuranaU: Utgang fra mitose i spirende gjær: bifasisk inaktivering av theCdc28-Clb2 mitotisk kinase og rollen som cdc20. Mol Cell.5:501–511. 2000. Vis Artikkel : Google Scholar: PubMed/NCBI		Huang HC, Shi J, Orth JD OG Mitchison TJ: Bevis på at mitotisk utgang er et bedre kreftterapeutisk målenn spindelmontering. kreftceller. 16:347–358. 2009. Vis Artikkel: Google Scholar : PubMed/NCBI		Wang Z, Wan L, Zhong J, Et al: Cdc20: apotensielt nytt terapeutisk mål for kreftbehandling. Curr PharmDes. 19:3210–3214. 2013. Vis Artikkel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Bunz F, Doutriaux A, Lengauer C, et al.: Krav til p53 og p21 for å opprettholde g2 arrest etter DNA-skade.Science. 282:1497–1501. 1998. View Article : Google Scholar: PubMed/NCBI
	Wells J, Boyd KE, Fry CJ, Bartley sm andFarnham PJ: Målgen spesifisitet AV e2f og lommeproteinfamiliemedlemmer i levende celler. Mol Celle Biol. 20:5797–5807. 2000.Se Artikkel : Google Scholar